一種熒光免疫層析儀器質控檢測卡、檢測套裝、其制備方法及檢測方法與流程

本發明涉及免疫層析檢測領域，具體涉及一種熒光免疫層析儀器質控檢測卡、檢測套裝、其制備方法及檢測方法。

背景技術：

生物及醫學檢測中，經常用到免疫層析技術。免疫層析技術是指一種獨特的免疫分析方式。其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區帶，當該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品(尿液或血清)后，通過毛細管作用使樣品溶液沿著該膜在層析條上向前移動，當移動至固定有待測物的受體(如抗體或抗原)的區域時，樣品中相應的待測物即與該受體發生特異性結合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區域顯示一定的顏色，從而實現特異性的免疫診斷。

相比于其他的免疫分析方法，免疫層析法不需要昂貴的設備、專業的操作人員和復雜的操作步驟就可以快速的得到檢測結果。目前我國生活節奏越來越快，各種傳染病的發病率不斷上升，給人民的生活安全帶來極大的安全隱患。而基于免疫層析技術的產品因操作便捷、快速且只需要肉眼就可以得到最終的結果，可以作為一種疾病的檢測以及預防儀器。開發該類產品有利于我國緩解常見傳染性疾病發病率日益上升的情況。

然而由于儀器本身的因素以及外界環境的干擾，測量的結果有一定的概率會產生誤診的情況。為了排除這一情況，除了提升儀器的制作工藝以及采集到的數據的處理水平，還可以在使用儀器之前，對儀器進行質檢。

技術實現要素：

本發明的目的是解決上述現有技術的不足，提供一種熒光免疫層析儀器質控檢測卡、檢測套裝、其制備方法及檢測方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種熒光免疫層析儀器質控檢測卡，在pvc底板上，開設有檢測窗口，檢測窗口內固定有硝酸纖維素薄膜，硝酸纖維素薄膜上設有一條qc線和一條qt線，所述qc線和qt線均劃有熒光微球溶液。

一種熒光免疫層析儀器質控檢測套裝，所述質控檢測套裝包括至少2張質控檢測卡，每張質控檢測卡上qt線的熒光微球溶液濃度均不同，且介于儀器最小靈敏度所對應的濃度和儀器測量動態范圍最大值所對應的濃度之間，每張質控檢測卡上qc線的熒光微球溶液濃度均相同，且同樣介于儀器最小靈敏度所對應的濃度和儀器測量動態范圍最大值所對應的濃度之間。

優選地，所述質控檢測套裝中含有1張qt線的熒光微球溶液濃度為儀器最小靈敏度所對應濃度的質控檢測卡和1張qt線的熒光微球溶液濃度為儀器測量動態范圍最大值所對應濃度的質控檢測卡，2張質控檢測卡上qc線的熒光微球溶液濃度相同且介于儀器最小靈敏度所對應的濃度和儀器測量動態范圍最大值所對應的濃度之間。

優選地，所述熒光微球為表面不帶修飾基團或表面羧基功能化的熒光微球中的一種。

制備所述的一種熒光免疫層析儀器質控檢測卡的方法，包括以下步驟：

(1)用pbs緩沖液將熒光微球原液稀釋成濃度介于儀器最小靈敏度所對應的濃度和儀器測量動態范圍最大值所對應的濃度之間的若干份稀釋液待用；

(2)在貼好硝酸纖維素薄膜的pvc底板上的相應位置劃上步驟(1)制備的熒光微球稀釋液；

(3)將劃好線的pvc底板放置在30～45攝氏度干燥箱中，干燥0.5～2小時；

(4)取干燥過后的pvc底板，將底板切成寬度為3mm到8mm的試紙條；

(5)將切好的試紙條置于試劑條卡盒的卡槽內部，壓殼后即得熒光免疫層析儀器質控檢測卡。

優選地，步驟(5)所述的試劑條卡盒的材質為pvc。

利用所述的一種熒光免疫層析儀器質控檢測套裝的檢測方法，包括以下步驟：

(1)繪制標準曲線；

(2)將質控檢測卡依次放入檢測窗口；

(3)依次計算每張質控檢測卡的qt/qc面積比值，并與標準曲線進行對比；

(4)設定誤差限n，若測量值與標準值的誤差結果大于誤差限n，則儀器的測量結果可靠性低，已不能正常使用；其中，0＜n＜1。

優選地，所述的qt與qc的面積為其峰值點左右高于測量基線的范圍面積。

本發明的有益效果在于：

1、本發明應用于熒光免疫層析儀器質控檢測，操作簡單、便捷，可應用于現場檢測；

2、本發明易于保存，方便攜帶，可熱插拔，隨時檢測儀器的可靠性；

3、本發明選用熒光微球為標記物，熒光穩定；

4、在對樣本進行檢測之前首先進行儀器質檢，可以提升樣本測量結果的可靠性。

附圖說明

圖1是熒光免疫層析儀器質控檢測卡的結構示意圖；

圖2是熒光免疫層析儀器質控檢測卡的制作流程圖。

附圖標記：

1，pvc底板；2，硝酸纖維素薄膜；3，檢測窗口；4，qc線；5，qt線。

具體實施方式

為更好理解本發明，下面結合實施例及附圖對本發明作進一步描述，以下實施例僅是對本發明進行說明而非對其加以限定。

如圖1所示，一種熒光免疫層析儀器質控檢測卡，在pvc底板1上，開設有檢測窗口3，檢測窗口3內固定有硝酸纖維素薄膜2，硝酸纖維素薄膜2上設有一條qc線4和一條qt線5，所述qc線4和qt線5均劃有熒光微球溶液。

如圖2所示，熒光免疫層析儀器質控檢測卡的制備方法如下：

1.溶液配置

a.用移液器量取10μl濃度為10mg/ml的bangs微球原液至離心管中。

b.加pbs稀釋液990μl至10μl微球溶液中，將混合液置于溶液快速混勻機旋渦內，打開開關，進行快速渦旋混勻2min。混勻后溶液待用；(形成100μg/ml的微球溶液)

c.取(b)中生成的100μg/ml的微球溶液500μl，加入pbs稀釋液500μl，將混合液置于溶液快速混勻機旋渦內，打開開關，進行快速渦旋混勻2min。混勻后溶液待用；(形成50μg/ml的微球溶液)

d.取(c)中生成的50μg/ml的微球溶液500μl，加入pbs稀釋液500μl，將混合液置于溶液快速混勻機旋渦內，打開開關，進行快速渦旋混勻2min。混勻后溶液待用；(形成25μg/ml的微球溶液)

e.取(d)中生成的25μg/ml的微球溶液500μl，加入pbs稀釋液500μl，將混合液置于溶液快速混勻機旋渦內，打開開關，進行快速渦旋混勻2min。混勻后溶液待用；(形成12.5μg/ml的微球溶液)

f.取(e)中生成的12.5μg/ml的微球溶液500μl，加入pbs稀釋液500μl，將混合液置于溶液快速混勻機旋渦內，打開開關，進行快速渦旋混勻2min。混勻后溶液待用；(形成6.25μg/ml的微球溶液)

g.取(f)中生成的6.25μg/ml的微球溶液500μl，加入pbs稀釋液500μl，將混合液置于溶液快速混勻機旋渦內，打開開關，進行快速渦旋混勻2min。混勻后溶液待用；(形成3.125μg/ml的微球溶液)

h.取(1)中生成的100μg/ml的微球溶液10μl，加入pbs稀釋液990μl，將混合液置于溶液快速混勻機旋渦內，打開開關，進行快速渦旋混勻2min。混勻后溶液待用；(形成1μg/ml的微球溶液)

2.劃線

a.取硝酸纖維素薄膜，粘貼在pvc背板上，放置在噴膜劃線儀的相應位置，待用；

b.用純水清洗噴膜劃線儀器的兩根管路3次；

c.調整管路位置，使兩根管路間隔6mm；

d.劃線參數設置為：劃線速度50mm/s，劃線量1μl/cm；

e.用噴涂劃線儀將配制好的微球溶液添加到兩根管路中；

f.遠端管路添加溶液濃度為25μg/ml的微球溶液線液(qc線)，近端劃濃度為100μg/ml微球溶液(qt線)。點擊開始按鈕，儀器開始在硝酸纖維素膜上劃線，劃線完畢，純水清洗管路3次，等待下一個濃度噴膜劃線；

g.遠端管路添加溶液濃度為25μg/ml的微球溶液線液(qc線)，近端劃濃度為50μg/ml微球溶液(qt線)；點擊開始按鈕，儀器開始在硝酸纖維素膜上劃線，劃線完畢，純水清洗管路3次，等待下一個濃度噴膜劃線；

h.遠端管路添加溶液濃度為25μg/ml的微球溶液線液(qc線)，近端劃濃度為25μg/ml微球溶液(qt線)。點擊開始按鈕，儀器開始在硝酸纖維素膜上劃線，劃線完畢，純水清洗管路3次，等待下一個濃度噴膜劃線；

i.遠端管路添加溶液濃度為25μg/ml的微球溶液線液(qc線)，近端劃濃度為12.5μg/ml微球溶液(qt線)。點擊開始按鈕，儀器開始在硝酸纖維素膜上劃線，劃線完畢，純水清洗管路3次，等待下一個濃度噴膜劃線；

j.遠端管路添加溶液濃度為25μg/ml的微球溶液線液(qc線)，近端劃濃度為6.25μg/ml微球溶液(qt線)。點擊開始按鈕，儀器開始在硝酸纖維素膜上劃線，劃線完畢，純水清洗管路3次，等待下一個濃度噴膜劃線；

k.遠端管路添加溶液濃度為25μg/ml的微球溶液線液(qc線)，近端劃濃度為3.125μg/ml微球溶液(qt線)。點擊開始按鈕，儀器開始在硝酸纖維素膜上劃線，劃線完畢，純水清洗管路3次，等待下一個濃度噴膜劃線；

l.遠端管路添加溶液濃度為25μg/ml的微球溶液線液(qc線)，近端劃濃度為1μg/ml微球溶液(qt線)。點擊開始按鈕，儀器開始在硝酸纖維素膜上劃線，劃線完畢，純水清洗管路3次，關閉儀器。

3.劃線膜干燥

將劃線完成的硝酸纖維素膜置烘房內干燥1小時，干燥溫度37℃。每間隔15min記錄一次烘房內溫度。

4.切條

取干燥過后的劃線pvc底板，放入斬切機中，設置切條寬度為4mm，點擊開始進行切條。

5.保存

將切好的試紙條按濃度分別收集于鋁箔袋中，放入干燥劑后封口保存。需使用時選取所需濃度試紙條置于試劑條卡盒卡槽內部，壓殼后即可用于儀器檢測。壓殼后的檢測卡需置于干燥箱中保存，其濕度應控制在30％以下。

6.檢測

將上述檢測卡依次放入檢測窗口，依次計算每條質控條的qt/qc面積比值，并與標準曲線進行對比；結果如下表所示：

通過對比兩組數據，可以得到兩組數據的誤差分別為：4.5％，3.44％，1.2％，1.36％，1.19％，5.06％，0.0363％。

誤差均在6％以下，證明了此時如用儀器進行測量，則測量結果是可靠的。

以上所述實施方式僅僅是對本發明的優選實施方式進行描述，并非對本發明的范圍進行限定，在不脫離本發明設計精神的前提下，本領域普通技術人員對本發明的技術方案作出的各種變形和改進，均應落入本發明的權利要求書確定的保護范圍內。