本實用新型涉及一種定量鈣衛蛋白檢測免疫層析的試紙條，尤其涉及一種熒光定量光譜檢測的定量鈣衛蛋白檢測免疫層析的試紙條。
背景技術：
鈣衛蛋白又叫MRP8/14，L1，(p8,14)，p34。構成鈣衛蛋白異聚體的兩種蛋白名稱：
S100A8，鈣粒蛋白A，MRP8(移動抑制因子相關蛋白8型)，CP-10(小鼠)；
S100A9，鈣粒蛋白B，MRP14(移動抑制因子相關蛋白14型)。
鈣衛蛋白是一種鈣結合蛋白，主要由嗜中性粒細胞和單核細胞分泌。糞便中的鈣衛蛋白是腫瘤性和炎癥性腸胃疾病的標志物。
由于很難區分腸易激綜合征和慢性腸炎疾病，因此要經常對病人進行結腸窺鏡檢查。而鈣衛蛋白檢測能夠很好區分這兩種疾病。糞便中鈣衛蛋白水平與克羅恩病和潰瘍性結腸炎的組織學、內窺鏡檢查具有顯著一致性，也和腸炎疾病的檢測金標準——糞便中銦-111標記的嗜中性粒細胞分泌物具有極高相關性。由于檢測銦-111標記的嗜中性粒細胞的成本較高(住院治療、同位素分析和處理)且病人暴露于放射性環境下，不建議對兒童和孕婦采用該方法。
鈣衛蛋白水平提高預示著相應疾病的復發，是一個比CRP,ESR,HB更好的標志物。將上述標志物與結腸直腸癌的標準便潛血檢測比較后發現，糞便中鈣衛蛋白檢測在診斷上更具優勢：如果糞便中鈣衛蛋白水平很低，極大程度上說明未患有器官性腸道疾病。
檢測糞便中鈣衛蛋白水平有助于：
急性炎癥的標志物
評估腸胃炎癥程度
監測克羅恩病、潰瘍性結腸炎或息肉摘除后病人狀況
進行糞便檢查時區分腸炎疾病(克羅恩病、潰瘍性結腸炎)和腸易激綜合征
目前鈣衛蛋白檢測方法有：
1.金標法：該法具有快速簡便,易觀察的特點。但是靈敏度不高。
2.酶聯免疫吸附法：該測定方法靈敏度較高，適合專業人員批量檢測，但比較復雜，需要專業人員操作，時間較長。
3.熒光酶聯免疫分析法該測定方法靈敏度較高，適合專業人員批量檢測，但比較復雜，需要專業人員操作，時間較長。
目前的測定方法為鈣衛蛋白免疫層析試紙條(膠體金法)，采用膠體金作為標記抗體的載體，來檢測人糞便中的鈣衛蛋白，該方法采用的是定性的方法，只能給出陰性和陽性判斷，無法給出明確的定量結果，而且采用膠體金，靈敏度低。或者采用糞便鈣衛蛋白檢測試劑盒(酶聯免疫法)，采用酶標記抗體的載體，來檢測人糞便中的鈣衛蛋白，但是該方法操作比較復雜，需要專業人員操作，時間較長。或者采用糞便鈣衛蛋白檢測試劑盒(熒光酶聯免疫法)，采用酶標記抗體的載體，來檢測人糞便中的鈣衛蛋白，但是，該方法也是操作比較復雜，需要專業人員操作，時間較長。目前市面上還沒有鈣衛蛋白定量免疫熒光層析快速檢測試紙條的產品。
技術實現要素：
本實用新型的目的是克服上述現有技術的不足，提供一種定量鈣衛蛋白檢測免疫層析試紙條，本試紙條能實現對糞便樣品的定量檢測，檢測時間短，靈敏度高，精密度高。
本實用新型是通過以下技術方案來實現的：一種定量鈣衛蛋白檢測免疫層析試紙條，其包括底襯、包被好的硝酸纖維膜、樣品墊、吸水紙、標記墊，底襯設于試紙條整體底端，所述樣品墊、標記墊、硝酸纖維膜、吸水紙依次搭接并附著在底襯上；所述硝酸纖維膜上設有檢測區和質控區，檢測區靠近標記墊端，質控區靠近吸水紙端；所述標記墊內包被有熒光標記。
所述檢測區和質控區相互平行，檢測區包被有抗鈣衛蛋白單克隆抗體，質控區包被有羊抗兔IgG抗體。
所述熒光標記為鈣衛蛋白單克隆抗體、兔IgG抗體和熒光乳膠混合的熒光標記復合物。
本實用新型的優點是：1.檢測時間短，只需15min。2.靈敏度高:采用熒光膠乳標記抗體，可使鈣衛蛋白的靈敏度達到50ug/g。3.精密度高:優化了整個試紙條的結構，使用樣品墊拼接標記墊的方法，改善了均一性。
附圖說明
圖1為本實用新型實施例試紙條的結構示意圖。
圖中附圖標記含義：1、底襯；2、硝酸纖維膜；3、樣品墊；4、吸水紙；5、標記墊；6、質控區；7、檢測區。
具體實施方式
下面結合附圖和具體實施方式對本實用新型的內容做進一步詳細說明。
實施例
參閱圖1，一種定量鈣衛蛋白檢測免疫層析試紙條，其包括底襯1、包被好的硝酸纖維膜2、樣品墊3、吸水紙4、標記墊5，底襯1設于試紙條整體底端，樣品墊3、標記墊5、硝酸纖維膜2、吸水紙4依次搭接并附著在底襯1上；硝酸纖維膜2上設有檢測區7和質控區6，檢測區7靠近標記墊5端，質控區6靠近吸水紙4端；標記墊5內包被有熒光標記。
檢測區7和質控區6相互平行，檢測區7包被有抗鈣衛蛋白單克隆抗體，質控區6包被有羊抗兔IgG抗體。
熒光標記為鈣衛蛋白單克隆抗體、兔IgG抗體和熒光乳膠混合的熒光標記復合物。
定量鈣衛蛋白檢測免疫層析試紙條的制備：
A、膜的選擇：選擇爬速在95s～140s/cm的的硝酸纖維素膜；
B、包被膜的制備：
首先，制備質控區6和檢測區7：用包被緩沖液稀釋能與待檢人糞便鈣衛蛋白特異結合的抗鈣衛蛋白單克隆抗體，并將稀釋后的抗鈣衛蛋白單克隆抗體劃線于硝酸纖維素膜從而形成檢測區7；用包被緩沖液稀釋能與待檢人糞便鈣衛蛋白特異結合的羊抗兔IgG抗體，并將稀釋后的羊抗兔IgG抗體劃線于硝酸纖維素膜從而形成質控區6；檢測區7與質控區6平行；
然后，將包被好的硝酸纖維素膜置于濕度小于30％的40～50℃的烘箱，干燥24～36h后，于2℃～30℃密封干燥平衡3天以上形成包被膜，封袋備用；
C、標記墊5的制備：
首先，噴涂熒光標記的復合物：用標記緩沖液稀釋鈣衛蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復合物以及兔IgG抗體和熒光膠乳的復合物等兩種復合物，并將稀釋后的兩種復合物按照稀釋后的鈣衛蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復合物：稀釋后的兔IgG抗體和熒光膠乳的復合物為1:3的體積比例混合形成混合液，再使用噴金設備，按照0.06MPA、3.0ul/mm這些參數將混合液噴到玻璃纖維上；
然后，將噴涂好的玻璃纖維置于濕度小于30％的40～50℃的烘箱，干燥24～36h后，于2℃～30℃密封干燥平衡3天以上形成標記墊5，封袋備用；
D、樣品墊3的制備：
首先，噴涂樣品墊3處理液：使用噴金設備，按照0.06MPA、3.5ul/mm這些參數，將樣品墊3處理液噴到玻璃纖維上。
然后，將噴涂好的樣品墊3置于濕度小于30％的40～50℃的烘箱，干燥24～36h后，于2℃～30℃密封干燥平衡3天以上形成樣品墊3，封袋備用；
E、試紙條的組裝：在試紙條底襯1上依次搭接樣品墊3、標記墊5、包被好的硝酸纖維素膜和吸水紙4。
進一步，步驟B中，包被緩沖液含有5％蔗糖和0.05M、pH7.4的PBS，包被緩沖液用0.22μm濾膜過濾，置于4℃備用，有效期30天。
進一步，步驟C中，標記墊5緩沖液含有5％蔗糖、1％BSA、0.5％Tween-20和0.05M、pH8.0的PBS，標記墊5緩沖液用0.22μm濾膜過濾，置于4℃備用，有效期30天。
進一步，步驟D中，樣品墊3處理液含有1％BSA、0.5％Tween-20、0.05M、pH8.5的Tris、1％PVP和1％NaCl，樣品墊3處理液置于4℃備用，有效期30天。
進一步，步驟B中，檢測區7上用包被緩沖液稀釋的能與待檢人糞便鈣衛蛋白特異結合的抗鈣衛蛋白單克隆抗體的濃度為0.75-1mg/mL，劃線于硝酸纖維膜2上的用量為0.12μL/mm；質控區6上用標記緩沖液稀釋的能與待檢人糞便鈣衛蛋白特異結合的羊抗兔IgG抗體的濃度為0.75-1mg/mL，劃線于硝酸纖維膜2上的用量為0.12μL/mm。
進一步，步驟C中，鈣衛蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復合物以及兔IgG抗體和熒光膠乳的復合物等兩種復合物為熒光標記的復合物，所述的熒光乳膠為共價活化的熒光膠乳，共價活化的方法為：超聲波處理熒光膠乳微球體30秒后，調節熒光膠乳微球體濃度為1.0×1012～1.0×1013個/mL，10000～15000xg離心10分鐘，離心后收集沉淀物用蒸餾水或者100mM pH6.0磷酸鈉溶液溶解，并利用200W的超聲波處理30秒；先加入50μL的100mg/ml的EDC，震蕩混勻，再加入50μLl的50mg/mL的N-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sμlfo-NHS)，震蕩混勻；室溫孵育30分鐘后10000～15000xg、離心5～15分鐘，沉淀用100mM、pH5.0～6.0的檸檬酸緩沖液溶解，放置在2～8℃條件下備用。
進一步，熒光標記的復合物的制備方法為：將活化后的熒光膠乳用200W的超聲波處理30秒后，按照50μg標記抗體/100μl熒光膠乳的比例加入標記抗體，所述的標記抗體為鈣衛蛋白單克隆抗體或羊抗兔IgG抗體，混勻后室溫攪拌反應2小時，離心洗滌3次，每次10000～15000xg、離心10分鐘，沉淀用PBS-TBN溶解并用100W的超聲波處理30秒，用PBS-TBN恢復離心前體積，形成鈣衛蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復合物或兔IgG抗體和熒光膠乳的復合物，4℃保存備用。熒光乳膠標記的鈣衛蛋白單克隆抗體的濃度為0.5～1mg/mL，在稀釋時按10％～20％的稀釋比進行稀釋；步驟C中，熒光乳膠標記的羊抗兔IgG抗體的濃度為1～2mg/mL，在稀釋時按5％～10％的稀釋比進行稀釋。
本實用新型的有益效果：
1.定量檢測：定量檢測糞便中的鈣衛蛋白，檢測范圍是50～2100ug/g。
2.檢測時間：檢測時間短，只需15min。
3.靈敏度:采用熒光膠乳標記抗體，可使鈣衛蛋白的靈敏度達到50ug/g。4.精密度:優化了整個試紙條的結構，使用樣品墊3拼接標記墊5的方法，改善了均一性。
上列詳細說明是針對本實用新型可行實施例的具體說明，該實施例并非用以限制本實用新型的專利范圍，凡未脫離本實用新型所為的等效實施或變更，均應包含于本案的專利范圍中。