本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)澤蘭酮化合物的超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法，可用于檢測(cè)草粉和飼料中澤蘭酮化合物的種類(lèi)和含量。
背景技術(shù)：
9-羰基-10Hβ澤蘭酮和9-羰基-10，11去氫澤蘭酮是從紫莖澤蘭植株中獲得的兩種澤蘭酮化合物，它們都含有一個(gè)杜松烷倍半萜母體。研究證明它們是紫莖澤蘭植株的主要毒性成分，可造成大鼠肝中毒和膽汁淤滯，是紫莖澤蘭加工成草粉和飼料的工藝環(huán)節(jié)中必須嚴(yán)格控制的成分。目前，檢測(cè)這兩種澤蘭酮化合物的方法僅有高效液相色譜法，該方法完成一次色譜分析需要30min，而本法僅需5min，大大提高了工作效率，同時(shí)檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度方面也優(yōu)于高效液相色譜法。本法的建立對(duì)今后檢測(cè)紫莖澤蘭草粉原料及產(chǎn)品的質(zhì)量和評(píng)價(jià)其毒性具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速、可靠的澤蘭酮化合物的檢測(cè)方法。該方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、前處理簡(jiǎn)單、分析速度快，能滿足紫莖澤蘭草粉和飼料中兩種澤蘭酮化合物的定性和定量檢測(cè)。
根據(jù)本發(fā)明中用于檢測(cè)澤蘭酮化合物的方法，該方法包括以下步驟：
獲取超高效液相色譜中澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和質(zhì)譜中澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰、以及澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線性方程。
制備樣品溶液，進(jìn)行超高效液相色譜檢測(cè)，得到樣品中各組分的保留時(shí)間，對(duì)各個(gè)組分進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，得到各個(gè)組分的特征碎片離子峰及特征碎片離子峰面積。
將各個(gè)組分的保留時(shí)間和特征碎片離子峰與所述澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和特征離子峰進(jìn)行對(duì)比，從而確定所述樣品中含有的澤蘭酮化合物的種類(lèi)，并根據(jù)所述特征碎片離子峰面積與濃度之間的線性方程進(jìn)行計(jì)算，從而確定所述樣品中含有的澤蘭酮化合物的含量。
其特征在于，所述澤蘭酮化合物為9-羰基-10Hβ澤蘭酮和9-羰基-10，11去氫澤蘭酮中的一種或兩種。
所述液相色譜為超高效液相色譜，所述質(zhì)譜檢測(cè)是通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)澤蘭酮化合物的方法不僅具有分析速度快，還具有精密度和檢測(cè)靈敏度高的特點(diǎn)。具體地，根據(jù)該法可以在5分鐘內(nèi)完成兩種澤蘭酮化合物的分析檢測(cè)，并且檢出限為0.005-0.022mg/L，在1.4-2.1mg/g的3個(gè)添加水平范圍內(nèi)的平均回收率為88.85％-109.35％，精密度均小于12％。
附圖說(shuō)明
圖1兩種澤蘭酮化合物的液質(zhì)分析圖譜。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)描述，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的保護(hù)范圍并不受具體實(shí)施方式的限制。
實(shí)施例1
(1)澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備
分別準(zhǔn)確稱(chēng)取適量澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至100mL作為母液，使用時(shí)，用甲醇逐級(jí)稀釋作為標(biāo)準(zhǔn)工作液，9-羰基-10Hβ澤蘭酮濃度為0.87，1.392，1.74，2.61，3.48mg/L，9-羰基-10，11去氫澤蘭酮濃度為0.33，0.66，1.32，2.64，3.96mg/L。
(2)澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液的超高效液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)
檢測(cè)儀器為ACQUITY UPLC-TQD超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)。
超高效液相色譜分析的條件包括：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1mmx100mm，填料粒徑為1.7μm)；流動(dòng)相為甲醇和水；梯度洗脫程序?yàn)椋?-0.5min，甲醇和水的體積比為10∶90；0.5-2.6min，甲醇和水的體積比為90∶10；2.6-5min，甲醇和水的體積比為10∶90；流動(dòng)相的流速為0.3mL/min，柱溫為40℃，樣品室的溫度為18℃，進(jìn)樣量3μL。
質(zhì)譜檢測(cè)條件為：電噴霧正離子電離，毛細(xì)管電壓為3.5kv，離子源溫度為150℃，去溶劑氣溫度為350℃，去溶劑氣流量為650L/h，錐孔氣流量為50L/h，碰撞氣體為氬氣，多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。
澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品在超高效液相色譜中的保留時(shí)間，在串聯(lián)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰以及特征碎片離子峰如下表1所示。
表1
*：定量特征碎片離子；Δ：定性特征碎片離子
表1中，每種澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品都給出了兩個(gè)特征碎片離子，其中定量特征碎片離子的離子峰面積用于與濃度作圖，從而得出特征碎片離子峰面積與濃度之間的線性方程，定性特征碎片離子用于輔助定量特征碎片離子來(lái)確定澤蘭酮化合物的種類(lèi)。
在上述超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件下，對(duì)具有不同濃度的澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢測(cè)，確定特征碎片離子峰面積與濃度之間的線性方程，得到的線性方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)如表2所示。按3倍信噪比估算檢出限，10倍信噪比估算定量限。
表2
*：上述線性方程中的x對(duì)應(yīng)于濃度，Y對(duì)應(yīng)于特征碎片離子峰面積。
(3)方法的回收率和精密度
紫莖澤蘭草粉中分別添加1.4，1.7，2.1mg/g澤蘭酮化合物標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)添加濃度設(shè)置4個(gè)平行樣，用本發(fā)明的用于檢測(cè)澤蘭酮化合物的方法進(jìn)行測(cè)定，確定方法的回收率和精密度。澤蘭酮化合物的添加量、回收率和精密度結(jié)果見(jiàn)表3。
表3
表3中的數(shù)據(jù)表明，在高中低3個(gè)添加水平范圍內(nèi)，澤蘭酮化合物的平均回收率為88.85％-109.35％，RSD小于11.83％，說(shuō)明該方法的重現(xiàn)性良好，儀器穩(wěn)定。
實(shí)施例2
供試溶液的制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取紫莖澤蘭草粉(葉片)0.100g，加入40mL甲醇進(jìn)行超聲提取2次，每次30min，合并兩次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液過(guò)0.22μm微孔濾膜后，進(jìn)行定性定量檢測(cè)。
按照實(shí)施例1中超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定該草粉含有9-羰基-10Hβ澤蘭酮和9-羰基-10，11去氫澤蘭酮，它們的含量分別為5.15mg/g和2.21mg/g。
實(shí)施例3
供試溶液的制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取紫莖澤蘭草粉(莖)0.500g，加入40mL甲醇進(jìn)行超聲提取2次，每次30min，合并兩次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液過(guò)0.22μm微孔濾膜后，進(jìn)行定性定量檢測(cè)。
按照實(shí)施例1中超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定該草粉含有9-羰基-10，11去氫澤蘭酮，其含量為0.10mg/g，未檢測(cè)出9-羰基-10Hβ澤蘭酮。
實(shí)施例4
供試溶液的制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取紫莖澤蘭草粉(根)0.500g，加入40mL甲醇進(jìn)行超聲提取2次，每次30min，合并兩次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液過(guò)0.22μm微孔濾膜后，進(jìn)行定性定量檢測(cè)。
按照實(shí)施例1中超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定該草粉含有9-羰基-10，11去氫澤蘭酮，其含量為0.28mg/g。
實(shí)施例5
供試溶液的制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取紫莖澤蘭草粉(葉片粉碎后經(jīng)微生物發(fā)酵脫毒)1.000g，加入40mL甲醇進(jìn)行超聲提取2次，每次30min，合并兩次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液過(guò)0.22μm微孔濾膜后，進(jìn)行定性定量檢測(cè)。
按照實(shí)施例1中超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定該草粉含有9-羰基-10，11去氫澤蘭酮，其含量為0.25mg/g。
以上公開(kāi)的僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，但是，本發(fā)明并非局限于此，任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員能思之的變化都應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。