本發明涉及自身抗體篩查技術領域，具體為水源性高碘地區人群甲狀腺自身抗體篩查分析方法及應用。
背景技術：
甲狀腺自身抗體包括甲狀腺微粒體抗體(TMAb)、甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)、促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)和甲狀腺激素抗體(TAb)。其中甲狀腺微粒體抗體中有一種叫做甲狀腺過氧化物酶抗體(TROAb)，其作用相當重要，是甲狀腺的主要破壞性抗體，在自身免疫性甲狀腺疾病中水平升高，是對甲狀腺細胞主要的破壞性抗體。促甲狀腺激素、TROAb、TRAb等抗體在自身免疫性甲狀腺疾病診斷過程中的敏感性、特異性、準確性較高，聯合檢測對自身免疫性甲狀腺疾病的診斷價值更大。
近年來隨著人們生活水平的提高，飲食結構的改變，精神壓力的增加，生活節奏的加快，保健意識的增強以及環境影響甲狀腺功能物質的增加，甲狀腺疾病的發病率呈上升趨勢。竇瑜貴等對成人碘營養及甲狀腺功能狀態研究證實，隨著碘攝入量的增加，TPOAb、TGAb的陽性率呈上升趨勢，水源性高碘地區健康體檢人群甲狀腺自身抗體的陽性率較高，對甲狀腺功能正常而自身抗體陽性者進行動態監測、隨訪或早期干預，有利于甲狀腺疾病早期診斷、鑒別診斷及其防治。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供水源性高碘地區人群甲狀腺自身抗體篩查分析方法，以解決上述背景技術中提出的問題。
為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：水源性高碘地區人群甲狀腺自身抗體篩查分析方法，包含以下步驟：
A、將吡啶釕標記的X物質對應的抗體、待測血清和生物素化的X物質充分混合，使待測血清和吡啶釕標記的抗體競爭與生物素化的X物質結合；
B、加入鏈霉親和素包被的磁性微粒，充分反應后，鏈霉親和素包被的磁性微粒與生物素化的抗原-抗體復合物緊密結合；
C、將反應液吸入流動池，通過電磁作用，磁珠微粒吸附于電極表面，加入三羥甲基氨基甲烷，除去未吸附于電極表面的物質；
D、加入一定量的三丙胺溶液，加電壓啟動ECL反應，使吡啶釕標記復合體化學發光，并通過光電倍增器測定發光強度，發光的強弱程度與待測血清中抗體的含量成反比；
E、繪制或計算發光信號強弱對該抗體量的曲線，從而建立疾病發生前或整個疾病過程中受試者的抗體產生譜，動態監測以建立抗體產生譜；
F、應用SPSS 17.0軟件進行統計學分析，在不同性別、年齡組中甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體的陽性率以及自身抗體在各種甲狀腺疾病中的陽性率，采用χ2檢驗進行組間比較，應用非條件Logi-stic回歸，計算甲狀腺抗體陽性人群中發生各種甲狀腺功能異常的風險。
優選的，所述待測樣品為血清。
優選的，所述待測物質為甲狀腺自身抗體。
優選的，所述第一抗體為單克隆免疫球蛋白。
與現有技術相比，本發明的有益效果是：采用電化學發光免疫分析測定血清甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體水平，對甲狀腺疾病的診斷和鑒別診斷具有重要價值，結合分析甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體等抗體水平差異，對甲狀腺疾病尤其是自身免疫性甲狀腺疾病的診斷具有重要價值。聯合檢測促甲狀腺激素、甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體等對自身免疫性甲狀腺疾病和非自身免疫性甲狀腺疾病的敏感性和特異性均高于單項指標的檢測。因此，測定血清甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體水平有助于自身免疫性甲狀腺疾病的診斷、鑒別診斷、療效觀察和預后監測。
具體實施方式
下面對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
本發明提供一種技術方案：水源性高碘地區人群甲狀腺自身抗體篩查分析方法，包含以下步驟：
A、將吡啶釕標記的X物質對應的抗體、待測血清(含X物質對應的抗體)和生物素化的X物質充分混合，使待測血清和吡啶釕標記的抗體競爭與生物素化的X物質結合；
B、加入鏈霉親和素包被的磁性微粒，充分反應后，鏈霉親和素包被的磁性微粒與生物素化的抗原-抗體復合物緊密結合；
C、將反應液吸入流動池，通過電磁作用，磁珠微粒吸附于電極表面，加入三羥甲基氨基甲烷，除去未吸附于電極表面的物質；
D、加入一定量的三丙胺溶液，加電壓啟動ECL反應，使吡啶釕標記復合體化學發光，并通過光電倍增器測定發光強度，其發光強度的強弱與待測血清中抗體的含量成反比；
E、繪制或計算發光信號強弱對該抗體量的曲線，從而建立疾病發生前或整個疾病過程中受試者的抗體產生譜，動態監測以建立抗體產生譜；
F、應用SPSS 17.0軟件進行統計學分析，在不同性別、年齡組中甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體的陽性率以及自身抗體在各種甲狀腺疾病中的陽性率，采用χ2檢驗進行組間比較，應用非條件Logi-stic回歸計算甲狀腺抗體陽性人群中發生各種甲狀腺功能異常的風險。
本實施例中，待測樣品為血清。
本實施例中，待測物質為甲狀腺自身抗體。
本實施例中，第一抗體為單克隆免疫球蛋白。
甲狀腺疾病主要依據血清TSH、FT3、FT4、TT3、TT4檢測結果進行診斷，其診斷標準如下：甲狀腺功能亢進(甲亢)：有甲亢的癥狀或體征，同時FT3＞7.1pmol/l，FT4＞22pmol/L，TSH＜0.27mIU/L者；亞臨床甲狀腺功能亢進(亞臨床甲亢)：無甲亢的癥狀或體征，同時FT3和FT4正常，TSH＜0.27mIU/L；甲狀腺功能減退(甲減)：有甲減的癥狀或體征，同時FT3＜2.8pmol/L，FT4＜12pmol/L，TSH＞4.2mIU/L者；亞臨床甲狀腺功能減退(亞臨床甲減)：無甲減的癥狀或體征，TSH＞4.20mIU/L，FT3和FT4正常；TPOAb＞34IU/mL為TPOAb陽性，TGAb＞115IU/mL為TGAb陽性。
分析結果如下：
1、健康體檢者不同年份甲狀腺自身抗體異常檢出率比較
表1結果顯示，3218名健康體檢者甲狀腺自身抗體TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb異常檢出率隨年份的增加呈明顯的增高趨勢，2013年與2014和2015年比較差異均有統計學意義(P＜0.001)，但2014和2015年TPOAb+TgAb均陽性的差異無統計學意義(χ2為1.651，P為0.199)。
表1 健康體檢者不同年份血清TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb陽性率比較[n(％)]
2、健康體檢者不同性別、不同年齡甲狀腺自身抗體檢出率比較
表2結果顯示，調查的3218名健康人群中，甲狀腺自身抗體總的陽性檢出率為16.19％(521/3218)，TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb的陽性檢出率分別為14.57％、12.74％和11.12％。TPOAb的陽性檢出率男性顯著低于女性(6.92％VS 21.53％，χ2＝137.634，P＜0.001)，均隨年齡增加而增高，男性50～59歲年齡組檢出率最高(9.49％)，女性≥70歲年齡組達高峰(28.10％)；TGAb的陽性檢出率男性顯著低于女性(5.68％VS 19.16％，χ2＝131.169，P＜0.001)，)其年齡分布特征與TPOAb相同，男性50～59歲年齡組檢出率最高(7.32％)，女性≥70歲年齡組陽性檢出率高達19.16％。TPOAb+TgAb均陽性的檢出率男性顯著低于女性(5.03％VS 16.67％，χ2＝110.002，P＜0.001)，男性50～59歲年齡組檢出率最高(5.15％)，女性≥70歲年齡組達高峰(20.26％)。無論男性還是女性，30歲以上各年齡組與30歲以下年齡組TPOAb、TGAb和TPOAb+TgAb陽性檢出率均有統計學意義(P＜0.001)。
表2 健康體檢者不同性別、不同年齡甲狀腺自身抗體陽性檢出率[n(％)]的比較
其中：①總人群中，不同性別之間甲狀腺自身抗體檢出率比較：χ2＝535.427，P＜0.001；②各年齡組男性甲狀腺自身抗體檢出率比較：χ2＝16.310，P＝0.006；③各年齡組女性甲狀腺自身抗體檢出率比較：χ2＝78.343，P＜0.001。
3、健康體檢者各年齡組不同性別甲狀腺自身抗體檢出率比較
表3結果顯示，各年齡組不同性別之間甲狀腺自身抗體陽性檢出率均有顯著性差異(P值＜0.05～＜0.001)，其中20～29歲年齡組TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb陽性檢出率差異的P值分別為0.013、0.003和0.034，其余各年齡組不同性別差異的P值均＜0.001。
表3 健康體檢者各年齡組不同性別甲狀腺自身抗體檢出率[n(％)]比較
4、甲狀腺功能異常者甲狀腺自身抗體陽性檢出率及OR值比較
表4結果顯示，各種甲狀腺功能異常疾病中TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb陽性檢出率的比例不同，陽性檢出率和OR由高到低依次為甲減、甲亢、亞臨床甲減和亞臨床甲亢，甲亢、亞臨床甲亢和甲減、亞臨床甲減之間均有顯著性差異。
表4 各組甲狀腺功能異常人群甲狀腺自身抗體檢出率[n(％)]及OR值比較
由以上表格數據可知，在水源性高碘地區，其甲狀腺功能異常患病率較高，尤其亞臨床甲狀腺疾病的發病率更高。
實施案例：
TPOAb、TgAb陽性的亞臨床甲狀腺功能減退易演變為甲狀腺功能減退。一項隨訪4～8年的研究結果發現，20％～50％的亞臨床甲狀腺功能減退患者發展為甲狀腺功能減退。65歲以上，尤其是甲狀腺自身抗體陽性者，4年內從亞臨床甲狀腺功能減退轉化為甲狀腺功能減退的幾率高達80％，說明甲狀腺自身抗體陽性是導致甲狀腺功能異常的危險因素。雙抗體陽性在甲狀腺功能異常人群中的陽性率低于任何單一抗體的陽性率，但更易導致AITD的發生，說明兩種抗體對甲狀腺的損傷起協同作用。對甲狀腺功能正常而自身抗體陽性者進行隨訪，1年后甲狀腺功能減退和甲狀腺功能亢進的發生率分別為5.2％和3.7％，TPOAb陽性者甲狀腺功能減退的發生率(5.5％)顯著高于TPOAb陰性者(0.5％)。一項20年的隨訪發現，甲狀腺功能正常而自身抗體陽性者，每年以2％～4％的速度發展為甲狀腺功能減退。抗體出現的高峰在60～＜70歲，較亞臨床甲狀腺功能減退發病的高峰早10年，證實自身抗體導致甲狀腺的損傷是一個潛在、慢性漸進的過程。
滄州市作為水源性高碘地區，其甲狀腺功能異常和自身抗體陽性的檢出率較高，尤其亞臨床甲狀腺功能減退的患病率更高，且與性別和年齡有關。亞臨床甲狀腺功能減退者通常沒有明顯的臨床表現，很容易被忽視，大多數通過甲狀腺功能項目檢查后發現。TPOAb和TGAb是診斷AITD的重要指標，AITD易感人群血液內TPOAb首先升高，繼而TSH升高，FT4及其他甲狀腺激素水平變化出現較晚。因此，將甲狀腺功能和自身抗體檢測列為健康人群的常規體檢項目非常必要，加強對甲狀腺疾病的篩查，有利于甲狀腺疾病的早期診斷和鑒別診斷，尤其對甲狀腺功能正常而自身抗體陽性者進行動態監測和隨訪，及時調整飲食習慣、生活方式，或進行早期干預治療，有助于甲狀腺疾病的防治。
本發明采用電化學發光免疫分析測定血清甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體水平用于甲狀腺疾病的診斷，結合分析甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體等抗體水平差異，對甲狀腺疾病尤其是自身免疫性甲狀腺疾病具有重要的診斷價值。促甲狀腺激素、甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體等聯合檢測對自身免疫性甲狀腺疾病和非自身免疫性甲狀腺疾病診斷和鑒別診斷的敏感性和特異性均高于單項指標的檢測。因此，測定血清甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體水平有助于自身免疫性甲狀腺疾病的診斷、觀察療效和預后監測。
盡管已經示出和描述了本發明的實施例，對于本領域的普通技術人員而言，可理解在不脫離本發明的原理和精神的情況下，對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發明的范圍由所附權利要求及其等同物限定。