本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及一種近紅外的電致化學發光免疫檢測方法。
背景技術：
電致化學發光是指通過電化學方法在電極表面產生一些特殊的物質，這些物質之間或與體系中的其他成分之間通過電子傳遞形成激發態，再由激發態返回到基態產生發光現象。電致化學發光分析技術因無需激發光源，且信噪比和靈敏度均高的特點被廣泛應用在生物分析技術領域。常見的電致化學發光體系有魯米諾體系，吖啶酯類化合物，多環芳香烴類化合物等，主要集中在可見光區，且這些體系在實際應用時的操作繁雜，處理過程冗長，效率低。
技術實現要素：
本發明的目的是為了解決現有技術中存在的缺點，而提出的一種近紅外的電致化學發光免疫檢測方法。
一種近紅外的電致化學發光免疫檢測方法，包括以下步驟：
s1：制備反應電極：向裝有電極的反應器中加入抗原以及一抗，在常溫下進行反應，待沉淀不在生成，用稀釋液和吐溫-20進行清洗，再向反應器中加入含有熒光標記的二抗，繼續反應，直至沉淀不再生成，再用稀釋液和吐溫-20進行清洗，即制得反應電極；
s2：繪制標準曲線：按照s1步驟以不同濃度的抗原為基體制備一系列反應電極，并利用發光儀對反應電極進行測試，記錄化學發光信號強度，繪制不同濃度的抗原與化學發光信號強度的曲線，即得標準曲線；
s3：制備待測血清：取待測血液置于35～45℃的水浴中預熱10分鐘，并將預熱的血液快速轉移至離心機中進行高速離心5～10分鐘，即得待測血清；
s4：取上述血清，按照s1步驟操作，制備待測的電極，并利用發光儀測定化學發光信號強度，根據s2步驟繪制的標準曲線即可計算血清中抗原的濃度。
優選的，所述s1步驟中抗原與稀釋液的體積比為1：100～300。
優選的，所述吐溫-20的加入量為稀釋液的1～5％。
優選的，所述稀釋液為tbst和pbst中的一種。
優選的，所述稀釋液中加入ph緩沖劑，且稀釋液的ph值為9.0～9.5。
優選的，所述s1步驟中熒光標記的二抗是將熒光探針標記到二抗基團中，且熒光探針為硫化銀量子點和硫化銅量子點的任意一種。
本發明提供的免疫檢測方法合理利用電致化學發光技術，選取在近紅外區具有識別功能的熒光探針對二抗進行標記，增強光強度信號的檢出能力，使微弱的光強度信號均能被有效檢測出，提高檢測方法的準確度和靈敏度；該檢測方法操作簡單，使用方便，適用范圍廣，可根據需要繪制不同抗原的化學發光信號強度標準曲線，且繪制的標準曲線可以在有效濃度范圍內反復使用，一種抗原繪制一條標準曲線即可，在使用時將待測樣品濃度稀釋至標準曲線的有效范圍內，根據發光儀檢測的化學發光信號強度即可快速計算出待測樣品中抗原的濃度，人為誤差小，準確率高；且在反應電極制備的過程中使用稀釋液和吐溫-20清洗，可以有效減少未反應抗體對檢測結果的影響，提高檢測的準確率。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步解說。
實施例一
本發明提出的一種近紅外的電致化學發光免疫檢測方法，包括以下步驟：
s1：制備反應電極：向裝有電極的反應器中加入抗原以及一抗，在常溫下進行反應，待沉淀不在生成，用ph值為9.0的tbst和吐溫-20進行清洗，再向反應器中加入含有硫化銀量子點標記的二抗，繼續反應，直至沉淀不再生成，再用ph值為9.0的tbst和吐溫-20進行清洗，即制得反應電極；
s2：繪制標準曲線：按照s1步驟以不同濃度的抗原為基體制備一系列反應電極，并利用發光儀對反應電極進行測試，記錄化學發光信號強度，繪制不同濃度的抗原與化學發光信號強度的曲線，即得標準曲線；
s3：制備待測血清：取待測血液置于35℃的水浴中預熱10分鐘，并將預熱的血液快速轉移至離心機中進行高速離心10分鐘，即得待測血清；
s4：取上述血清，按照s1步驟操作，制備待測的電極，并利用發光儀測定化學發光信號強度，根據s2步驟繪制的標準曲線即可計算血清中抗原的濃度。
本發明中，以乙肝表面抗原為檢測對象，所述s1步驟中抗原與稀釋液的體積比為1：100；所述吐溫-20的加入量為稀釋液的2％。
實施例二
本發明提出的一種近紅外的電致化學發光免疫檢測方法，包括以下步驟：
s1：制備反應電極：向裝有電極的反應器中加入抗原以及一抗，在常溫下進行反應，待沉淀不在生成，用ph值為9.5的pbst和吐溫-20進行清洗，再向反應器中加入含有硫化銀量子點標記的二抗，繼續反應，直至沉淀不再生成，再用ph值為9.5的pbst和吐溫-20進行清洗，即制得反應電極；
s2：繪制標準曲線：按照s1步驟以不同濃度的抗原為基體制備一系列反應電極，并利用發光儀對反應電極進行測試，記錄化學發光信號強度，繪制不同濃度的抗原與化學發光信號強度的曲線，即得標準曲線；
s3：制備待測血清：取待測血液置于40℃的水浴中預熱10分鐘，并將預熱的血液快速轉移至離心機中進行高速離心5分鐘，即得待測血清；
s4：取上述血清，按照s1步驟操作，制備待測的電極，并利用發光儀測定化學發光信號強度，根據s2步驟繪制的標準曲線即可計算血清中抗原的濃度。
本發明中，所述s1步驟中抗原與稀釋液的體積比為1：300；所述吐溫-20的加入量為稀釋液的5％
實施例三
本發明提出的一種近紅外的電致化學發光免疫檢測方法，包括以下步驟：
s1：制備反應電極：向裝有電極的反應器中加入抗原以及一抗，在常溫下進行反應，待沉淀不在生成，用ph值為9.0的pbst和吐溫-20進行清洗，再向反應器中加入含有硫化銅量子點標記的二抗，繼續反應，直至沉淀不再生成，再用ph值為9.0的pbst和吐溫-20進行清洗，即制得反應電極；
s2：繪制標準曲線：按照s1步驟以不同濃度的抗原為基體制備一系列反應電極，并利用發光儀對反應電極進行測試，記錄化學發光信號強度，繪制不同濃度的抗原與化學發光信號強度的曲線，即得標準曲線；
s3：制備待測血清：取待測血液置于45℃的水浴中預熱10分鐘，并將預熱的血液快速轉移至離心機中進行高速離心7分鐘，即得待測血清；
s4：取上述血清，按照s1步驟操作，制備待測的電極，并利用發光儀測定化學發光信號強度，根據s2步驟繪制的標準曲線即可計算血清中抗原的濃度。
本發明中，所述s1步驟中抗原與稀釋液的體積比為1：200；所述吐溫-20的加入量為稀釋液的2％。
實施例四
本發明提出的一種近紅外的電致化學發光免疫檢測方法，包括以下步驟：
s1：制備反應電極：向裝有電極的反應器中加入抗原以及一抗，在常溫下進行反應，待沉淀不在生成，用ph值為9.5的tbst和吐溫-20進行清洗，再向反應器中加入含有硫化銅量子點標記的二抗，繼續反應，直至沉淀不再生成，再用ph值為9.5的tbst和吐溫-20進行清洗，即制得反應電極；
s2：繪制標準曲線：按照s1步驟以不同濃度的抗原為基體制備一系列反應電極，并利用發光儀對反應電極進行測試，記錄化學發光信號強度，繪制不同濃度的抗原與化學發光信號強度的曲線，即得標準曲線；
s3：制備待測血清：取待測血液置于40℃的水浴中預熱10分鐘，并將預熱的血液快速轉移至離心機中進行高速離心5分鐘，即得待測血清；
s4：取上述血清，按照s1步驟操作，制備待測的電極，并利用發光儀測定化學發光信號強度，根據s2步驟繪制的標準曲線即可計算血清中抗原的濃度。
本發明中，所述s1步驟中抗原與稀釋液的體積比為1：200；所述吐溫-20的加入量為稀釋液的5％。
上述實施例一～三使用同一批待測樣品，利用實施例一～三的檢測方法檢測出的乙肝表面抗原的濃度如下：
上述實驗結果表明，利用實施例一～四的檢測方法，檢測出乙肝表面抗原的含量一致，且實施例一～四繪制的標準曲線相吻合，表明該檢測方法的重現性好，一次繪制的標準曲線可以反復使用，且測定的結果準確度高，誤差小。
以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明揭露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。