本發(fā)明屬于煙草化學(xué)分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種卷煙濾嘴對(duì)主流煙氣粒相物中殺菌劑截留量的高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：殺菌劑是用于防治由各種病原微生物引起的植物病害的一類農(nóng)藥，一般指殺真菌劑。但國(guó)際上，通常是作為防治各類病原微生物的藥劑的總稱。從控制作物病害的角度來(lái)說(shuō)，目前殺菌劑有著其他物質(zhì)無(wú)法替代的作用，殺菌劑的總體需求在持續(xù)增加，全球殺菌劑增長(zhǎng)速度達(dá)到近8％，三唑類殺菌劑仍將是主角。為了防止煙葉為病蟲(chóng)害侵噬，保證煙葉產(chǎn)量，在煙葉的種植過(guò)程中也不可避免地使用了殺菌劑。目前，煙草中農(nóng)藥殘留的問(wèn)題已經(jīng)越來(lái)越引起煙草界和全社會(huì)的關(guān)注。煙草作為一種特殊的消費(fèi)品，是通過(guò)煙支燃燒形成煙氣后進(jìn)入人體消費(fèi)，在此過(guò)程煙絲中的農(nóng)藥殘留以一定的轉(zhuǎn)移率轉(zhuǎn)移到了煙氣中。因此，單純以煙葉中的農(nóng)藥殘留限量來(lái)判斷卷煙煙氣的農(nóng)藥殘留安全性是不準(zhǔn)確的，必須明確煙葉中農(nóng)藥殘留向主流煙氣中的遷移情況，才能更準(zhǔn)確評(píng)價(jià)卷煙煙氣農(nóng)藥殘留的安全性。卷煙濾嘴可以吸附卷煙主流煙氣中的化學(xué)成分，但由于濾嘴的濾材差異，吸附效果也有差異。因此，建立一種卷煙濾嘴對(duì)主流煙氣中殺菌劑截留量檢測(cè)方法，對(duì)考察不同濾嘴對(duì)煙氣中殺菌劑的截留效果有重要意義。目前，在煙草中使用的殺菌劑常見(jiàn)的測(cè)定方法有高效液相法、液相色譜法或者氣質(zhì)、高效液相電子捕獲檢測(cè)器和質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法、高效液相火焰光度檢測(cè)器檢測(cè)法、液質(zhì)聯(lián)用法等，但評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性有待提高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供更加準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)卷煙煙氣農(nóng)藥殘留的安全性的方法。本發(fā)明采用乙酸乙酯-環(huán)己烷收集抽吸后的卷煙濾嘴，經(jīng)基質(zhì)分散固相萃取凈化，用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定濾嘴中截留到的殺菌劑的含量。經(jīng)文獻(xiàn)搜索，未發(fā)現(xiàn)與本
發(fā)明內(nèi)容相同文獻(xiàn)的公開(kāi)報(bào)道。本發(fā)明提供一種卷煙濾嘴對(duì)主流煙氣中殺菌劑截留量的檢測(cè)方法，以研究濾嘴對(duì)主流煙氣中殺菌劑的截留情況。本發(fā)明提供一種卷煙濾嘴中主流煙氣殺菌劑截留量的高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，包括以下步驟：(1)在吸煙機(jī)對(duì)卷煙進(jìn)行抽吸；(2)取下步驟(1)卷煙上的濾嘴，將濾嘴外的成型紙和接裝紙去除后，將濾嘴剪碎后放入離心管中，加入乙酸乙酯-環(huán)己烷和內(nèi)標(biāo)液，振蕩使至樣品浸潤(rùn)；(3)加入固相萃取試劑，振蕩后離心分離；(4)取步驟(3)離心后的上層清液至凈化離心管中，振蕩后離心分離；(5)取步驟(4)離心后的上層清液采用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析；(6)所述高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜的條件為：色譜柱：C18液相色譜分析柱；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)相組成為水和乙腈的混合物、流速為200uL/min；掃描方式：正離子掃描；監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；電噴霧電壓：5500V；霧化氣壓力：0.414MPa；離子源溫度：500℃。優(yōu)選地，所述的內(nèi)標(biāo)液為1ug/1000mL的丙草丹甲醇溶液。優(yōu)選地，步驟(2)、(3)和(4)所述振蕩的頻率2500r/min，時(shí)間為6min。優(yōu)選地，步驟(3)和(4)所述離心分離的轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心時(shí)間為10min。優(yōu)選地，步驟(3)所述固相萃取試劑為質(zhì)量比為2:1:8:2的檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、無(wú)水硫酸鎂和氯化鈉的混合物。優(yōu)選地，步驟(4)所述凈化離心管中含有質(zhì)量比為1:1:2的N-丙基乙二胺、石墨化碳和無(wú)水硫酸鎂的混合物。優(yōu)選地，步驟(6)所述水和乙腈的梯度混合物為體積比90:10，50:50，50:50，40:60，20:80，5:95，5:98，90:10，90:10。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：用基質(zhì)分散固相萃取凈化抽吸后卷煙濾嘴的提取液，采用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)濾嘴中殺菌劑截留量的檢測(cè)。為研究濾嘴對(duì)主流煙氣中殺菌劑的截留情況提供檢測(cè)依據(jù)，更準(zhǔn)確評(píng)價(jià)卷煙煙氣農(nóng)藥殘留的安全性。附圖說(shuō)明無(wú)具體實(shí)施方式下面對(duì)本發(fā)明的分析方法步驟作詳細(xì)描述：a.在吸煙機(jī)上裝上待測(cè)卷煙，參照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19609-2004《卷煙用常規(guī)分析用吸煙機(jī)測(cè)定總粒相物和焦油》，抽吸20支卷煙；b.卷煙抽吸完畢后，取下濾嘴，去除殘留煙絲。將濾嘴外的成型紙和接裝紙去除后剪碎濾嘴至長(zhǎng)0.5cm，寬0.2cm，放入50mL離心管中，加乙酸乙酯-環(huán)己烷30mL，100uL內(nèi)標(biāo)液，2500r/min振蕩6min至樣品被乙酸乙酯-環(huán)己烷充分浸潤(rùn)；c.加入固相萃取試劑，包含1.0g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉、4.0g無(wú)水硫酸鎂、1.0g氯化鈉；置于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min速度振蕩6min，然后以4000r/min離心10min；d.移取離心上清液2mL至凈化離心管中，凈化離心管中含50mg的N-丙基乙二胺、50mg石墨化碳、100mg無(wú)水硫酸鎂，置于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min，然后以10000r/min離心2min，取上清液1mL經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，之后采用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析。e.高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜的條件為：色譜柱：C18液相色譜分析柱；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)相組成為水和乙腈的梯度混合物、流速為200uL/min；掃描方式：正離子掃描；監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；電噴霧電壓：5500V；霧化氣壓力：0.414MPa；離子源溫度：500℃。儀器與試劑WatersAcquityUPLC超高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)，AB3200QTrap串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)ABSciex公司)，Talboys多管旋渦混合儀(美國(guó)Talboys公司)，Millipore超純水機(jī)(美國(guó)Millipore公司)，Eppendorf5804臺(tái)式離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)。乙腈、甲醇：色譜級(jí)，購(gòu)自美國(guó)Tiade公司；乙酸乙酯、環(huán)己烷：購(gòu)自dikma公司；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)丙草丹，用作內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，純度≥95％：購(gòu)自Dr.Ehrenstorfer公司；固相萃取試劑：提取試劑包含1.0g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉、4.0g無(wú)水硫酸鎂、1.0g氯化鈉；凈化離心管含50mg的N-丙基乙二胺、50mg石墨化碳、100mg無(wú)水硫酸鎂，購(gòu)自美國(guó)Agilent公司。具體實(shí)驗(yàn)步驟將待測(cè)市售卷煙，在GB/T16447-2004規(guī)定的煙草及煙草制品調(diào)節(jié)和測(cè)試的大氣環(huán)境條件下平衡48h，經(jīng)分選后，用符合ISO30008要求的吸煙機(jī)，在常規(guī)分析用吸煙機(jī)標(biāo)準(zhǔn)條件(1口/分鐘，2秒/口，35.0mL/口)下抽吸。卷煙抽吸完畢后，取下濾嘴，去除殘留煙絲。將濾嘴外的成型紙和接裝紙去除后剪碎濾嘴至長(zhǎng)0.5cm，寬0.2cm，放入50mL離心管中，加乙酸乙酯-環(huán)己烷30mL，100uL內(nèi)標(biāo)液，2500r/min振蕩6min至樣品被乙酸乙酯-環(huán)己烷充分浸潤(rùn)、提取。用固相萃取試劑進(jìn)行凈化。加入固相萃取試劑充分混合(置于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min)，然后以4000r/min離心10min；移取離心上清液2mL至凈化離心管中,于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min，然后以10000r/min離心2min，取上清液1mL經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，得到待檢測(cè)液。測(cè)定條件——色譜柱：C18液相色譜分析柱(柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑2.1mm，固定相粒徑3μm)或相當(dāng)者；——柱溫：25℃；——進(jìn)樣量：10μL；——流動(dòng)相組成、流速及梯度變化，見(jiàn)表1；——掃描方式：正離子掃描；——監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；——電噴霧電壓：5500V；——霧化氣壓力：0.414MPa；——離子源溫度：500℃；表1液相色譜流動(dòng)相組成、流速及梯度變化時(shí)間(min)流速(uL/min)水(％)乙腈(％)0.0020090101.0020050505.00200505016.00200406025.00200208030.0020059540.0020059840.01200901045.002009010標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到每個(gè)農(nóng)藥目標(biāo)化合物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比以及濃度之比，通過(guò)線性擬合檢查質(zhì)譜檢測(cè)器的響應(yīng)是否呈線性。當(dāng)相關(guān)系數(shù)R2≥0.99，可以采用單一水平的混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。單一水平混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線應(yīng)使用中等濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液制作。每次試驗(yàn)均應(yīng)制作混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，每進(jìn)樣10次后應(yīng)加入一個(gè)中等濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果測(cè)得值與原值相差超過(guò)10％，則應(yīng)重新進(jìn)行混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作。樣品測(cè)定：對(duì)試樣進(jìn)行分析，依據(jù)內(nèi)標(biāo)法由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得到測(cè)定值。平行進(jìn)行兩次樣品測(cè)定，以兩次平行測(cè)定結(jié)果的平均值作為最終測(cè)定結(jié)果。兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差應(yīng)小于10％。實(shí)施例1選取市售國(guó)內(nèi)卷煙樣品，按照上述測(cè)試方法進(jìn)行卷煙濾嘴中的農(nóng)藥殘留量的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示卷煙濾嘴中沒(méi)檢出甲基硫菌靈、多菌靈、霜霉威、菌核凈、異菌脲等殺菌劑殘留。濾嘴的截留率(wt％)＝(濾嘴中截留量/卷煙抽吸前煙絲中殘留量)×100wt％表1卷煙濾嘴中的殺菌劑殘留量的檢測(cè)結(jié)果注：表中/表示未檢出。實(shí)施例2由于市售卷煙樣品濾嘴中沒(méi)檢出上述殺菌劑，采用外加注射不同濃度的殺菌劑(甲基硫菌靈、多菌靈和霜霉威)，分別注射1ug/20支、4ug/20支、20ug/20支和80ug/20支到煙支中，抽吸后按照上述測(cè)試方法同樣的步驟對(duì)卷煙濾嘴中甲基硫菌靈、多菌靈和霜霉威進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果顯示：外加到煙支中的甲基硫菌靈含量在1.0ug/20支、4.0ug/20和20ug/20支時(shí)，在卷煙濾嘴中未檢測(cè)到甲基硫菌靈及其代謝產(chǎn)物多菌靈；外加到煙支中的甲基硫菌靈含量在80ug/20支時(shí)，在卷煙濾嘴中檢測(cè)到甲基硫菌靈及多菌靈。外加到煙支中的霜霉威含量在1.0ug/20支和4.0ug/20支時(shí)，在卷煙濾嘴中未檢測(cè)到霜霉威；外加到煙支中的稻瘟靈含量在20ug/20支和80ug/20支時(shí)，在卷煙濾嘴中檢測(cè)到霜霉威，并且隨著外加量的增加濾嘴對(duì)霜霉威的截留量、截留率升高。結(jié)果見(jiàn)表2。其中：濾嘴的截留率(wt％)＝(濾嘴中截留量/卷煙抽吸前煙絲中殘留量)×100wt％。因此該方法可以用來(lái)檢測(cè)卷煙濾嘴中主流煙氣殺菌劑的截留量。表2外加甲基硫菌靈和霜霉威后卷煙濾嘴對(duì)其截留量的檢測(cè)結(jié)果注：表中/表示未檢出。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3