低分子量PEG修飾劑含量測定方法與流程

本發明屬于藥物分析技術領域。

背景技術：

聚乙二醇(PEG)是一種pH中性，無毒，且具有獨特理化性質和良好生物相容性的親水高分子聚合物，也是經FDA批準的極少數可以體內注射的合成聚合物之一。當PEG偶聯到蛋白質、多肽、小分子有機藥物或納米顆粒外殼上時，可以降低藥物制劑的免疫清除以及腎臟的快速消除，延長藥物的體內循環時間，減小藥物的毒性。作為新型的藥用輔料，PEG的質量控制以及在體內的吸收、分布與排泄過程對于PEG化藥物的設計與評價具有十分重要的意義。

二乙二醇修飾劑一種新型的功能性PEG修飾劑，是迄今為止已知聚合物中蛋白和細胞吸收水平最低的聚合物，由于二乙二醇無毒及良好的生物相容性，該藥物修飾是將活化的二乙二醇通過化學方法偶聯到藥物上，改善藥物的理化性質和生物學活性，改進了藥物動力學和藥效等性質，顯著增強藥物的溶解性和穩定性，減少免疫原性和抗原性，降低毒副作用，增加了體內生物活性和療效等功效，這種技術現已開始應用于蛋白質(肽類)、酶、抗體及小分子藥物中。

目前對于PEG的分析常采用放射性標記法、比色法、Western Blot和高效液相色譜法(HPLC)，但這些方法均存在明顯的不足。例如，放射性標記法用于標記PEG時成本太高，且目前尚未建立成熟的方法學檢驗標記效率，也沒有對比試驗說明標記后的PEG在體內的動力學行為是否發生了變化；比色法和Western Blot法都不能得到精確的定量結果，且后者是通過測定與PEG結合的抗體量來間接對PEG進行定量。鑒于抗體的選擇性差，可能和樣本中存在的內源性干擾物質結合，故不適合血漿或組織等復雜生物樣本中PEG的定量分析；HPLC法采用折射率檢測器，分析時間長，且定量下限僅為50mg/mL，不足以分析生物體內痕量的PEG水平。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種低分子量PEG修飾劑含量測定方法。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種低分子量PEG修飾劑含量測定方法，采用氣相色譜法進行檢測，檢測步驟為：

1)通過FID檢測器首先建立PEG測定標準曲線，采用毛細管柱，載氣為高純氮，柱流速為1mL/min，汽化室溫度為250℃，采用FID檢測器，溫度250℃，柱溫為150℃，進樣量為1uL，測定濃度為1、2、3、4、5ug/mL的標準溶液，得到PEG測定標準曲線，峰面積與濃度線性關系良好，R2＝0.992；

2)將待檢測液加適量純水稀釋到適當濃度，采用毛細管柱，載氣為高純氮，柱流量為1mL/min,汽化室溫度為250℃，采用FID檢測器，溫度250℃，柱溫為150℃條件下測定峰面積；

3)根據標準曲線，得到待檢測液中低分子量PEG修飾劑的含量。

進一步地，所述的低分子量PEG修飾劑指的是分子量為2000以內的PEG修飾劑。

進一步地，所述的低分子量PEG修飾劑為二乙二醇丙酸甲酯、二乙二醇丙酸乙酯、二乙二醇丙酸正丁酯中的任意一種。

有益效果：

本發明根據低分子量PEG修飾劑的結構特性，采用氣相色譜進行定量檢測分析，所建方法快速，簡便，準確，有望應用低分子量的PEG修飾劑或藥物的含量測分析檢測。

附圖說明

圖1為一種實施例1中二乙二醇丙酸甲酯的標準曲線。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步詳細說明。

實施例1

二乙二醇丙酸甲酯的測定

(1)標準品儲備液:精確稱取二乙二醇丙酸甲酯標準品100mg，加水溶解并定容到1000mL，得100ug/mL相應標準儲備液，保存于4℃的冰箱中。

(2)標準使用液：分別吸取1、2、3、4、5mL一定體積標準儲備液于100mL容量瓶中，加水定容得相應濃度為1、2、3、4、5ug/mL標準液(現配現用)。

待測樣品處理：精確量取1ml待測液加適量純水稀釋到濃度為1-5ug/mL適當濃度。

采用毛細管柱，載氣為高純氮，柱流量為1ml/min，汽化室溫度為250℃，采用FID檢測器，溫度250℃，柱溫為150℃，峰面積與濃度線性關系良好(R2>0.99，加樣回收率98.3—100.5％。

標準溶液采用1、2、3、4、5ug/mL濃度，得出標準曲線線性相關系數R2＝0.992，加樣回收率98.3—100.5％其最低檢測限為0.59ug/mL(S/N＝3)，檢測精密度為0.65％。

將待檢測液加適量純水稀釋到適當濃度，采用毛細管柱，載氣為高純氮，柱流量為1mL/min，汽化室溫度為250℃，采用FID檢測器，溫度250℃，柱溫為150℃條件下測定峰面積，根據標準曲線，得到待檢測液中低分子量PEG修飾劑的含量。

上述實施例中采用的待測物為二乙二醇丙酸甲酯，經試驗表明，分子量為2000以內的PEG修飾劑采用上述方法均可以得到較好的結果。

雖然說明書中對本發明的實施方式進行了說明，但這些實施方式只是作為提示，不應限定本發明的保護范圍。在不脫離本發明宗旨的范圍內進行各種省略、置換和變更均應包含在本發明的保護范圍內。