本發明屬于砂仁的質量檢測和控制技術領域，具體涉及一種鹽漬砂仁中乙酸龍腦酯的含量測定方法。
背景技術：
中藥砂仁為姜科植物陽春砂amomumvillosumlour.、綠殼砂amomumvillosumvar.xanthioidest.l.wuetsenjen或海南砂amomumlongiligularet.l.wu的干燥成熟果實，具有化濕開胃、溫脾止瀉、理氣安胎之功效，其中陽春砂品質最優。漳州市長泰縣種植使用砂仁有100多年歷史，種植面積130多公頃，年產量15萬千克以上，是福建省砂仁主流品種，經考證鑒定長泰縣種植的砂仁是從廣東省陽春縣引種而來的陽春砂。
砂仁主要化學成分有揮發油類、皂苷類、黃酮類、有機酸類、無機成分等，其主要有效成分之一為揮發油中的乙酸龍腦酯。《中國藥典》2015年版中將砂仁質量指標設定為揮發油和乙酸龍腦酯含量。在中藥商品中，砂仁一般以干燥果實流通，多數學者的研究也集中于干燥砂仁中揮發油的提取和乙酸龍腦酯含量的測定。然而長泰縣民間卻以傳統地方特色鹽淹漬砂仁入藥，目前仍未見對長泰砂仁鹽漬品中乙酸龍腦酯含量進行測定的報道。
技術實現要素：
本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供了一種鹽漬砂仁中乙酸龍腦酯的含量測定方法。
本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：
一種鹽漬砂仁中乙酸龍腦酯的含量測定方法，所述砂仁產自漳州長泰；包括：
1)每年8月下旬，從植株上采摘成熟砂仁果實，按照鹽和該成熟砂仁果實的質量比為0.2～0.3:1的比例將二者拌勻進行鹽漬，得到鹽漬砂仁；
2)將步驟1)得到的鹽漬砂仁粉碎，過三號篩，精密稱取粉末，加入乙酸乙酯中超聲處理25～35min后，冷卻，補加乙酸乙酯至粉末與乙酸乙酯的配方比例為3.9～4.1g：24～26ml；搖勻，靜置23～25h后，用0.4～0.5μm濾膜濾過，得到供試品溶液；
3)精密稱取乙酸龍腦酯對照品，用乙酸乙酯配制成濃度為14.4～14.5mg/ml的對照品儲備液；稀釋該對照品儲備液得到濃度為0.57～0.58mg/ml的對照品溶液；
4)按照以下色譜條件，采用氣相色譜法檢測供試品溶液中乙酸龍腦酯含量；
色譜柱：30.0m×0.32mm×0.25μm的zb-1phenomenex石英毛細管柱；
進樣口溫度：225～235℃；
柱溫：程序升溫法，起始溫度125～135℃，保持時間5～7min，再以45～55℃/min的速率升溫至225～235℃；
檢測器溫度：245～255℃；
分流比：29～31:1；
進樣量：1.0μl。
一實施例中：所述步驟1)中，鹽和成熟砂仁果實的質量比為0.25:1。
一實施例中：所述步驟4)中，進樣口溫度為230℃。
一實施例中：所述步驟4)中，柱溫起始溫度130℃，保持時間6min，再以50℃/min的速率升溫至230℃。
一實施例中：所述步驟4)中，檢測器溫度為250℃。
一實施例中：所述氣相色譜法采用的氣相色譜儀系統為agilent6980n。
一實施例中：所述氣相色譜法采用的檢測器為氫火焰離子化檢測器。
本技術方案與背景技術相比，它具有如下優點：
本發明規范了鹽漬砂仁的炮制方法，發現按照該種方法制備的鹽漬砂仁中乙酸龍腦酯含量與新鮮砂仁相當，既保持了揮發油中乙酸龍腦酯含量，又有利于保存，且鹽漬兩年以上的砂仁質量最好，為砂仁的炮制方法的創新、劑型的改變提供了新的思路；本發明同時提出了鹽漬砂仁的乙酸龍腦酯含量測定方法，為鹽漬砂仁質量檢測與管控體系的建立提供了重要依據，對于鹽漬砂仁產品的進一步開發具有重要意義。
附圖說明
下面結合附圖和實施例對本發明作進一步說明。
圖1為三種砂仁炮制品的乙酸乙酯提取液中乙酸龍腦酯的氣相色譜圖。其中，a.空白溶液；b.對照品溶液；c.新鮮砂仁提取液；d.干燥砂仁提取液；e.鹽漬砂仁提取液；a.溶劑峰；b.乙酸龍腦酯峰。
具體實施方式
下面通過實施例具體說明本發明的內容：
一種鹽漬砂仁中乙酸龍腦酯的含量測定方法，包括：
1)每年8月下旬，從漳州長泰的植株上采摘新鮮成熟砂仁果實，經鑒定確為姜科豆蔻屬植物陽春砂。按照鹽和該新鮮成熟砂仁果實的質量比為0.25:1的比例將二者拌勻進行鹽漬，得到鹽漬砂仁；
另取未經鹽漬的上述新鮮成熟砂仁，以及上述新鮮成熟果實按照常規炮制法進行干燥后得到的水分含量為13.0％的干燥砂仁，進行鹽漬砂仁、新鮮砂仁、干燥砂仁這三種砂仁炮制品的對比。
2)供試品溶液的制備：取上述三種砂仁炮制品，分別粉碎，過三號篩，精密稱取粉末0.4g，置于25ml容量瓶中，加入適量乙酸乙酯(分析純，購自廣東光華化學廠)中超聲處理30min后，冷卻，加乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，靜置24h后，用0.45μm濾膜濾過，得到三種砂仁炮制品的乙酸乙酯提取液，作為供試品溶液；
3)對照品溶液的制備：精密稱取乙酸龍腦酯對照品適量(購自中國藥品生物制品檢定所，批號：201105)，置于10ml容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，配制成濃度為14.452mg/ml的對照品儲備液；精密量取該對照品儲備液1ml，置25ml容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，得到對照品溶液；
4)以下儀器和色譜條件，采用氣相色譜法檢測供試品溶液中乙酸龍腦酯含量，并進行專屬性實驗、線性關系考察、精密度考察、穩定性考察、重復性考察和加樣回收率考察；
儀器：agilent6980n氣相色譜儀系統，氫火焰離子化檢測器(fid)。
色譜條件：
色譜柱：30.0m×0.32mm×0.25μm的zb-1phenomenex石英毛細管柱；
進樣口溫度：230℃；
柱溫：程序升溫法，起始溫度130℃，保持時間6min，再以50℃/min的速率升溫至230℃；
檢測器溫度：250℃；
分流比：30:1；
進樣量：1.0μl。
結果如下：
1.專屬性實驗
分別取上述對照品溶液和供試品溶液于樣品瓶中，加蓋，密封，按上述色譜條件進行專屬性檢測，記錄色譜圖。結果如圖1所示，供試品與對照品在相應的保留時間均顯示相應的色譜峰，空白試劑在與對照品出峰時間點上無吸收峰，表明本方法的專屬性良好。
2.線性關系考察
精密吸取乙酸龍腦酯對照品溶液1、2、3、4、5μl，按照上述色譜條件，以峰面積y為縱坐標，濃度x為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程。結果如下所示：回歸方程y＝127.167116x+20.781764，r＝0.99807，結果表明乙酸龍腦酯在0.57～2.89μg范圍內有良好的線性關系。
3.精密度考察
取乙酸龍腦酯對照品溶液按照上述方法，連續進樣六次，每次進樣1.0μl，測定，記錄峰面積，計算精密度，rsd值為0.23％(n＝6)，表明儀器精密度良好。
4.穩定性考察
取制備好的供試品溶液，按照上述色譜條件下進樣分析，分別在制備后0、1、2、4、6、12、24h進樣，進樣1.0μl。測定結果的rsd為0.50％，表明供試品溶液在24h內穩定。
5.重復性考察
取同一批次的鹽漬砂仁，按照供試品溶液制備方法同時制成6份樣品，進樣1.0μl，測定。按峰面積計算乙酸龍腦酯的平均質量濃度為3.210mg/g，測得結果的rsd為0.35％，表明本方法的重現性好。
6.加樣回收率考察
取同一批次鹽漬砂仁4.0g，精密稱定，置于25ml量瓶中，精密加入乙酸龍腦酯對照品溶液一定量，按上述供試品實驗方法進行分析測定，計算回收率，如表1所示。當年鹽漬的長泰砂仁平均加樣回收率為96.82％，rsd為1.04％；鹽漬一年砂仁平均加樣回收率為96.85％，rsd為1.67％；鹽漬二年砂仁平均加樣回收率為97.34％，rsd為1.03％。測定結果均符合要求，見表1。
表1加樣回收率實驗結果
備注：加樣回收率要求在95-105％之間，rsd不大于3％.
7.含量測定
新鮮砂仁、干燥砂仁、鹽漬砂仁3種炮制品砂仁，按上述方法制備供試品溶液，并按照上述色譜條件檢測分析，結果見表2。
表2樣品中乙酸龍腦酯含量
長泰砂仁三種炮制品中乙酸龍腦酯含量測定結果顯示，新鮮砂仁中乙酸龍腦酯含量3.226mg/g，干燥砂仁中乙酸龍腦酯含量1.805mg/g，鹽漬砂仁中乙酸龍腦酯含量平均值3.348mg/g。鹽漬品含量最高，按照《中國藥典》2015年版中規定，乙酸龍腦酯含量為砂仁質量指標之一，可以表明鹽漬品砂仁品質最佳。
上述實驗結果顯示，傳統應用的干燥砂仁中乙酸龍腦酯含量最低，新鮮砂仁雖然乙酸龍腦酯含量較高，但容易霉變不利于貯存；鹽漬砂仁中乙酸龍腦酯含量與新鮮砂仁相當，而且鹽漬砂仁在1～2年保存時間內乙酸龍腦酯含量穩定，沒有隨保存時間的延長而損失，且以鹽漬兩年的砂仁乙酸龍腦酯含量最高，鹽漬砂仁也不易于霉變生蟲，說明鹽漬砂仁既保持了揮發油中乙酸龍腦酯含量，又有利于保存。
本發明規范化了鹽漬砂仁的炮制方法，同時提出了鹽漬砂仁中有效成分乙酸龍腦酯含量的測定方法，這對于砂仁炮制方法的創新、劑型的改變以及鹽漬砂仁的質量控制方法提供了重要的依據，對于鹽漬砂仁產品的進一步開發具有重要意義。
以上所述，僅為本發明較佳實施例而已，故不能依此限定本發明實施的范圍，即依本發明專利范圍及說明書內容所作的等效變化與修飾，皆應仍屬本發明涵蓋的范圍內。