一種薁磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)的RT?HPLC檢測(cè)方法與流程

本發(fā)明涉及藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種薁磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)的反向高效液相色譜檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

在藥物分析中所稱的“有關(guān)物質(zhì)(related substances)”是指在原料藥生產(chǎn)過(guò)程中帶入的起始原料、試劑、中間體、副產(chǎn)物和異構(gòu)體等物質(zhì)，也可能是制劑在生產(chǎn)、貯藏和運(yùn)輸過(guò)程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物、聚合物或晶型轉(zhuǎn)變等特殊雜質(zhì)。有關(guān)物質(zhì)的種類與藥物的合成路線和制劑工藝密切相關(guān)，藥物在合成和制劑過(guò)程中的任何一個(gè)因素的改變都可能導(dǎo)致其有關(guān)物質(zhì)的種類不同，因而有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)和控制過(guò)程相對(duì)復(fù)雜。有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)是控制藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)。

薁磺酸鈉(Sodium Azulene Sulfonate)，又名呱侖酸鈉，系自菊科植物花中提取的一種化學(xué)物質(zhì)，近年研究發(fā)現(xiàn)其具有下述作用：抑制多種致炎物質(zhì)引起的炎癥，且作用較為持久；通過(guò)局部直接作用抑制炎性細(xì)胞釋放組胺；增加粘膜內(nèi)前列腺素E2的合成，促進(jìn)肉芽形成和上皮細(xì)胞新生；降低胃蛋白酶的活性。

薁磺酸鈉，化學(xué)名為1,4-二甲基-7-異丙基薁-3-磺酸鈉，其結(jié)構(gòu)式如下：

薁磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)如下：愈創(chuàng)薁、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C，其中愈創(chuàng)薁，為薁磺酸鈉合成工藝的起始物料；雜質(zhì)A是薁磺酸鈉同分異構(gòu)體；雜質(zhì)B、雜質(zhì)C是氧化降解雜質(zhì)，上述雜質(zhì)結(jié)構(gòu)見(jiàn)表1。

表1薁磺酸鈉各雜質(zhì)名稱及結(jié)構(gòu)

國(guó)內(nèi)外已公開(kāi)的關(guān)于薁磺酸鈉的藥品標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)有關(guān)物質(zhì)的總含量進(jìn)行了限定，而并未限定任何單一雜質(zhì)的含量。日本藥局方外醫(yī)藥品成分規(guī)格(1989)對(duì)原料藥有收載，對(duì)樣品中的有關(guān)物質(zhì)愈創(chuàng)薁采用加正己烷過(guò)濾，濾液用光度法測(cè)定透過(guò)率的方法測(cè)定，靈敏度低。薁磺酸鈉作為原料藥應(yīng)用于不同制劑時(shí)，需要檢測(cè)其相關(guān)雜質(zhì)的含量，判斷磺酸鈉原料藥是否合格，是否需要采取相關(guān)手段進(jìn)行控制。現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的方法無(wú)法分離上述雜質(zhì)，更無(wú)法確定其的具體含量。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種薁磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)的RT-HPLC檢測(cè)方法，通過(guò)用苯基硅烷反相色譜柱，調(diào)整適當(dāng)?shù)南疵撎荻?，解決了薁磺酸鈉特征峰與其異構(gòu)體、氧化雜質(zhì)特征峰分離的問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)了對(duì)薁磺酸鈉原料藥質(zhì)量的控制，且此方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單。

本發(fā)明的薁磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)RT-HPLC的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

a)配置分析溶液

b)色譜條件

色譜柱為反相色譜柱，以酸或磷酸鹽水相溶液與有機(jī)相的混合液為流動(dòng)相，所述水相溶液為弱酸性，所述的有機(jī)相選自甲醇；采用梯度洗脫方法，所述梯度洗脫方法流動(dòng)相中水相體積比例按0、8～12、39～44、48～53、55～58min時(shí)間點(diǎn)，水相體積比為95-98％、85-90％、85-90％、30-40％、25-30％進(jìn)行梯度洗脫；

c)上機(jī)測(cè)定

取步驟a)制成的分析溶液5-30μl注入高效液相色譜儀，進(jìn)行色譜分析，并記錄色譜圖。

優(yōu)選方案，所述步驟a)樣品分析溶液配制遵循以下要求：用甲醇-磷酸鹽水溶液溶解樣品，制成分析溶液，所述的甲醇-磷酸鹽水溶液中有機(jī)相體積百分比大于50％。所述步驟b)色譜條件中，設(shè)定高效液相流速為0.8-1.2ml/min；柱溫為25-50℃，采用檢測(cè)波長(zhǎng)為220-300nm紫外檢測(cè)器；

在一些實(shí)施例中，所述反相色譜柱的填充劑為苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱或十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱或八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，優(yōu)選為苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱。

在一些實(shí)施例中，所述反相色譜柱的規(guī)格為：柱長(zhǎng)介于100mm至300mm，色譜柱內(nèi)徑介于1mm至10mm，粒徑介于1μm至10μm，優(yōu)選為規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm的苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱。

在一些實(shí)施例中，所述磷酸鹽溶液的濃度為0.001-0.05mol/L、pH 2.0-4.0，優(yōu)選磷酸鹽溶液的濃度為0.02mol/L、pH 2.7-3.5。

在一些實(shí)施例中，所述磷酸鹽為磷酸鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀中之一，優(yōu)選磷酸二氫鉀。

在一些實(shí)施例中，所述A相為磷酸鹽溶液-甲醇，所述磷酸鹽溶液-甲醇的體積比為10:90-80:20，優(yōu)選體積比為80:20。

優(yōu)選方案為：步驟a)用甲醇-磷酸鹽水溶液溶解樣品，制成分析溶液，所述的甲醇-磷酸鹽水溶液中有機(jī)相體積百分比大于50％；步驟b)為所述梯度洗脫條件為反相色譜柱為柱長(zhǎng)250mm、直徑4.6mm、填料粒徑5μm的苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動(dòng)相為以0.02mol/L、pH 3.0磷酸二氫鉀溶液-甲醇為A相，流動(dòng)相中A相-甲醇比例按0、10、40、50、58min時(shí)間點(diǎn)，A相體積比為97％、88％、85％、35％、30％進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0ml/min；柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm；步驟c)取步驟a)制成的分析溶液注入高效液相色譜儀，進(jìn)行色譜分析，并記錄色譜。

在一些實(shí)施例中，所述樣品為薁磺酸鈉或其相關(guān)制劑。所述薁磺酸鈉相關(guān)制劑為片劑、顆粒劑。

上述方法分析可用于分離樣品中雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、愈創(chuàng)薁、薁磺酸鈉。

本發(fā)明能夠有效的測(cè)定薁磺酸鈉溶液中各種相關(guān)雜質(zhì)的存在，尤其實(shí)現(xiàn)了譜圖中薁磺酸鈉特征峰與薁磺酸鈉同分異構(gòu)體特征峰及其相關(guān)起始物料、氧化雜質(zhì)特征峰的分離。各個(gè)雜質(zhì)的分離度均大于1.5，其中薁磺酸鈉與其同分異構(gòu)體分離度達(dá)到3.5，拖尾因子2.5以下，理論塔板數(shù)均在8000以上。本技術(shù)發(fā)明一種檢測(cè)薁磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)方法，該檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、快捷、靈敏度高、準(zhǔn)確度高。

上述方法的檢測(cè)可以確保產(chǎn)品的質(zhì)量可控。

附圖說(shuō)明

圖1、實(shí)施例1流動(dòng)相條件的色譜圖；

圖2、實(shí)施例2流動(dòng)相條件的色譜圖；

圖3、實(shí)施例3梯度洗滌的色譜圖。

圖4、實(shí)施例4梯度洗滌的色譜圖。

圖5、實(shí)施例5梯度洗滌的色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合說(shuō)明書附圖和具體的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的試驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。

實(shí)施例一

(1)儀器與色譜條件

高效液相色譜儀：U3000高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；

色譜柱：SUPELCOSILLC-DP(4.6mm×250mm，5μm)的苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱

配置0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)為A相，流動(dòng)相中A相-甲醇的比例按0、5、15、40、45、46、52min時(shí)間點(diǎn)，A相體積比為88％、88％、60％、25％、25％、88％、88％進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0ml/min；柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm；

(2)實(shí)驗(yàn)步驟

分別取薁磺酸鈉對(duì)照品、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C及愈創(chuàng)薁對(duì)照品各適量，用溶劑[0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(30:70)]制成每ml含薁磺酸鈉0.5mg、其他各雜質(zhì)各含5μg的系統(tǒng)適用性溶液，作為分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)附圖1，可以看出該條件下薁磺酸鈉主峰和其同分異構(gòu)體雜質(zhì)A峰未能完全基線分離。

實(shí)施例二

(1)儀器與色譜條件

高效液相色譜儀：U3000高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；

色譜柱：SUPELCOSILLC-DP(4.6mm×250mm，5μm)的苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱

配置0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)為A相，流動(dòng)相中A相-甲醇的比例按0、5、15、45、50、51、55min時(shí)間點(diǎn)，A相體積比為88％、88％、70％、40％、25％、88％、88％進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0ml/min；柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm；

(2)實(shí)驗(yàn)步驟

分別取薁磺酸鈉對(duì)照品、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C及愈創(chuàng)薁對(duì)照品各適量，用溶劑[0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(30:70)]制成每ml含薁磺酸鈉0.5mg、其他各雜質(zhì)各含5μg的系統(tǒng)適用性溶液，作為分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)附圖2，可以看出該條件下薁磺酸鈉主峰和其同分異構(gòu)體雜質(zhì)A峰仍未能完全基線分離。

實(shí)施例三

(1)儀器與色譜條件

高效液相色譜儀：U3000高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；

色譜柱：SUPELCOSILLC-DP(4.6mm×250mm，5μm)的苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱

配置0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇為A相，其中水相與甲醇相體積比為80:20，流動(dòng)相中A相-甲醇的比例按0、10、40、50、58、58.1、63min時(shí)間點(diǎn)，A相體積比為97％、88％、85％、35％、30％、97％、97％進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0ml/min；柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm；

(2)實(shí)驗(yàn)步驟

分別取薁磺酸鈉對(duì)照品、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C及愈創(chuàng)薁對(duì)照品各適量，用溶劑[0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(30:70)]制成每ml含薁磺酸鈉0.5mg、其他各雜質(zhì)各含5μg的系統(tǒng)適用性溶液，作為分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)附圖3及表1所示，可以看出該條件下各峰分離度均能到達(dá)有效分離，其中薁磺酸鈉主峰和其同分異構(gòu)體雜質(zhì)A峰完全分離，分離度為3.05，各峰理論塔板數(shù)均大于8000。

表1實(shí)施例3色譜結(jié)果表

實(shí)施例四

(1)儀器與色譜條件

高效液相色譜儀：U3000高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；

色譜柱：SUPELCOSILLC-DP(4.6mm×250mm，5μm)的苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱

配置0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8)-甲醇為A相，其中水相與甲醇相體積比為80:20，流動(dòng)相中A相-甲醇的比例按0、10、40、50、58、58.1、63min時(shí)間點(diǎn)，A相體積比為97％、88％、85％、35％、30％、97％、97％進(jìn)行梯度洗脫，流速0.8ml/min；柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm；

(2)實(shí)驗(yàn)步驟

分別取薁磺酸鈉對(duì)照品、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C及愈創(chuàng)薁對(duì)照品各適量，用溶劑[0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(30:70)]制成每ml含薁磺酸鈉0.5mg、其他各雜質(zhì)各含5μg的系統(tǒng)適用性溶液，作為分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)附圖4。

實(shí)施例五

(1)儀器與色譜條件

高效液相色譜儀：U3000高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；

色譜柱：SUPELCOSILLC-DP(4.6mm×250mm，5μm)的苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱

配置0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.2)-甲醇為A相，其中水相與甲醇相體積比為80:20，流動(dòng)相中A相-甲醇的比例按0、10、40、50、58、58.1、63min時(shí)間點(diǎn)，A相體積比為97％、88％、85％、35％、30％、97％、97％進(jìn)行梯度洗脫，流速1.2ml/min；柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm；

(2)實(shí)驗(yàn)步驟

分別取薁磺酸鈉對(duì)照品、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C及愈創(chuàng)薁對(duì)照品各適量，用溶劑[0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(30:70)]制成每ml含薁磺酸鈉0.5mg、其他各雜質(zhì)各含5μg的系統(tǒng)適用性溶液，作為分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)附圖5。