一種核酸適配體及其在潛指紋顯現中的應用的制作方法

本發明涉及一種核酸適配體及其在潛指紋顯現中的應用。

背景技術：

指紋識別技術作為一種生物識別技術受到研究人員的極大關注，其中對于潛指紋的顯現尤為重要。潛指紋不同于可見指紋和立體指紋，肉眼不可見，但卻是案發現場最常見的一類指紋，因此對此類指紋的顯現成為指紋工作者的最基礎工作。目前已經有許多方法可以對潛指紋進行顯現(顯影)工作，比如粉末法、502熏顯法、茚三酮染色法以及真空鍍膜法等，但是這些方法仍然存在著靈敏度低，對某些疑難客體(表面)上指紋顯現不適用，背景干擾大等缺點。因此，迫切需要提出新的更靈敏方法對不同客體上的潛指紋進行顯現。

近年來，適配體(aptamer)在生物化學領域得到了廣泛的應用。適配體是一種單鏈dna或rna，具有高度的選擇性和吸附性，適配體在生物醫學領域的疾病檢驗診斷及成像方面，已經逐漸成為一種重要技術，而在法庭科學領域尤其是指紋顯現領域，適配體技術尚未得到應用。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種核酸適配體及其在潛指紋顯現中的應用。

本發明提供了一種指紋顯現的方法，包括如下步驟：將指紋顯色試劑工作液加至待測指印上，反應；所述指紋顯色試劑工作液由所述指紋顯色試劑和溶劑組成；所述指紋顯色試劑是對溶菌酶適配體進行熒光基團標記得到的。

所述反應的條件具體可為：37℃恒溫靜置反應1小時。

所述溶劑具體可為pbs緩沖液。所述pbs緩沖溶液的ph值為7.2-7.4。所述pbs緩沖溶液具體可為1×pbs緩沖液。

所述指紋顯色試劑工作液中含有濃度為11.1od/l的指紋顯色試劑。

所述反應在避光下進行。

所述指紋顯色試劑是在溶菌酶適配體末端標記fam熒光基團得到的。

所述末端可為3’末端或5’末端。所述末端具體為5’末端。

所述溶菌酶適配體為序列表的序列1所示的單鏈dna分子。

所述方法還包括如下步驟：所述反應完成后，拍照，獲得指紋圖像。

所述方法還包括如下步驟：所述反應完成后，將待測指印上的指紋顯色試劑工作液甩掉(也可使用pbs緩沖液洗脫一次)并室溫放置至手印完全干燥，拍照，獲得指紋圖像。

以上任一所述拍照具體采用的拍照裝置可為dcs4照相裝置。

以上任一所述所述拍照是在如下參數下進行的：470nm激發光激發。

以上任一所述所述拍照是在如下參數下進行的：470nm激發光激發，用530nm長通濾色片濾除激發光。

以上任一所述所述拍照是在如下參數下進行的：470nm激發光激發，用530nm長通濾色片濾除激發光，采用1-3s曝光時間。

所述方法還包括如下步驟：“將指紋顯色試劑工作液加至待測指印上”之前，用免疫組化筆將所述待測指印圈起。

所述方法還包括如下步驟：“將指紋顯色試劑工作液加至待測指印上”之后，將承載有待測指印的客體采用石蠟封口膜密封并用錫箔紙包裝，再進行所述反應。

本發明還保護一種指紋顯色試劑，是對溶菌酶適配體進行熒光基團標記得到的。

所述指紋顯色試劑是在溶菌酶適配體末端標記fam熒光基團得到的。

所述末端可為3’末端或5’末端。所述末端具體為5’末端。

所述溶菌酶適配體為序列表的序列1所示的單鏈dna分子。

本發明還保護溶菌酶適配體或所述指紋顯色試劑在指紋顯現中的應用。

所述溶菌酶適配體為序列表的序列1所示的單鏈dna分子。

本發明還保護一種用于指紋顯現的系統，包括以上任一所述指紋顯色試劑。

所述系統還包括免疫組化筆。

所述系統還包括記載有以上任一所述方法的說明書。

所述系統還包括拍照裝置。

所述拍照裝置可為dcs4照相裝置。

本發明還保護一種獲取指紋圖像的系統，包括以上任一所述指紋顯色試劑和拍照裝置。

所述拍照裝置可為dcs4照相裝置。

所述系統還包括免疫組化筆。

所述系統還包括記載有以上任一所述方法的說明書。

溶菌酶是已知一種在人類汗液中也即指紋成分中廣泛存在的多肽。本發明將綁定溶菌酶的適配體的5′端連接羧基熒光素(fam)作為指紋顯色試劑(lysosomebindingaptamer-fam，lba-fam)。lba-fam對手印物質中的溶菌酶具有高度的選擇性和結合性，其結合手印紋線后，其連接的熒光素在合適的光源激發下，能夠發出明亮的熒光從而將手印顯現出來。本發明提供的潛指紋顯現方法具備如下優點：(1)靈敏度高；(2)具有高度選擇性，只針對手印中的溶菌酶反應，不與背景物質反應；(3)與現有技術相比，本發明提供的技術方法適用于多種客體上的手印顯現；(4)本方法所用試劑無毒害，對使用人員的健康安全沒有潛在威脅。

附圖說明

圖1為nc膜上的新鮮手印顯現效果。

圖2為錫箔紙上的遺留時間為一周的手印顯現效果。

圖3為錫箔紙上的新鮮手印顯現效果。

圖4為瓷磚上的新鮮手印顯現效果。

圖5為載玻片上的新鮮手印顯現效果。

圖6為復印紙上的新鮮手印顯現效果。

具體實施方式

以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結果取平均值。

1×pbs緩沖液(ph為7.2-7.4)：北京索萊寶科技有限公司。

免疫組化筆：北京索萊寶科技有限公司。

dcs4照相裝置：英國foster-freeman公司生產，北京瑞源科技有限公司經銷。

實施例1、指紋顯色試劑的制備

指紋顯色試劑為熒光標記的溶菌酶適配體。

溶菌酶適配體如下所示：

5'-atcagggctaaagagtgcagagttacttag-3'(序列表的序列1)。

在溶菌酶適配體的5′端采用fam熒光基團修飾，得到所述指紋顯色試劑(lba-fam)。

實施例2、潛指紋顯現方法的建立

一、制備lba-fam工作液

將1od的實施例1制備的指紋顯色試劑(lba-fam)溶解于30μlpbs緩沖液，得到儲存液。將10μl儲存液加至30mlpbs緩沖液中，得到lba-fam工作液(工作液中lba-fam的濃度為11.1od/l)。

二、潛指紋顯現

1、測試者分別在不同客體(載玻片、塑料、膠帶粘面、復印紙、牛皮紙、卡片紙、鋁箔、陶瓷制品、瓷磚、錫箔紙、nc和pvdf膜)上留手印。手印留待不同時間(24h或1周)后進行試驗。

2、對步驟1留有手印的不同客體進行檢測，依次按照如下步驟操作：

(1)在客體上使用免疫組化筆將手印圈起；用一次性滴管將步驟一制備的lba-fam工作液滴加到手印上面(至工作液完全覆蓋手印即可)；

(2)將客體采用paraffin封口薄膜密封并用錫箔紙包裝，37℃恒溫放置1小時；

(3)將客體上的lba-fam工作液輕輕甩掉(也可使用pbs緩沖液洗脫一次)并室溫放置至手印完全干燥；

(4)使用dcs4照相裝置拍照，采用470nm激發光激發，用530nm長通濾色觀察并拍照，一般采用較長曝光時間(1-3s)獲得指紋圖像。

部分結果如圖1-圖6所示。結果表明，lba-fam顯現指紋效果具有高度專一性和靈敏性，適用于多種客體上手印顯現，并且具有顯現多種疑難客體上手印的潛力。

<110>公安部物證鑒定中心

<120>一種核酸適配體及其在潛指紋顯現中的應用

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<211>30

<212>dna

<213>人工序列

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<400>1

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