本發明涉及一種標準樣品制備領域，具體為一種乳粉中鄰苯二甲酸二丁酯類測定用標準樣品的制備方法。
背景技術：
鄰苯二甲酸酯類主要用于改善塑料的加工性能和強度，廣泛應用于塑料和橡膠材料制品。鄰苯二甲酸酯類與塑料分子之間由氫鍵和范德華力連接，易由塑料及其制品遷移至環境中。由于鄰苯二甲酸酯類廣泛存在于自然界中，通過食品包裝材料的接觸、摩擦、溶解等物理、化學作用遷移，或作為非法食品添加劑引入至食品中，鄰苯二甲酸酯類化合物攝入后會干擾人體內分泌系統，危害人體免疫功能、消化系統、生殖系統，并具有潛在的“三致”作用。歐盟、美國、日本等先后限制了這類物質在食品接觸材料、兒童玩具等領域的使用，我國于2011年制定了鄰苯二甲酸二丁酯(dbp)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(dehp)、鄰苯二甲酸二異壬酯(dinp)在食品中的限量標準。
鄰苯二甲酸酯類物質在脂溶性強的食品、及對其有一定溶解度的食品中殘留最為普遍。在國家抽驗計劃中，已連續幾年對乳制品、嬰幼兒食品、酒類、油脂等食品中的dbp、dehp、dinp進行風險監測。目前，國內外有關食品中鄰苯二甲酸酯類物質檢測標準和方法較多，從本發明申請人承擔的2016年黑龍江省乳粉中鄰苯二甲酸二丁酯檢測實驗室比對結果看，檢驗數據整體呈較大離散程度，說明這一項目的檢測存在一定難度，且各實驗室對該項目檢測能力良莠不齊，尚有待加強。此外，國內乳粉檢測領域開展的能力驗證或比對項目多集中在蛋白質、脂肪等營養成分的分析，并沒有鄰苯二甲酸酯類測定用標準樣品。因此，以乳粉為基質，盡快研制出鄰苯二甲酸酯類測定用標準樣品，對客觀估價實驗室鄰苯二甲酸酯檢測結果的準確性和可靠性具有十分重要的意義。
標準樣品一般要求具有足夠高的均勻性和穩定性，而鄰苯二甲酸酯類檢測的特殊性不僅在于其在乳粉中是痕量存在的，并且實驗室處理過程中易引入較高、較難控制的實驗室空白，因此，在這個含量水平上制備出均勻的樣品較難實現。
技術實現要素：
本發明的目的是克服上述不足問題，提供一種乳粉中鄰苯二甲酸酯類測定用標準樣品，含量接近實際殘留量，可常溫運輸，均勻性、穩定性均能夠達到標準要求。另外，提供其制備方法，能夠把微量的鄰苯二甲酯類物質均勻地分布到待測物中去，樣品制備成功率高，制備率為82％。
本發明為實現上述目的所采用的技術方案是：
本發明的一種鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品的制備方法，它是按照以下步驟進行的：
一、基質預處理：將乳粉充分混勻，過篩，取經檢測不含鄰苯二甲酸二丁酯的乳粉，備用；
二、制備樣品：采用均勻分布法，先將鄰苯二甲酸二丁酯定量溶解于溶劑中，混合均勻，得鄰苯二甲酸二丁酯溶液；再將制備好的鄰苯二甲酸二丁酯溶液均勻分布到基質中，攪拌均勻，待溶劑揮發后，凍干，粉碎，再次攪拌混勻，過篩，即制得濃度為10～20mg/kg的小樣，再將基質與小樣攪拌混勻，過篩，即制得鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品；
其中，鄰苯二甲酸二丁酯與溶劑的質量體積比為：0.1g：100ml；鄰苯二甲酸二丁酯溶液與基質的質量體積比為：0.5～0.8ml：1g；小樣與基質的質量比為：0.3～0.5g：1g。
本發明溶劑選取要同時符合下述三種條件的溶劑：a鄰苯二甲酸二丁酯在溶劑中的溶解度好；b鄰苯二甲酸二丁酯在其中不變化；c溶劑揮發性好；d乳粉在其中不結塊，易分散。
本發明與現有技術相比，具有以下優點及有益效果：通過本發明的制備方法獲得的鄰苯二甲酸二丁酯測定用標準樣品，有助于提高實驗室食品中鄰苯二甲酸酯類檢測數據的準確性和可靠性，為統一食品中鄰苯二甲酸酯類檢測標準奠定了基礎。基質選擇實驗室常見且處理難度較大的類型，制備方法簡單可操作性強，能夠把微量的鄰苯二甲酸二丁酯均勻分布到基質中，標準樣品可常溫運輸和傳遞，所含的鄰苯二甲酸二丁酯含量與實際樣品中接近，足夠均勻和穩定。本發明的樣品制備率為82％，通過f檢驗，樣品f值小于f臨界值(f0.05(9，10)＝3.02)，樣品間不存在顯著性差異，即樣品是均勻的，并能夠在6個月內保持穩定。
具體實施方式
具體實施方式一：本實施方式的方案如下：一種鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品的制備方法，它是按照以下步驟進行的：
一、基質預處理：將乳粉充分混勻，過篩，取經檢測不含鄰苯二甲酸二丁酯的乳粉，備用；
二、制備樣品：采用均勻分布法，先將鄰苯二甲酸二丁酯定量溶解于溶劑中，混合均勻，得鄰苯二甲酸二丁酯溶液；再將制備好的鄰苯二甲酸二丁酯溶液均勻分布到基質中，攪拌均勻，待溶劑揮發后，凍干，粉碎，再次攪拌混勻，過篩，即制得濃度為10～20mg/kg的小樣，再將基質與小樣攪拌混勻，過篩，即制得鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品；
其中，鄰苯二甲酸二丁酯與溶劑的質量體積比為：0.1g：100ml；鄰苯二甲酸二丁酯溶液與基質的質量體積比為：0.5～0.8ml：1g；小樣與基質的質量比為：0.3～0.5g：1g。
具體實施方式二：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所述的溶劑為乙腈、甲醇或無水乙醇。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式三：本實施方式與具體實施方式一不同的是：小樣與基質的質量比為：0.3～0.4g：1g。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式四：本實施方式與具體實施方式一不同的是：小樣與基質的質量比為：0.4～0.5g：1g。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式五：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所述的基質與鄰苯二甲酸二丁酯溶液的質量體積比為：0.7～1.0ml：1g。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式六：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所述的基質與鄰苯二甲酸二丁酯溶液的質量體積比為：0.7～0.8ml：1g。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式七：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所述的基質與鄰苯二甲酸二丁酯溶液的質量體積比為：0.5～0.7ml：1g。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式八：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所述的基質與鄰苯二甲酸二丁酯溶液的質量體積比為：0.5～0.6ml：1g。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式九：本實施方式與具體實施方式一不同的是：步驟二的溶劑揮發是采用80℃水浴進行的，在溶劑揮發過程中不斷攪拌，至近干時，移入凍干機。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式十：本實施方式與具體實施方式一不同的是：步驟二的凍干條件為：在真空度(壓強)為20pa的條件下，進行預凍干，預凍干條件為：5℃保持1h，降至-5℃保持1h；預凍干后進行主凍干，主凍干條件為：-25℃保持3h；解吸：30℃保持3h。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式十一：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所制得的鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品需進行稀釋后進行使用，具體是采用空白基質，等量遞增的方式進行逐級稀釋成1～5mg/kg的鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式十二：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所制得的鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品需進行稀釋后進行使用，具體是采用空白基質，等量遞增的方式進行逐級稀釋成1～4mg/kg的鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式十三：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所制得的鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品需進行稀釋后進行使用，具體是采用空白基質，等量遞增的方式進行逐級稀釋成1～3mg/kg的鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品。其它與具體實施方式一相同。
具體實施方式十四：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所制得的鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品需進行稀釋后進行使用，具體是采用空白基質，等量遞增的方式進行逐級稀釋成1～2mg/kg的鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品。其它與具體實施方式一相同。
通過以下實施例驗證本發明的有以效果：
實施例1
本實施例的鄰苯二甲酸二丁酯測定用標準樣品，基質中添加鄰苯二甲酸二丁酯至含量為：2mg/kg，基質為乳粉。
鄰苯二甲酸二丁酯標準樣品的制備方法：
1、基質預處理：將乳粉充分混勻，過80目篩，經檢測不含待測物(即鄰苯二甲酸二丁酯)；
2、樣品制備：采用均勻分布法，先將鄰苯二甲酸二丁酯定量溶解于溶劑中，混合均勻，再將制備好的鄰苯二甲酸二丁酯溶液均勻分布到少量乳粉中，充分攪拌混合，待溶劑揮發至近干后，凍干，粉碎，攪拌混勻，過篩，制成高濃度小樣，再用空白基質逐步稀釋至所需濃度標準樣品。
其中：
(1).溶劑選取同時符合下述三種條件的溶劑：a鄰苯二甲酸二丁酯在溶劑中的溶解度好；b鄰苯二甲酸二丁酯在其中不變化；c溶劑揮發性好；d乳粉在其中不結塊，易分散；
(2).較好的溶劑為乙醇、乙腈；
(3).高濃度小樣制備過程中，溶劑用量為每100克乳粉基質溶劑量為70毫升；
(4).高濃度小樣制備過程中，溶劑揮發采用80℃水浴揮干，不斷攪拌，至近干時，移入凍干機；
(5).凍干條件為：在真空度(壓強)為20pa條件下，預凍干：5℃保持1小時，降至-5℃保持1小時；主凍干：-25℃保持3小時；解吸：30℃保持3小時。
(6).高濃度小樣制備完成后，與空白乳粉逐級稀釋，方式為等量遞增。
本發明內容不僅限于上述各實施方式的內容，其中一個或幾個具體實施方式的組合同樣也可以實現發明的目的。
以下結合具體實例對對本發明做進一步的詳細說明：
所用試劑及標準物質：
乙醇：色譜級，乙腈：色譜級；
鄰苯二甲酸二丁酯，dr.e，純度為99.4％，cas：84-76-9。
1、基質預處理：市售乳粉，打開包裝后將乳粉充分混勻，過80目篩，經檢測不含待測物，混勻后制成空白基質。
2、樣品制備：根據需求和統計學設計用量，確定總樣品量為1600g。
第一步，精密稱取0.1610g鄰苯二甲酸二丁酯(dbp)(純度為99.4％)標準品溶于100ml乙腈中，制成濃度為1.6mg/ml的鄰苯二甲酸二丁酯(dbp)標準溶液，再從中吸取2ml上述鄰苯二甲酸二丁酯(dbp)標準溶液(1.6mg/ml)于100ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度；
第二步，稱取200g乳粉于潔凈的鐵托盤中加入，加入第一步的鄰苯二甲酸二丁酯(dbp)乙醇溶液，攪拌混勻，置于80℃水浴上，待溶劑揮發至近干后，凍干，凍干條件為：在真空度(壓強)為20pa條件下，預凍干：5℃保持1小時，降至-5℃保持1小時；主凍干：-25℃保持3小時；解吸：30℃保持3小時。取出后放置至室溫后，置于攪拌機中反復粉碎三次，攪拌混勻，過80目篩后，制成高濃度小樣(16mg/kg)。
第三步，稱取200g乳粉基質，與第二步所得200g高濃度標準樣品混合，使用樣品混勻機充分混勻三次，再稱取400g乳粉基質，加入到上述樣品中，使用樣品混勻機充分混勻三次，再稱取800g乳粉基質，加入到上述樣品中，使用樣品混勻機充分混勻三次，過80目篩，制得所需濃度乳粉中鄰苯二甲酸二丁酯測定用標準樣品(濃度約為2mg/kg)。
稱取制備好的樣品約20g于25ml玻璃樣品瓶中，外層為密封的鋁箔袋，隨機編號并記錄。
對制備的樣品性能進行測試：
1、樣品均勻性測試：
按照cnas:gl03-2006的方法進行均勻性測試，從制備好的標準樣品中，隨機抽取10個均勻性測試樣品，每個樣品重復測定2次。在短時間內由同一測試人員，使用相同測試方法(sn/t3147-2012《出口食品中鄰苯二甲酸酯的測定》)、相同測試條件、相同測試儀器對樣品進行鄰苯二甲酸二丁酯的檢測，樣品均勻性試驗采用單因子方差統計分析進行評定，只有當樣品中待測物的f值小于fα(f1，f2)時表明制備樣品均勻。測試結果見表1、表2：
表1樣品均勻性測試結果
表2樣品均勻性方差結果分析
f臨界值f0.05(9，10)＝3.02。計算的f值為1.794，該值＜f臨界值，這表明在0.05顯著性水平時，鄰苯二甲酸二丁酯(dbp)測定用標準樣品是均勻的。
2、樣品穩定性測試：
把樣品置于發出后可能經歷的環境條件下保存，以研究在樣品運輸、傳遞過程中，其待測物是否發生顯著性變化。用來確保標準樣品在有效期內完成檢測就不會出現穩定性問題。標準樣品基本處于常溫(18℃-25℃)條件放置，穩定性檢驗總跨度為180天，按照cnas:gl03-2006的方法進行穩定性測試。
每30天隨機抽取樣品5份，每份重復測定2次，檢驗方法、檢測人員、儀器、實驗室條件與均勻性檢驗相同，采用標準方法(sn/t3147-2012《出口食品中鄰苯二甲酸酯的測定》)檢測。采用t值檢驗法評定樣品的穩定性，若t值小于tα(n1+n2-2)時，則表明2個平均值之間無顯著性差異，即制備樣品穩定。測試結果見表3、表4：表3樣品穩定性測試結果
表4樣品穩定性測試結果