一種牛傳染性鼻氣管炎的膠體金免疫層析試紙條的制作方法

本實用新型涉及一種牛傳染性鼻氣管炎的膠體金免疫層析試紙條。

背景技術：

牛傳染性鼻氣管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)也稱牛皰疹病毒Ⅰ型(Bovine herpesvirusⅠ，BHV-Ⅰ)引起牛的一種急性、熱性、接觸性傳染病，臨床癥狀有上呼吸道及氣管粘膜發炎、呼吸困難、流鼻汁等，并伴有結膜炎、流產、乳腺炎，有時誘發小牛腦炎等。更嚴重的危害是導致持續性感染，給診斷、預防及治療該病造成極大的困難。牛傳染性鼻氣管炎病毒粒子最外層的囊膜由11種糖蛋白組成，其中gB、gC和gD糖蛋白具有高免疫原性，能夠刺激機體產生抗體并在補體存在下致使感染細胞裂解。

目前，IBR的鑒別診斷方法主要包括傳統的病毒分離、血清學實驗、聚合酶鏈式反應(PCR)技術等，其中血清學實驗又包括血清中和實驗、瓊脂擴散實驗、間接血凝實驗和ELISA診斷方法。這些檢測方法對操作步驟、操作環境、儀器設備的要求都很高，很難應用于臨床診斷。

技術實現要素：

為了解決上述技術問題，本實用新型的目的是提供一種牛傳染性鼻氣管炎的膠體金免疫層析試紙條，其具有快速、簡便、準確、高度特異性和敏感性，且結果直觀可靠等優點，適用于牛傳染性鼻氣管炎的臨床檢測。

為解決上述技術問題，本實用新型采用如下技術方案：

本實用新型一種牛傳染性鼻氣管炎的膠體金免疫層析試紙條，包括PVC膠板，所述PVC膠板中間設置有硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜兩側的PVC膠板上分別設置有血清樣品墊和吸水紙，所述血清樣品墊與所述硝酸纖維素膜之間設置有金標墊，所述金標墊上涂覆有經復溶緩沖液稀釋的金標-SPA，所述金標墊的一端位于所述血清樣品墊下端，另一端位于所述硝酸纖維素膜上端；所述硝酸纖維素膜上靠近金標墊一端上設置有用牛傳染性鼻氣管炎病毒融合蛋白gBF劃線作為捕獲抗原的檢測線，所述硝酸纖維素膜上背離金標墊一端上設置有用提純的兔IgG劃線作為捕獲抗體的質控線；

所述PVC膠板下表面上設置有雙面膠，所述PVC膠板周側表面為磨砂面；

所述吸水紙靠近所述硝酸纖維素膜一端位于所述硝酸纖維素膜的端側上面。

與現有技術相比，本實用新型的有益技術效果：能夠快速有效的檢測牛傳染性鼻氣管炎抗體；雙面膠方便用于需要時粘接固定試紙條；PVC膠板周側表面的磨砂面能夠增加手持的摩擦力。

附圖說明

下面結合附圖說明對本實用新型作進一步說明。

圖1為本實用新型牛傳染性鼻氣管炎的膠體金免疫層析試紙條的示意圖；

附圖標記說明：1-PVC膠板；2-血清樣品墊；3-金標墊；4-硝酸纖維素膜；5-樣品層析方向；6-檢測線；7-質控線；8-吸水紙。

具體實施方式

如圖1所示，一種牛傳染性鼻氣管炎的膠體金免疫層析試紙條，包括PVC膠板1，所述PVC膠板1中間設置有硝酸纖維素膜4，所述硝酸纖維素膜4兩側的PVC膠板1上分別設置有血清樣品墊2和吸水紙8，所述血清樣品墊2與所述硝酸纖維素膜4之間設置有金標墊3，所述金標墊3上涂覆有經復溶緩沖液稀釋的金標-SPA，所述金標墊3的一端位于所述血清樣品墊2下端，另一端位于所述硝酸纖維素膜4上端，吸水紙8靠近所述硝酸纖維素膜4一端位于所述硝酸纖維素膜4的端側上面；所述硝酸纖維素膜4上靠近金標墊3一端上設置有用牛傳染性鼻氣管炎病毒融合蛋白gBF劃線作為捕獲抗原的檢測線6，所述硝酸纖維素膜4上背離金標墊3一端上設置有用兔IgG劃線作為捕獲抗體的質控線7；所述PVC膠板1下表面上設置有雙面膠，方便需要時粘接規定試紙條；所述PVC膠板1周側表面為磨砂面，增加手持摩擦力。

牛傳染性鼻氣管炎病毒融合蛋白gBF是利用DNAstar對牛傳染性鼻氣管炎病毒的主要抗原糖蛋白gB進行預測分析，選出3段抗原指數高的抗原表位基因，根據3段氨基酸序列起始位置找出3段對應基因序列，并分別命名為gBa、gBb和gBc，3段基因之間用Linker序列連接，并選定EcoR I和Xho I為酶切位點，將融合好的基因序列送與合成得到重組克隆載體PUCK-(gBa-linker-gBb-linker-gBc)，重組克隆載體存在于大腸桿菌DH-5α中，通過搖菌的方式克隆以及擴增目的基因，通過質粒提取、雙酶切以及膠回收得到帶有粘性末端的目的基因gBabc。目的基因gBabc與線性化原核表達載體pET-28(+)連接成功構建了重組表達質粒pET28a-gBabc，轉化入表達宿主菌BL21(DE3)plyss中，經誘導表達純化及復性得到具有免疫學活性的融合蛋白，并命名為gBF，作為檢測抗原用于牛傳染性鼻氣管炎抗體的檢測。

用檢測試紙條檢測牛傳染性鼻氣管炎標準陽性血清，在檢測線6處出現紅色反應帶，檢測陰性血清時試紙條檢測線6處未出現反應條帶，上述兩種檢測在質控線7處均出現紅色反應條帶，表明用試紙條檢測牛傳染性鼻氣管炎標準陽性血清時呈陽性反應，檢測陰性血清時呈陰性反應；試紙條檢測牛傳染性鼻氣管炎陰性血清、牛副結核病、牛布氏桿菌病、牛病毒性腹瀉和牛口蹄疫的陽性血清，結果都為陰性反應。

以上所述的實施例僅是對本實用新型的優選方式進行描述，并非對本實用新型的范圍進行限定，在不脫離本實用新型設計精神的前提下，本領域普通技術人員對本實用新型的技術方案做出的各種變形和改進，均應落入本實用新型權利要求書確定的保護范圍內。