提取游離細胞的方法及試劑盒與流程

本發明涉及細胞檢測
技術領域：
，特別涉及一種提取游離組織上細胞的方法及試劑盒。
背景技術：
：在診斷細胞學或臨床細胞學中，脫落細胞檢查就是提取病人基因組，從細胞形態上診斷疾病。目前提取基因組的方法是，利用類似注射器的結構從患者體內抽吸細胞組織制成石蠟組織，然后從石蠟組織切白片提取基因組。其存在的缺點是：1、會引入人為突變。2、對于某些疾病診斷所需的石蠟切片量大，例如像前列腺穿刺這類微量標本10張白片可以提取的基因組不夠下游檢查用。3、過多的石蠟會干擾組織的基因組提取。4、絕大多數的rna已經降解，導致下游檢測不能進行或者檢測結果不準確。技術實現要素：本發明的目的是提供一種提取組織上粘附的游離細胞的方法及試劑盒。為此，本發明實施例提供了以下技術方案：一種提取游離細胞的方法，包括以下步驟：利用組織簽移動穿刺針上的組織；將組織在a溶液中進行涮洗，獲得游離細胞；將涮洗獲得的游離細胞在b溶液中進行保存；所述a溶液為包含nacl、na2hpo4、kh2po4、穩定劑、雙蒸水的混合液，所述b溶液為包含異硫氫酸胍、枸櫞酸鈉、雙蒸水的混合液。根據本發明實施例，1升a溶液中各成分的含量分別為：nacl＝8.5～9克，na2hpo4＝11～16克，kh2po4＝1～4克，穩定劑＝0.2～0.7克，其余為雙蒸水；或者，1升b溶液中各成分的含量分別為：異硫氫酸胍＝9～14克，枸櫞酸鈉＝0.6～2.3克，穩定劑＝0.5～1.5克，其余為雙蒸水。一種試劑盒，包括盒體，所述盒體內設置有：第一溶液ep管，盛裝有a溶液，所述a溶液為包含nacl、na2hpo4、kh2po4、穩定劑、雙蒸水的混合液；第二溶液ep管，盛裝有b溶液，所述b溶液為包含異硫氫酸胍、枸櫞酸鈉、穩定劑、雙蒸水的混合液；組織簽，用于移動穿刺針上的組織，以提取組織上的游離細胞。根據本發明實施例，所述組織簽包括兩端封口的錐形實體，所述錐形實體上設置有凹凸齒，所述凹凸齒用于將游離組織液引入ep管內。較優地，上述試劑盒還包括定位墊，所述定位墊設置有分別用于放置第一溶液ep管、第二溶液ep管、組織簽的第一定位槽、第二定位槽和第三定位槽。與現有技術相比，本發明的有益效果：1)提取游離細胞液后先利用a溶液進行涮洗，再利用b溶液進行保存，以備提取基因組，整個過程不會對基因組造成損傷，也不會干擾基因組的提取，rna也不會發生降解。2)現有技術中對于穿刺微量組織的表面粘附的細胞都是丟失在病理固定液中，通過本發明方法可以充分利用這部分細胞提取基因組，使得提取的細胞組織得到充分利用，也避免過多地從人體抽取細胞組織用于檢測，還為臨床微量珍貴標本的利用(如前列腺穿刺和內窺鏡所取標本都使得及時檢測基因表達情況成為了可能。附圖說明為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。圖1為本發明實施例中組織簽的結構示意圖。圖2為本發明實施例中試劑盒的結構示意圖。圖中標記：11-錐形實體；12-凹凸齒；10-盒體；20-定位墊；30-第一定位槽；40-第二定位槽；50-第三定位槽。具體實施方式下面將結合本發明實施例中附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。通常在此處附圖中描述和示出的本發明實施例的組件可以以各種不同的配置來布置和設計。因此，以下對在附圖中提供的本發明的實施例的詳細描述并非旨在限制要求保護的本發明的范圍，而是僅僅表示本發明的選定實施例。基于本發明的實施例，本領域技術人員在沒有做出創造性勞動的前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。本實施例中提供了一種提取游離細胞液的方法，該方法包括步驟：步驟一：利用組織簽移動穿刺針上的組織，提取組織上的游離細胞液。請參閱圖1，組織簽可以采用圖1所示結構，包括一中空的錐形實體11，錐形實體11上設置有4-5條凹凸齒12_，穿刺針上的組織通過該凹凸齒12被引入到ep管內。作為一種應用舉例，錐形實體11的細頭直徑為1mm，粗頭直徑為2.5～3mm，長度為125mm。當然地，可以根據不同使用場景設計錐形實體的具體結構尺寸。步驟二：將提取的游離細胞液在a溶液中進行涮洗。所述a溶液為包含nacl、na2hpo4、kh2po4、穩定劑、雙蒸水(ddh2o)的混合液。根據研究，1升a溶液中各成分的含量分別為：nacl＝8.5～9克，na2hpo4＝11～16克，kh2po4＝1～4克，穩定劑＝0.2～0.7克，其余為雙蒸水。a溶液中各成分的含量不同，對涮洗結果具有影響，如表1和表2所示。表1表2從表2中可以看出，當1升a溶液中，nacl＝8.5克，na2hpo4＝13克，kh2po4＝3克，穩定劑＝0.5克，其余為雙蒸水時游離細胞提取的效果最佳。步驟三：將涮洗獲得的游離細胞在b溶液中進行保存，需要提取基因組時從b溶液中取出即可。所述b溶液為包含異硫氫酸胍、枸櫞酸鈉的混合液。根據研究，1升b溶液中各成分的含量分別為：異硫氫酸胍＝9～14克，枸櫞酸鈉＝0.6～2.3克，穩定劑＝0.5～1.5克，其余為雙蒸水。尤其以1升b溶液中異硫氫酸胍為10克，枸櫞酸鈉為1克，穩定劑為0.8克，其余為雙蒸水為佳，如表4所示。b溶液中各成分的含量不同，對游離細胞的保存效果具有影響，如表3和表4所示。表3表4性能第一組第二組第三組第四組第五組細胞活力78％91％64％50％40％總rna(ug)0.16110.41500.07260.05130.0558從表2中可以看出，當1升a溶液中，nacl＝8.5克，na2hpo4＝13克，kh2po4＝3克，穩定劑＝0.5克，其余為雙蒸水時游離細胞提取的效果最佳。通過本實施例所述方法，先利用a溶液涮洗組織提取游離細胞，再利用b溶液對游離細胞進行保存，以備提取基因組，整個過程不會對基因組造成損傷，也不會干擾基因組的提取，rna也不會發生降解。現有技術中對于穿刺微量組織的表面細胞都是丟失在病理固定液中，通過本發明方法可以充分利用這部分細胞提取基因組，使得提取的細胞組織得到充分利用，也避免過多地從人體抽取細胞組織用于檢測，不僅最大限度節約基因資源，還為臨床內窺鏡所取珍貴標本獲得了及時檢測基因表達情況成為可能。相應地，本實施例中還提供了一種試劑盒，包括盒體10，所述盒體10內設置有：第一溶液ep管，盛裝有a溶液，a溶液用于涮洗組織，提取游離細胞；第二溶液ep管，盛裝有b溶液，b溶液用于保存提取的游離細胞；組織簽，例如圖1所示結構，用于移動穿刺針上的組織，將組織移動到第一溶液ep管內；定位墊20，也可稱之為防震墊，分別設置有用于放置第一溶液ep管、第二溶液ep管、組織簽的第一定位槽30、第二定位槽40和和第三定位槽50，避免第一溶液ep管、第二溶液ep管、組織簽在運輸過程中因振動而損壞。以上所述，僅為本發明的具體實施方式，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本
技術領域：
的技術人員在本發明揭露的技術范圍內，可輕易想到變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。當前第1頁12