一種丹綠補腎膠囊的薄層色譜鑒別方法與流程

本發明屬于藥物分析技術領域，更具體地說，是涉及一種丹綠補腎膠囊的薄層色譜鑒別方法。

背景技術：

在防病治病方面，中藥復方提取制劑占據著重要的位置，中藥提取之后，其植物組織已不符存在，顯微鑒別亦無能為力，所以其質量控制方法都是以各種有效成分為指標，進行薄層鑒別與含量測定。但在各類國家質量標準中，薄層鑒別多是處理一個樣品溶液，一塊薄層板，展開一次，一種顯色劑，鑒別一味藥材。為排除干擾，樣品的前處理程序多復雜、煩瑣，需用大量的有機試劑反復純化處理，費力、費時、費試劑、污染環境，危害健康，檢測周期長。檢測速度嚴重制約著中藥現代化生產速度。所以尋找簡便、快捷的檢測方法、提高檢測效率、降低檢測成本，成為中藥質量控制必須突破的難關。

丹綠補腎膠囊(國藥準字z20025620)是由白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜5味藥組成的中成藥制劑，為云南神威施普瑞藥業有限公司的獨家品種。中醫補腎滋陰壯陽。用于陰陽兩虛所致陽痿遺精，腰膝酸軟，身體乏力。2013年本品標準地標升國標由試行標準ws-10436(zd-0436)-2002轉為正式標準ws-10436(zd-0436)-2002-2012z。

丹綠補腎膠囊執行的現行國家藥品標準ws-10436(zd-0436)-2002-2012z中薄層鑒別包括白花丹、綠包藤及胡椒堿的鑒別，需要分別制備供試品溶液，其中用到丙酮、乙醚等易制毒試劑處理供試品，并且處理方法涉及到浸漬24h及加熱回流等方式。該鑒別過程復雜、繁瑣，耗費較多人力、物力、時間。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種丹綠補腎膠囊的薄層色譜鑒別方法，旨在解決供試品溶液制備過程復雜，所用試劑毒性大，且鑒別過程復雜、繁瑣的問題。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種丹綠補腎膠囊的薄層色譜鑒別方法，所述丹綠補腎膠囊由白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜制備而成，取所述丹綠補腎膠囊內容物0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過濾，濾液即為包含白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液；

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對照藥材0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過濾，濾液即為白花丹對照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和白花丹對照品溶液各2-10μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以石油醚-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁乙醇溶液，加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；得到的所述供試品色譜中，在與所述白花丹對照品溶液的色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對照藥材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超聲處理15-60min，過濾，濾液即為綠包藤對照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和綠包藤對照品溶液各2-10μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，得到的所述供試品色譜中，在與所述綠包藤對照品溶液的色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對照藥材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超聲處理15-60min，過濾，濾液即為射干對照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和射干對照品溶液各2-10μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；得到的所述供試品色譜中，在與所述射干對照品溶液的色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含4.8-5.2mg胡椒堿對照品的溶液，即為胡椒堿對照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和胡椒堿對照品溶液各2-10μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；得到的所述供試品色譜中，在與所述胡椒堿對照品溶液的色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

優選地，所述石油醚-三氯甲烷-甲醇展開劑中，按照體積比為石油醚：三氯甲烷：甲醇＝6-10：3-5：0.5-2。

優選地，所述正己烷-乙酸乙酯展開劑中，按照體積比為正己烷-乙酸乙酯＝6-10：0.5-2.5。

優選地，所述三氯甲烷-丁酮-甲醇展開劑中，按照體積比為三氯甲烷-丁酮-甲醇＝2-4：0.5-2：0.5-2。

優選地，所述環己烷-乙酸乙酯-甲醇展開劑中，按照體積比為環己烷-乙酸乙酯-甲醇＝8-10：1-4：0.5-2。

優選地，所述供試品溶液、白花丹對照品溶液、綠包藤對照品溶液、射干對照品溶液、胡椒堿對照品溶液制備過程中甲醇的體積濃度均為90-100％。

優選地，所述供試品溶液、白花丹對照品溶液、綠包藤對照品溶液、射干對照品溶液制備過程中超聲處理功率均為50-600w、頻率均為20-50khz。

優選地，所述三氯化鋁乙醇溶液的密度為2-5％，所述磷鉬酸乙醇溶液的密度為8-12％。

優選地，所述白花丹、綠包藤所用的硅膠g薄層板的加熱溫度均為100-110℃。

優選地，所述石油醚的沸程為30-60℃。

本發明提供的一種丹綠補腎膠囊的薄層色譜鑒別方法的有益效果在于：與現有技術相比，本發明供試品與對照品溶液制備過程簡單，試劑低毒性及用量少，鑒別方法簡單快捷，斑點清晰，重復性好，陰性對照無干擾。

附圖說明

圖1為本發明制劑中白花丹專屬性考察結果示意圖；

圖2為本發明實施例采用溫度7℃相對濕度32％對白花丹考察結果示意圖；

圖3為本發明實施例采用溫度20℃相對濕度43％對白花丹考察結果示意圖；

圖4為本發明實施例采用溫度40℃相對濕度75％對白花丹考察結果示意圖；

圖5為本發明實施例采用青島海洋薄層板對白花丹考察結果示意圖；

圖6為本發明實施例采用自鋪薄層板對白花丹考察結果示意圖；

圖7為本發明實施例采用青島勝海薄層板對白花丹考察結果示意圖；

圖8為本發明制劑中綠包藤專屬性考察結果示意圖；

圖9為本發明實施例采用溫度7℃相對濕度35％對綠包藤考察結果示意圖；

圖10為本發明實施例采用溫度22℃相對濕度41％對綠包藤考察結果示意圖；

圖11為本發明實施例采用溫度40℃相對濕度75％對綠包藤考察結果示意圖；

圖12為本發明實施例采用青島海洋薄層板對綠包藤考察結果示意圖；

圖13為本發明實施例采用自鋪薄層板對綠包藤考察結果示意圖；

圖14為本發明實施例采用青島勝海薄層板對綠包藤考察結果示意圖；

圖15為本發明制劑中射干專屬性考察結果示意圖；

圖16為本發明實施例采用溫度7℃相對濕度37％對射干考察結果示意圖；

圖17為本發明實施例采用溫度20℃相對濕度46％對射干考察結果示意圖；

圖18為本發明實施例采用溫度40℃相對濕度75％對射干考察結果示意圖；

圖19為本發明實施例采用青島海洋薄層板對射干考察結果示意圖；

圖20為本發明實施例采用自鋪薄層板對射干考察結果示意圖；

圖21為本發明實施例采用青島勝海薄層板對射干考察結果示意圖；

圖22為本發明制劑中胡椒專屬性考察結果示意圖；

圖23為本發明實施例采用溫度7℃相對濕度31％對胡椒考察結果示意圖；

圖24為本發明實施例采用溫度23℃相對濕度46％對胡椒考察結果示意圖；

圖25為本發明實施例采用溫度40℃相對濕度75％對胡椒考察結果示意圖；

圖26為本發明實施例采用青島海洋薄層板對胡椒考察結果示意圖；

圖27為本發明實施例采用自鋪薄層板對胡椒考察結果示意圖；

圖28為本發明實施例采用青島勝海薄層板對胡椒考察結果示意圖。

具體實施方式

為了使本發明所要解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

一種丹綠補腎膠囊的薄層色譜鑒別方法，所述丹綠補腎膠囊由白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜制備而成，取所述丹綠補腎膠囊內容物0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過濾，濾液即為包含白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液；

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對照藥材0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過濾，濾液即為白花丹對照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和白花丹對照品溶液各2-10μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以石油醚-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁乙醇溶液，加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與白花丹對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對照藥材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超聲處理15-60min，過濾，濾液即為綠包藤對照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和綠包藤對照品溶液各2-10μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與綠包藤對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對照藥材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超聲處理15-60min，過濾，濾液即為射干對照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和射干對照品溶液各2-10μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與射干對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含4.8-5.2mg胡椒堿對照品的溶液，即為胡椒堿對照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和胡椒堿對照品溶液各2-10μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與胡椒堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

具體地，上述本發明所述的丹綠補腎膠囊，按重量份計，由以下原料組成：白花丹：2-4份，綠包藤：8-12份，射干：8-12份，胡椒：1-3份，干姜：2-4份。

進一步地，本發明所述丹綠補腎膠囊的按照以下方法制備而成：按重量份計算，稱取白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜五味藥；所述綠包藤、射干粉碎成粗粉，用乙醇作溶劑，浸漬48小時后滲漉，收集漉液，回收乙醇并濃縮成清膏；干姜切片，用水蒸氣蒸餾提取揮發油；白花丹、胡椒粉碎成粗粉，混勻，加乙醇提取三次，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮成清膏，合并上述兩種清膏，在水浴上濃縮成稠膏，干燥，與用淀粉吸附的姜油混合，粉碎，過篩，混勻，裝入膠囊，即得丹綠補腎膠囊。

為了確保本發明的效果，申請人對制劑中白花丹、綠包藤、射干、胡椒的鑒別方法進行了相應的試驗研究與論證，具體如下：

1、白花丹的鑒別

供試品溶液的制備：取本品內容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為白花丹供試品溶液。

對照品溶液的制備：取白花丹對照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為白花丹對照品溶液。

陰性樣品溶液制備：按處方配比，取除白花丹以外的其他藥味按工藝制得膠囊劑，再按上述供試品溶液制備方法制得白花丹陰性樣品溶液。

薄層條件：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為8：4：1的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為2％的三氯化鋁乙醇溶液，在105℃下加熱2min，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與白花丹對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

(1)專屬性考察

丹綠補腎膠囊由云南神威施普瑞藥業有限公司提供，分別采用10個不同批次的樣品，按照上述方法進行實驗，結果如圖1所示，圖1中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分別為10個批次樣品，s為白花丹對照品；由圖1可知：在于白花丹對照品相應的位置上，顯相同顏色清晰斑點，斑點圓整，分離效果好。該方法專屬性強，斑點顯色清晰。

經過上述中藥質量標準分析方法驗證，表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強，操作簡單。

(2)耐用性考察

連續用三個批次的樣品，按照上述方法進行實驗：

a、不同溫度及相對濕度的考察，如表1所示，考察結果如圖2、圖3、圖4所示；圖2、圖3、圖4中，1、2、3分別為3批樣品，4為陰性對照，s為白花丹對照。

表1不同溫度及濕度的考察

b、不同廠牌硅膠g薄層板的考察結果如圖5、圖6、圖7所示，其中圖5為青島海洋薄層板，圖6為自鋪薄層板，圖7為青島勝海薄層板，圖5、圖6、圖7中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對照，s為白花丹對照。

由上述的不同廠牌硅膠g薄層板、不同溫度及相對濕度的考察實驗結果可知：供試品色譜中，在與白花丹對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；斑點圓整，分離效果好，陰性對照無干擾；細微的變動，該鑒別方法仍然有效。

2、綠包藤的鑒別

供試品溶液的制備：取本品內容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為綠包藤供試品溶液。

對照品溶液的制備：取綠包藤對照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為綠包藤對照品溶液。

陰性樣品溶液制備：按處方配比，取除綠包藤以外的其他藥味按工藝制得膠囊劑，再按上述供試品溶液制備方法制得綠包藤陰性樣品溶液。

薄層條件：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比8.5：1.5的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為10％的磷鉬酸乙醇溶液，在100℃下加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與綠包藤對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

(1)專屬性考察

丹綠補腎膠囊由云南神威施普瑞藥業有限公司提供，分別采用10個不同批次的樣品，按照上述方法進行實驗，結果如圖8所示，圖8中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分別為10個批次樣品，s為綠包藤對照；由圖8可知：在于對照品相應的位置上，顯相同顏色清晰斑點，斑點圓整，分離效果好。該方法專屬性強，斑點顯色清晰。

經過上述中藥質量標準分析方法驗證，表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強，操作簡單。

(2)耐用性考察

連續用三個批次的樣品，按照上述方法進行實驗：

a、不同溫度及相對濕度的考察，如表2所示，考察結果如圖9、圖10、圖11所示；圖9、圖10、圖11中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對照，s為綠包藤對照。

表2不同溫度及濕度的考察

b、不同廠牌硅膠g薄層板的考察結果如圖12、圖13、圖14所示，其中圖12為青島海洋薄層板，圖13為自鋪薄層板，圖14為青島勝海薄層板，圖12、圖13、圖14中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對照，s為綠包藤對照。

由上述的不同廠牌硅膠g薄層板、不同溫度及相對濕度的考察實驗結果可知：綠包藤供試品色譜中，在與綠包藤對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；斑點圓整，分離效果好，陰性對照無干擾；細微的變動，該鑒別方法仍然有效。

3、射干的鑒別

供試品溶液的制備：取本品內容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為射干供試品溶液。

對照品溶液的制備：取射干對照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為射干對照品溶液。

陰性樣品溶液制備：按處方配比，取除射干以外的其他藥味按工藝制得膠囊劑，再按上述供試品溶液制備方法制得射干陰性樣品溶液。

薄層條件：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為3：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；射干供試品色譜中，在與射干對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

(1)專屬性考察

丹綠補腎膠囊由云南神威施普瑞藥業有限公司提供，分別采用10個不同批次的樣品，按照上述方法進行實驗，結果如圖15所示，圖15中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分別為10個批次樣品，s為射干對照；由圖15可知：在與射干對照品相應的位置上，顯相同顏色清晰斑點，斑點圓整，分離效果好。該方法專屬性強，斑點顯色清晰。

經過上述中藥質量標準分析方法驗證，表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強，操作簡單。

(2)耐用性考察

連續用三個批次的樣品，按照上述方法進行實驗：

a、不同溫度及相對濕度的考察，如表3所示，考察結果如圖16、圖17、圖18所示；圖16、圖17、圖18中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對照，s為射干對照。

表3不同溫度及濕度的考察

b、不同廠牌硅膠g薄層板的考察結果如圖19、圖20、圖21所示，其中圖19為青島海洋薄層板，圖20為自鋪薄層板，圖21為青島勝海薄層板，圖19、圖20、圖21中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對照，s為射干對照。

由上述的不同廠牌硅膠g薄層板、不同溫度及相對濕度的考察實驗結果可知：射干供試品色譜中，在與射干對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；斑點圓整，分離效果好，陰性對照無干擾；細微的變動，該鑒別方法仍然有效。

4、胡椒的鑒別

供試品溶液的制備：取本品內容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為胡椒供試品溶液。

對照品溶液的制備：取胡椒堿對照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒堿對照品的溶液，即為胡椒堿對照品溶液。

陰性樣品溶液制備：按處方配比，取除胡椒以外的其他藥味按工藝制得膠囊劑，再按上述供試品溶液制備方法制得胡椒陰性樣品溶液。

薄層條件：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取上述溶液各2μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為10：3：1的環己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；胡椒供試品色譜中，在與胡椒堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

(1)專屬性考察

丹綠補腎膠囊由云南神威施普瑞藥業有限公司提供，分別采用10個不同批次的樣品，按照上述方法進行實驗，結果如圖22所示，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分別為10個批次樣品，s為胡椒堿對照；由圖22可知：在于胡椒對照品相應的位置上，顯相同顏色清晰斑點，斑點圓整，分離效果好。該方法專屬性強，斑點顯色清晰。

經過上述中藥質量標準分析方法驗證，表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強，操作簡單。

(2)耐用性考察

連續用三個批次的樣品，按照上述方法進行實驗：

a、不同溫度及相對濕度的考察，如表4所示，考察結果如圖23、圖24、圖25所示；圖23、圖24、圖25中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對照，s為胡椒堿對照。

表4不同溫度及濕度的考察

b、不同廠牌硅膠g薄層板的考察結果如圖26、圖27、圖28所示，其中圖26為青島海洋薄層板，圖27為自鋪薄層板，圖28為青島勝海薄層板，圖26、圖27、圖28中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對照，s為胡椒堿對照。

由上述的不同廠牌硅膠g薄層板、不同溫度及相對濕度的考察實驗結果可知：供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；斑點圓整，分離效果好，陰性對照無干擾；細微的變動，該鑒別方法仍然有效。

為了更好的解釋說明本發明的技術方案，下面通過具體的實施例對丹綠補腎膠囊的薄層色譜鑒別方法做詳細的解釋說明。

所述包含白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液與白花丹、綠包藤、射干、胡椒的對照品溶液，分別加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過濾即得，試劑低毒性，且用量少，制備過程簡單。

實施例1

丹綠補腎膠囊的制備

所述丹綠補腎膠囊，按重量份計，由以下原料組成：白花丹：2-4份，綠包藤：8-12份，射干：8-12份，胡椒：1-3份，干姜：2-4份。

所述丹綠補腎膠囊的按照以下方法制備而成：按重量份計算，稱取白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜五味藥；所述綠包藤、射干粉碎成粗粉，用乙醇作溶劑，浸漬48小時后滲漉，收集漉液，回收乙醇并濃縮成清膏；干姜切片，用水蒸氣蒸餾提取揮發油；白花丹、胡椒粉碎成粗粉，混勻，加乙醇提取三次，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮成清膏，合并上述兩種清膏，在水浴上濃縮成稠膏，干燥，與用淀粉吸附的姜油混合，粉碎，過篩，混勻，裝入膠囊，即得丹綠補腎膠囊。

性狀：本品為硬膠囊，內容物應為棕黃色至棕褐色粉末及顆粒；味辛、苦，具胡椒氣味。

實施例2

對實施例1制備的丹綠補腎膠囊的薄層鑒別方法，包括對白花丹、綠包藤、射干、胡椒的薄層色譜鑒別。

取丹綠補腎膠囊內容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取15min，過濾，濾液即為含有白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液。

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取15min，過濾，濾液即為白花丹對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取白花丹供試品和白花丹對照品溶液各10μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為6：3：0.5的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為2％的三氯化鋁乙醇溶液，在110℃下加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與白花丹對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理15min，過濾，濾液即為綠包藤對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取綠包藤供試品和對照品溶液各10μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比6：0.5的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為8％的磷鉬酸乙醇溶液，在110℃下加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與綠包藤對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理15min，過濾，濾液即為射干對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取射干供試品和射干對照品溶液各10μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為2：0.5：0.5三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；射干供試品色譜中，在與射干對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒堿對照品的溶液，即為胡椒堿對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取胡椒供試品和胡椒堿對照品溶液各10μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為8：1：0.5的環己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；胡椒供試品色譜中，在與胡椒堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

實施例3

對實施例1制備的丹綠補腎膠囊的薄層鑒別方法，包括對白花丹、綠包藤、射干、胡椒的薄層色譜鑒別。

取丹綠補腎膠囊內容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為含有白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液。

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過濾，濾液即為白花丹對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取白花丹供試品和白花丹對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為8：4：1的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為3％的三氯化鋁乙醇溶液，在105℃下加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與白花丹對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理30min，過濾，濾液即為綠包藤對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取綠包藤供試品和綠包藤對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比8.5：1.5的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為10％的磷鉬酸乙醇溶液，在105℃下加熱至斑點顯色清晰。綠包藤供試品色譜中，在與綠包藤對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理30min，過濾，濾液即為射干對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取射干供試品和射干對照品溶液各10μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為3：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；射干供試品色譜中，在與射干對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒堿對照品的溶液，即為胡椒堿對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取胡椒供試品和胡椒堿對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為10：3：1的環己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；胡椒供試品色譜中，在與胡椒堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

實施例4

對實施例1制備的丹綠補腎膠囊的薄層鑒別方法，包括對白花丹、綠包藤、射干、胡椒的薄層色譜鑒別。

取丹綠補腎膠囊內容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取60min，過濾，濾液即為含有白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液。

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取60min，過濾，濾液即為白花丹對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取白花丹供試品和白花丹對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為10：5：2的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為5％的三氯化鋁乙醇溶液，在100℃下加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；白花丹供試品色譜中，在與白花丹對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理60min，過濾，濾液即為綠包藤對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取綠包藤供試品和綠包藤對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比10：2.5的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為12％的磷鉬酸乙醇溶液，在100℃下加熱至斑點顯色清晰。綠包藤供試品色譜中，在與綠包藤對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理60min，過濾，濾液即為射干對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取射干供試品和射干對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為2：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；射干供試品色譜中，在與射干對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒堿對照品的溶液，即為胡椒堿對照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，分別吸取胡椒供試品和胡椒堿對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為6：2：1的環己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；胡椒供試品色譜中，在與胡椒堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。