一種茄子根莖部組織的石蠟切片的制備方法與流程

本發明屬于生物組織學技術領域，具體涉及一種茄子根莖部組織的石蠟切片的制備方法。

背景技術：

石蠟組織切片技術是組織學常規制片技術中最為廣泛應用的一種方法。不僅用于觀察正常細胞組織的形態結構，也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法，已廣泛應用于眾多學科領域的研究中。但由于植物的組織結構特異性，不同材料的具體操作方法也不盡相同。

目前，在茄子上開展的石蠟切片技術研究較少，且效果并不理想（切片破碎不完整且清晰度差）。因此如何克服現有技術的不足是目前生物組織學技術領域亟需解決的問題。

技術實現要素：

本發明的目的是為了有效觀察茄子根莖部的組織結構，對茄子的生理和病理進行研究，并解決現有技術的不足，提供一種茄子根莖部組織的石蠟切片的制備方法。本發明方法是在傳統石蠟切片的基礎上，對茄子根莖部組織開展石蠟切片技術研究，通過技術改良與創新，最終摸索出的一套簡單高效、可操作性強、可重復率高、結果清晰且穩定可靠的實驗技術方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種茄子根莖部組織的石蠟切片的制備方法，包括如下步驟：

步驟（1）固定與軟化：

選取新鮮茄子植株，截取地上1～3cm處的莖部組織和地下1～3cm處的主根組織作為石蠟切片的試驗材料；

將所選的試驗材料去雜，截成長為0.48～0.52cm的小段，放入faa固定液中，于3～5℃下固定3～5d；

之后，在固定液中再加入體積是固定液體積5%的甘油對試驗材料進行初次軟化，5～7d后，將試驗材料取出，放置于體積比為1：1的甘油與體積濃度為70%的乙醇混合液中，于35～38℃的暗培養箱中進行二次軟化處理15d以上；

步驟（2）脫水：將經步驟（1）處理后的試驗材料用體積濃度為30%的乙醇沖洗1～2次，之后將試驗材料放置于體積濃度為50%乙醇中30min，取出后再依次放置在體積濃度為70%、85%、95%的乙醇中各處理2h，最后放置在純乙醇中處理2次，每次30min，兩次處理不需要間隔時間；

步驟（3）透明：將經步驟（2）脫水后的試驗材料置于體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑中1～2h，之后再置于二甲苯中兩次，每次1.5～2h，兩次處理不需要間隔時間；

步驟（4）浸蠟：將經步驟（3）處理的試驗材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不斷提高烘箱溫度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同時每2h向二甲苯中添加1～2g石蠟粉末；

當烘箱溫度升至56～57℃且溶液體積達到二甲苯體積的2倍以上時，將試驗材料置于石蠟液中處理3次，每次處理24h，且每更換一次石蠟液后烘箱需升溫1℃，最終烘箱溫度為58℃；

步驟（5）包埋：首先對包埋盒及經步驟（4）處理的試驗材料進行預熱，預熱溫度為65～71℃，之后，先在包埋盒中加入石蠟液至形成底座，石蠟液的加入量為剛剛覆蓋包埋盒底部即可；3～5s后再向包埋盒中倒入能沒過試驗材料的石蠟液，待底座變白后將試驗材料轉入包埋盒中進行包埋，待石蠟液全部凝結后，將石蠟塊取出，備用；

步驟（6），修蠟與切片：對步驟（5）得到的石蠟塊進行修理，要求將試驗材料周圍多余的蠟塊去除，得到切面平整、截面為矩形或梯形的試驗材料蠟塊；將試驗材料蠟塊切片，切片厚度為8～10μm；

步驟（7），展片與烤片：將蒸餾水與刷過粘片劑的載玻片進行預熱，預熱溫度為40～42℃；然后在載玻片上滴上1ml的蒸餾水，之后將步驟（6）得到切片正面朝上放置在載玻片上展片，再用濾紙將多余的蒸餾水吸除；接著將載玻片放置在40～45℃的烘箱中進行烤片3～7d，待肉眼可見蠟帶已基本融化即完成烤片；

步驟（8），脫蠟：將步驟（7）烤片后的載玻片從烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再換成新的二甲苯浸泡至肉眼觀察試驗材料周圍的蠟完全脫去；

步驟（9），復水：將經步驟（8）脫蠟后的載玻片依次放入體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑、純乙醇、體積濃度為95%乙醇、體積濃度為85%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為15%乙醇、蒸餾水中，各浸泡2～3min；

步驟（10），染色：將經步驟（9）復水后的載玻片放入質量濃度為1%的番紅花紅t水溶液中，于29～31℃的培養箱中放置4～6h，然后依次放置于用蒸餾水、體積濃度為15%乙醇、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為85%乙醇、體積濃度為95%乙醇中，各10s；接著放置于質量濃度為1%的固綠溶液中5s，再放置于純乙醇中2次，每次2min；之后放置于體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑中2min，最后放置于二甲苯中2次，每次3～6min；

步驟（11），封片：將步驟（10）染色的載玻片在二甲苯中沾濕后，用擦鏡紙擦去載玻片底部和周圍多余的二甲苯，在載玻片中央滴入加拿大中性樹膠，輕微晃動玻片讓中性樹膠與二甲苯充分混合，從載玻片一端輕放上蓋玻片，放入35～40℃的烘箱中烤干，得到茄子根莖部組織的永久切片，即可觀察。

進一步，優選的是，步驟（1）中，去雜時，采用流水沖洗去雜。

進一步，優選的是，步驟（1）中，每100mlfaa固定液中含福爾馬林5ml、冰醋酸5ml、體積濃度為70%的乙醇90ml。

進一步，優選的是，步驟（1）中，固定所采用的faa固定液體積為試驗材料體積的20倍以上。

進一步，優選的是，步驟（4）、步驟（5）中，石蠟液為石蠟經過以上多次加熱沸騰并紗布過濾所得，石蠟的熔點為56～58℃。

進一步，優選的是，步驟（5）中，預熱的具體方法是在烘片機上，對包埋盒及裝有試驗材料的廣口瓶進行預熱；將試驗材料轉入包埋盒中是采用經酒精燈預熱過的鑷子來轉入。

進一步，優選的是，步驟（7）中所述的粘片劑的配制方法為1g明膠溶解于100ml蒸餾水中，加入2g苯酚和15ml甘油，充分混勻后于121℃下高溫滅菌，即得。

進一步，優選的是，步驟（8）中，再換成新的二甲苯浸泡時間為20min。

本發明得到的切片可放在光學顯微鏡下觀察，用測微尺進行測量，用顯微成像系統或顯微鏡攝像頭進行拍照。

本發明與現有技術相比，其有益效果為：

1、軟化：本方法在軟化過程中，通過在固定液中添加甘油進行初次軟化，并使用35～38℃的暗培養箱加溫軟化，從而加速軟化過程、縮短軟化時間、提高軟化效果，更好的保證了材料的完整性。

2、浸蠟：本方法以38℃為浸蠟起點（軟化處理的溫度），58℃（所用石蠟的最高熔點）為浸蠟終點，并通過每天逐步升高烘箱處理溫度3℃和每2h添加一次石蠟粉末，使得浸蠟過程持續、完整，浸蠟效果均勻、細膩；為后期蠟帶和材料的完整、清晰、透明奠定了良好的基礎。

3、預熱：本方法在包埋、展片和脫蠟時，均采用了保溫預熱的方法，使試驗材料和蠟在處理過程中避免溫差過大所造成的氣泡、脫離和變形，從而保證了試驗材料和蠟帶的良好融合和完整性。

4、染色：由于石蠟切片在染色過程中往往是番紅染色難、固綠染色容易而出現片子發綠，看不到材料的木質部（本應被番紅染成紅色）；本方法通過將染缸放入培養箱中處理，并縮短固綠染色時間，從而有效縮短染色過程、增加染色效果，使染出的片子紅綠分明、組織結構清晰。

5、適用范圍：本方法可重復性高，適用范圍廣，可用于制作不同茄子材料（栽培茄、野茄）、不同生長時期（幼苗、成株）的根莖部組織的石蠟切片。

綜上所述，為了對茄子的病理和生理組織結構變化開展研究，申請人經過多次實驗探索出一種快捷、安全、實用的茄子根莖部組織石蠟切片方法，該方法得到的結果可操作性強、可重復率高、穩定可靠，鏡下觀察切片質量高、效果好、組織結構清晰。本方法不僅可用于研究、觀察及判斷茄子根莖部細胞組織的形態結構變化，從而對茄子的生理、病理和形態學進行研究，還可廣泛應用于茄果類乃至其它植物的組織切片實驗中，具有較好的科研應用前景。

附圖說明

圖1為現有技術1的顯微鏡圖；圖中1~6均為根部橫切面顯微鏡圖；

圖2為現有技術2的顯微鏡圖；圖中a圖為野顛茄根橫切面顯微鏡圖；b圖為喀西茄根橫切面顯微鏡圖；

圖3為本發明切片10倍目鏡×10倍物鏡下的結構示意圖；

圖4為本發明切片10倍目鏡×40倍物鏡下的結構示意圖；

圖5為本發明切片10倍目鏡×100倍物鏡下的結構示意圖。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步的詳細描述。

本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發明，而不應視為限定本發明的范圍。實施例中未注明具體技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過購買獲得的常規產品。

本發明除非另有說明，否則百分號代表質量百分數。

本實施例所采用的烘片機的型號為db-b2，廠家為北京亞歐德鵬科技有限公司；

包埋盒中凹槽尺寸為24mm×24mm×9mm，優選放入2～4個試驗材料；

本發明實施例所采用的石蠟切片機為徠卡rm2016輪轉式切片機。

本發明實施例用鑷子和接種針將切片正面朝上放置在載玻片上展片。

實施例1

一種茄子根莖部組織的石蠟切片的制備方法，包括如下步驟：

步驟（1）固定與軟化：

選取新鮮茄子植株，截取地上1～3cm處的莖部組織和地下1～3cm處的主根組織作為石蠟切片的試驗材料；

將所選的試驗材料采用流水沖洗去雜，截成長為0.48～0.52cm的小段，放入faa固定液中，于3℃下固定3d；每100mlfaa固定液中含福爾馬林5ml、冰醋酸5ml、體積濃度為70%的乙醇90ml；固定所采用的faa固定液體積為試驗材料體積的20倍以上。

之后，在固定液中再加入體積是固定液體積5%的甘油對試驗材料進行初次軟化，5d后，將試驗材料取出，放置于體積比為1：1的甘油與體積濃度為70%的乙醇混合液中，于35℃的暗培養箱中進行二次軟化處理15d以上；處理時間越長軟化效果越好；

步驟（2）脫水：將經步驟（1）處理后的試驗材料用體積濃度為30%的乙醇沖洗1次，之后將試驗材料放置于體積濃度為50%乙醇中30min，取出后再依次放置在體積濃度為70%、85%、95%的乙醇中各處理2h，最后放置在純乙醇中處理2次，每次30min，兩次處理不需要間隔時間；

步驟（3）透明：將經步驟（2）脫水后的試驗材料置于體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑中1h，之后再置于二甲苯中兩次，每次1.5h，兩次處理不需要間隔時間；

步驟（4）浸蠟：將經步驟（3）處理的試驗材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不斷提高烘箱溫度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同時每2h向二甲苯中添加1g石蠟粉末；

當烘箱溫度升至56～57℃且溶液體積達到二甲苯體積的2倍以上時，將試驗材料置于石蠟液中處理3次，每次處理24h，且每更換一次石蠟液后烘箱需升溫1℃，最終烘箱溫度為58℃；

步驟（5）包埋：首先對包埋盒及經步驟（4）處理的試驗材料進行預熱，預熱溫度為65℃，之后，先在包埋盒中加入石蠟液至形成底座；石蠟液的加入量為剛剛覆蓋包埋盒底部即可；3s后再向包埋盒中倒入能沒過試驗材料的石蠟液，待底座變白后將試驗材料轉入包埋盒中進行包埋，待石蠟液全部凝結后，將石蠟塊取出，備用；

步驟（6），修蠟與切片：對步驟（5）得到的石蠟塊進行修理，要求將試驗材料周圍多余的蠟塊去除，得到切面平整、截面為矩形或梯形的試驗材料蠟塊；將試驗材料蠟塊切片，切片厚度為8～10μm；

步驟（7），展片與烤片：將蒸餾水與刷過粘片劑的載玻片進行預熱，預熱溫度為40℃；然后在載玻片上滴上1ml的蒸餾水，之后將步驟（6）得到切片正面朝上放置在載玻片上展片，再用濾紙將多余的蒸餾水吸除；接著將載玻片放置在40℃的烘箱中進行烤片3～7d，待肉眼可見蠟帶已基本融化即完成烤片；

步驟（8），脫蠟：將步驟（7）烤片后的載玻片從烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再換成新的二甲苯浸泡至肉眼觀察試驗材料周圍的蠟完全脫去；從烘箱拿出載玻片時，采用夾子夾好，中間隔開避免粘片；

步驟（9），復水：將經步驟（8）脫蠟后的載玻片依次放入體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑、純乙醇、體積濃度為95%乙醇、體積濃度為85%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為15%乙醇、蒸餾水中，各浸泡2min；

步驟（10），染色：將經步驟（9）復水后的載玻片放入質量濃度為1%的番紅花紅t水溶液中，于29℃的培養箱中放置4h，然后依次放置于用蒸餾水、體積濃度為15%乙醇、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為85%乙醇、體積濃度為95%乙醇中，各10s；接著放置于質量濃度為1%的固綠溶液中5s，再放置于純乙醇中2次，每次2min；之后放置于體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑中2min，最后放置于二甲苯中2次，每次3min；

步驟（11），封片：將步驟（10）染色的載玻片在二甲苯中沾濕后，用擦鏡紙擦去載玻片底部和周圍多余的二甲苯，在載玻片中央滴入加拿大中性樹膠，輕微晃動玻片讓中性樹膠與二甲苯充分混合，從載玻片一端輕放上蓋玻片，放入35℃的烘箱中烤干，得到茄子根莖部組織的永久切片，即可觀察。

其中，步驟（4）、步驟（5）中，石蠟液為石蠟經過以上多次加熱沸騰并紗布過濾所得，石蠟的熔點為56～58℃。

步驟（5）中，預熱的具體方法是在烘片機上，對包埋盒及裝有試驗材料的廣口瓶進行預熱；將試驗材料轉入包埋盒中是采用經酒精燈預熱過的鑷子來轉入。

實施例2

一種茄子根莖部組織的石蠟切片的制備方法，包括如下步驟：

步驟（1）固定與軟化：

選取新鮮茄子植株，截取地上1～3cm處的莖部組織和地下1～3cm處的主根組織作為石蠟切片的試驗材料；

將所選的試驗材料采用流水沖洗去雜，截成長為0.48～0.52cm的小段，放入faa固定液中，于5℃下固定5d；每100mlfaa固定液中含福爾馬林5ml、冰醋酸5ml、體積濃度為70%的乙醇90ml；固定所采用的faa固定液體積為試驗材料體積的20倍以上。

之后，在固定液中再加入體積是固定液體積5%的甘油對試驗材料進行初次軟化，7d后，將試驗材料取出，放置于體積比為1：1的甘油與體積濃度為70%的乙醇混合液中，于38℃的暗培養箱中進行二次軟化處理15d以上；處理時間越長軟化效果越好；

步驟（2）脫水：將經步驟（1）處理后的試驗材料用體積濃度為30%的乙醇沖洗2次，之后將試驗材料放置于體積濃度為50%乙醇中30min，取出后再依次放置在體積濃度為70%、85%、95%的乙醇中各處理2h，最后放置在純乙醇中處理2次，每次30min，兩次處理不需要間隔時間；

步驟（3）透明：將經步驟（2）脫水后的試驗材料置于體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑中2h，之后再置于二甲苯中兩次，每次2h，兩次處理不需要間隔時間；

步驟（4）浸蠟：將經步驟（3）處理的試驗材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不斷提高烘箱溫度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同時每2h向二甲苯中添加2g石蠟粉末；

當烘箱溫度升至56～57℃且溶液體積達到二甲苯體積的2倍以上時，將試驗材料置于石蠟液中處理3次，每次處理24h，且每更換一次石蠟液后烘箱需升溫1℃，最終烘箱溫度為58℃；

步驟（5）包埋：首先對包埋盒及經步驟（4）處理的試驗材料進行預熱，預熱溫度為71℃，之后，先在包埋盒中加入石蠟液至形成底座；石蠟液的加入量為剛剛覆蓋包埋盒底部即可；5s后再向包埋盒中倒入能沒過試驗材料的石蠟液，待底座變白后將試驗材料轉入包埋盒中進行包埋，待石蠟液全部凝結后，將石蠟塊取出，備用；

步驟（6），修蠟與切片：對步驟（5）得到的石蠟塊進行修理，要求將試驗材料周圍多余的蠟塊去除，得到切面平整、截面為矩形或梯形的試驗材料蠟塊；將試驗材料蠟塊切片，切片厚度為8～10μm；

步驟（7），展片與烤片：將蒸餾水與刷過粘片劑的載玻片進行預熱，預熱溫度為42℃；然后在載玻片上滴上1ml的蒸餾水，之后將步驟（6）得到切片正面朝上放置在載玻片上展片，再用濾紙將多余的蒸餾水吸除；接著將載玻片放置在45℃的烘箱中進行烤片3～7d，待肉眼可見蠟帶已基本融化即完成烤片；

步驟（8），脫蠟：將步驟（7）烤片后的載玻片從烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再換成新的二甲苯浸泡至肉眼觀察試驗材料周圍的蠟完全脫去；從烘箱拿出載玻片時，采用夾子夾好，中間隔開避免粘片；

步驟（9），復水：將經步驟（8）脫蠟后的載玻片依次放入體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑、純乙醇、體積濃度為95%乙醇、體積濃度為85%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為15%乙醇、蒸餾水中，各浸泡3min；

步驟（10），染色：將經步驟（9）復水后的載玻片放入質量濃度為1%的番紅花紅t水溶液中，于31℃的培養箱中放置6h，然后依次放置于用蒸餾水、體積濃度為15%乙醇、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為85%乙醇、體積濃度為95%乙醇中，各10s；接著放置于質量濃度為1%的固綠溶液中5s，再放置于純乙醇中2次，每次2min；之后放置于體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑中2min，最后放置于二甲苯中2次，每次6min；

步驟（11），封片：將步驟（10）染色的載玻片在二甲苯中沾濕后，用擦鏡紙擦去載玻片底部和周圍多余的二甲苯，在載玻片中央滴入加拿大中性樹膠，輕微晃動玻片讓中性樹膠與二甲苯充分混合，從載玻片一端輕放上蓋玻片，放入40℃的烘箱中烤干，得到茄子根莖部組織的永久切片，即可觀察。

其中，步驟（4）、步驟（5）中，石蠟液為石蠟經過以上多次加熱沸騰并紗布過濾所得，石蠟的熔點為56～58℃。

步驟（5）中，預熱的具體方法是在烘片機上，對包埋盒及裝有試驗材料的廣口瓶進行預熱；將試驗材料轉入包埋盒中是采用經酒精燈預熱過的鑷子來轉入。

步驟（7）中所述的粘片劑的配制方法為1g明膠溶解于100ml蒸餾水中，加入2g苯酚和15ml甘油，充分混勻后于121℃下高溫滅菌，即得。

步驟（8）中，再換成新的二甲苯浸泡時間為20min。

實施例3

一種茄子根莖部組織的石蠟切片的制備方法，包括如下步驟：

步驟（1）固定與軟化：

選取新鮮茄子植株，截取地上1～3cm處的莖部組織和地下1～3cm處的主根組織作為石蠟切片的試驗材料；

將所選的試驗材料采用流水沖洗去雜，截成長為0.48～0.52cm的小段，放入faa固定液中，于4℃下固定4d；每100mlfaa固定液中含福爾馬林5ml、冰醋酸5ml、體積濃度為70%的乙醇90ml；固定所采用的faa固定液體積為試驗材料體積的20倍以上。

之后，在固定液中再加入體積是固定液體積5%的甘油對試驗材料進行初次軟化，6d后，將試驗材料取出，放置于體積比為1：1的甘油與體積濃度為70%的乙醇混合液中，于37℃的暗培養箱中進行二次軟化處理15d以上；處理時間越長軟化效果越好；

步驟（2）脫水：將經步驟（1）處理后的試驗材料用體積濃度為30%的乙醇沖洗2次，之后將試驗材料放置于體積濃度為50%乙醇中30min，取出后再依次放置在體積濃度為70%、85%、95%的乙醇中各處理2h，最后放置在純乙醇中處理2次，每次30min，兩次處理不需要間隔時間；

步驟（3）透明：將經步驟（2）脫水后的試驗材料置于體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑中1.5h，之后再置于二甲苯中兩次，每次1.8h，兩次處理不需要間隔時間；

步驟（4）浸蠟：將經步驟（3）處理的試驗材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不斷提高烘箱溫度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同時每2h向二甲苯中添加1.7g石蠟粉末；

當烘箱溫度升至56～57℃且溶液體積達到二甲苯體積的2倍以上時，將試驗材料置于石蠟液中處理3次，每次處理24h，且每更換一次石蠟液后烘箱需升溫1℃，最終烘箱溫度為58℃；

步驟（5）包埋：首先對包埋盒及經步驟（4）處理的試驗材料進行預熱，預熱溫度為68℃，之后，先在包埋盒中加入石蠟液至形成底座；石蠟液的加入量為剛剛覆蓋包埋盒底部即可；4s后再向包埋盒中倒入能沒過試驗材料的石蠟液，待底座變白后將試驗材料轉入包埋盒中進行包埋，待石蠟液全部凝結后，將石蠟塊取出，備用；

步驟（6），修蠟與切片：對步驟（5）得到的石蠟塊進行修理，要求將試驗材料周圍多余的蠟塊去除，得到切面平整、截面為矩形或梯形的試驗材料蠟塊；將試驗材料蠟塊切片，切片厚度為8～10μm；

步驟（7），展片與烤片：將蒸餾水與刷過粘片劑的載玻片進行預熱，預熱溫度為41℃；然后在載玻片上滴上1ml的蒸餾水，之后將步驟（6）得到切片正面朝上放置在載玻片上展片，再用濾紙將多余的蒸餾水吸除；接著將載玻片放置在43℃的烘箱中進行烤片5d，待肉眼可見蠟帶已基本融化即完成烤片；

步驟（8），脫蠟：將步驟（7）烤片后的載玻片從烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再換成新的二甲苯浸泡至肉眼觀察試驗材料周圍的蠟完全脫去；從烘箱拿出載玻片時，采用夾子夾好，中間隔開避免粘片；

步驟（9），復水：將經步驟（8）脫蠟后的載玻片依次放入體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑、純乙醇、體積濃度為95%乙醇、體積濃度為85%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為15%乙醇、蒸餾水中，各浸泡2.5min；

步驟（10），染色：將經步驟（9）復水后的載玻片放入質量濃度為1%的番紅花紅t水溶液中，于30℃的培養箱中放置5h，然后依次放置于用蒸餾水、體積濃度為15%乙醇、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為85%乙醇、體積濃度為95%乙醇中，各10s；接著放置于質量濃度為1%的固綠溶液中5s，再放置于純乙醇中2次，每次2min；之后放置于體積比為1：1的乙醇與二甲苯的混合溶劑中2min，最后放置于二甲苯中2次，每次5min；

步驟（11），封片：將步驟（10）染色的載玻片在二甲苯中沾濕后，用擦鏡紙擦去載玻片底部和周圍多余的二甲苯，在載玻片中央滴入加拿大中性樹膠，輕微晃動玻片讓中性樹膠與二甲苯充分混合，從載玻片一端輕放上蓋玻片，放入38℃的烘箱中烤干，得到茄子根莖部組織的永久切片，即可觀察。

其中，步驟（4）、步驟（5）中，石蠟液為石蠟經過以上多次加熱沸騰并紗布過濾所得，石蠟的熔點為56～58℃。

步驟（5）中，預熱的具體方法是在烘片機上，對包埋盒及裝有試驗材料的廣口瓶進行預熱；將試驗材料轉入包埋盒中是采用經酒精燈預熱過的鑷子來轉入。

步驟（7）中所述的粘片劑的配制方法為1g明膠溶解于100ml蒸餾水中，加入2g苯酚和15ml甘油，充分混勻后于121℃下高溫滅菌，即得。

步驟（8）中，再換成新的二甲苯浸泡時間為20min。

本發明得到的切片可放在光學顯微鏡下觀察，用測微尺進行測量，用顯微成像系統或顯微鏡攝像頭進行拍照。

如圖1~5，本方法與傳統方法（已報道文獻）比較可見，本方法鏡下觀察切片質量高、效果好、組織結構完整且清晰。

圖1為現有技術1（王桂芹,王秀艷,段亞軍.茄子砧木與栽培種根的解剖結構比較.2002.沈陽農業大學學報.33(4):255-257.）的根部橫切圖；

圖2為現有技術2（馬莉,房志堅.野顛茄及其混淆品喀西茄的性狀與顯微鑒別.中藥材2012,35（2）:216-220.）的橫切顯微鏡圖；

圖1和圖2均來自于以上參考文獻。

本方法與常規方法比較，結果如表1所示。

表1

以上顯示和描述了本發明的基本原理、主要特征和本發明的優點。本行業的技術人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。