一種用液相色譜法分離測定鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)的方法與流程

本發(fā)明屬于分析化學領(lǐng)域，具體涉及液相色譜法分離測定鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
：鹽酸魯拉西酮是一種非典型抗精神病藥物，可以阻斷谷氨酸濃度病理性升高導致的神經(jīng)元損傷，臨床主要用于中重度阿爾茨海默癥的治療。鹽酸魯拉西酮化學名為(3ar,4s,7r,7as)-2-[[(1r,2r)-2-[[4-(1,2-benzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride，分子式為c28h36n4o2s·hcl。分子量為492.26，鹽酸魯拉西酮結(jié)構(gòu)式為：。在合成鹽酸魯拉西酮的過程中，有幾個重要的起始物料以及中間體可能由于去除不完全而影響藥物的純度，這些影響藥物純度的雜質(zhì)稱為工藝雜質(zhì)；而降解雜質(zhì)是在藥物生產(chǎn)或貯藏過程中產(chǎn)生的。上述有關(guān)物質(zhì)皆無治療作用，還可能影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至危害人體健康，對于鹽酸魯拉西酮合成主要控制的有關(guān)物質(zhì)有8個，分別是：有關(guān)物質(zhì)1：(1r,2r)-1,2-bis(methanesulfonyloxymethyl)cyclohexane；有關(guān)物質(zhì)2：3-piperazinobenzisothiazole；有關(guān)物質(zhì)3：4-(1,2-benzothiazol-3-yl)-1-[(3ar,7ar)-octahydro-2h-isoindol-2-yl]piperazin-1-ium-1-sulfonate；有關(guān)物質(zhì)4：(3ar,4s,7r,7as)-2-[[(1r,2r)-2-[[4-(1-dioxidobenzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；有關(guān)物質(zhì)5：(3ar,4r,7s,7as)-2-[[(1r,2r)-2-[[4-(1,2-benzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；有關(guān)物質(zhì)6：(3ar,4s,7r,7as)-2-[[(1r,2s)-2-[[4-(1,2-benzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；有關(guān)物質(zhì)7：(3ar,4r,7s,7as)-2-[[(1r,2s)-2-[[4-(1,2-benzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；有關(guān)物質(zhì)8：(3ar,4s,7r,7as)-2-[[(1r,2r)-2-[[4-(1-oxidobenzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；結(jié)構(gòu)式分別為：、、有關(guān)物質(zhì)1有關(guān)物質(zhì)2、、有關(guān)物質(zhì)3有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5、有關(guān)物質(zhì)6、有關(guān)物質(zhì)7有關(guān)物質(zhì)8。對于合成鹽酸魯拉西酮中引入的工藝雜質(zhì)和貯藏過程中產(chǎn)生的降解雜質(zhì)，在原料藥中是需要進行質(zhì)量控制的。因此，實現(xiàn)鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)的分離，在鹽酸魯拉西酮的質(zhì)量控制方面具有重要的現(xiàn)實意義。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種分析鹽酸魯拉西酮純度以及分離其有關(guān)物質(zhì)的方法，從而實現(xiàn)鹽酸魯拉西酮與其有關(guān)物質(zhì)的分離和測定，保證鹽酸魯拉西酮的質(zhì)量。本發(fā)明所述的用液相色譜法分析鹽酸魯拉西酮純度以及分離其有關(guān)物質(zhì)的方法，是采用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的弱酸水溶液-有機相為流動相。上述所說的色譜柱以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填料，選自phenomenex、inertsil或apollo等品牌。上述所說的有機相選自以下化合物中的一種或幾種：甲醇、乙腈、丙醇、異丙醇、四氫呋喃等，優(yōu)選乙腈。上述所說的方法，其流動相弱酸水溶液-有機相采用濃度梯度洗脫。上述所說的方法中，弱酸水溶液中包含的酸選自磷酸、甲酸、乙酸、高氯酸或三氟乙酸，優(yōu)選三氟乙酸。其中酸水溶液中包含的酸濃度為0.01%～3%，優(yōu)選濃度為0.05%。本發(fā)明所述的分離測定方法，可按照以下方法實現(xiàn)：1)取鹽酸魯拉西酮及各有關(guān)物質(zhì)適量，用乙腈水溶液溶解樣品，配制成每1ml含鹽酸魯拉西酮及其各有關(guān)物質(zhì)0.1～1.5mg的樣品溶液；2)設(shè)置流動相流速為0.5～1.5ml/min，流動相流速優(yōu)選1.0ml/min，檢測波長為200～250nm，檢測波長優(yōu)選230nm，柱溫箱溫度為10～40℃，柱溫箱溫度優(yōu)選30℃；3)取1)的樣品溶液10～50μl，注入液相色譜儀，完成鹽酸魯拉西酮與其有關(guān)物質(zhì)的分離測定。其中：高效液相色譜儀的型號，無特別要求，本發(fā)明采用的色譜儀為島津高效液相色譜儀：lc-20at泵，spd-m20a檢測器，sil-20ac自動進樣器，cbm-20a控制器，cto-10as柱溫箱，lcsolution工作站色譜柱：c8（phenomenex，250×4.6mm，5μm）流動相：a：0.05%三氟乙酸水溶液（1000ml水中加入0.5ml三氟乙酸）；b：乙腈；按以下濃度梯度進行洗脫：流速：1.0ml/min檢測波長：230nm柱溫：30℃進樣體積：10μl本發(fā)明采用c8（phenomenex，250×4.6mm，5μm）色譜柱，能夠有效的分離鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)。本發(fā)明解決了鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)的分離測定問題，從而確保了鹽酸魯拉西酮的質(zhì)量可控。附圖說明圖1為實施例1時的鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)hplc圖；圖2為實施例1時的鹽酸魯拉西酮hplc圖；圖3為實施例2時的鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)hplc圖；圖4為實施例2時的鹽酸魯拉西酮的hplc圖；圖5為實施例3時的溶劑hplc圖；圖6為實施例3時的鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)hplc圖；圖7為實施例3時的鹽酸魯拉西酮的hplc圖。具體實施方式：以下實施例用于進一步理解本發(fā)明，但不限于本實施的范圍。實施例1儀器與條件高效液相色譜儀：島津：lc-20at，cbm-20a，sil-20ac，spd-m20a，cto-10asvp；色譜柱：c8（inertsil，250×4.6mm，5μm）；流動相：a：0.05%三氟乙酸水溶液（1000ml水中加入0.5ml三氟乙酸）；b：乙腈；按以下濃度梯度進行洗脫流速：1.0ml/min檢測波長：230nm柱溫：30℃進樣體積：10μl實驗步驟取鹽酸魯拉西酮適量，用乙腈水溶解樣品，配制成含鹽酸魯拉西酮約1mg/ml的鹽酸魯拉西酮溶液；分別取鹽酸魯拉西酮的各有關(guān)物質(zhì)適量，用乙腈水溶解，分別配制成濃度約為0.5mg/ml的各有關(guān)物質(zhì)溶液；取各有關(guān)物質(zhì)溶液及鹽酸魯拉西酮溶液適量，用乙腈水稀釋，配制成系統(tǒng)適用性溶液；按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖1~2，圖1為系統(tǒng)適用性溶液色譜圖，圖中保留時間49.324min的色譜峰為鹽酸魯拉西酮，其余為各有關(guān)物質(zhì)色譜峰；圖2為鹽酸魯拉西酮色譜圖，圖中保留時間49.553min的色譜峰為鹽酸魯拉西酮。實施例2儀器與條件高效液相色譜儀：島津：lc-20at，cbm-20a，sil-20ac，spd-m20a，cto-10asvp；色譜柱：c8（phenomenex，250×4.6mm，5μm）；流動相：a：0.05%三氟乙酸水溶液（1000ml水中加入0.5ml三氟乙酸）；b：乙腈；按以下濃度梯度進行洗脫流速：1.0ml/min檢測波長：230nm柱溫：30℃進樣體積：10μl實驗步驟取鹽酸魯拉西酮適量，用乙腈水溶解樣品，配制成含鹽酸魯拉西酮約1mg/ml的鹽酸魯拉西酮溶液；分別取鹽酸魯拉西酮的各有關(guān)物質(zhì)適量，用乙腈水溶解，分別配制成濃度約為0.5mg/ml的各有關(guān)物質(zhì)溶液；取各有關(guān)物質(zhì)溶液及鹽酸魯拉西酮溶液適量，用乙腈水稀釋，配制成系統(tǒng)適用性溶液；按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖3~4，圖3為系統(tǒng)適用性溶液色譜圖，圖中保留時間58.674min的色譜峰為鹽酸魯拉西酮，其余為各有關(guān)物質(zhì)色譜峰；圖4為鹽酸魯拉西酮色譜圖，圖中保留時間58.812min的色譜峰為鹽酸魯拉西酮。實施例3儀器與條件高效液相色譜儀：島津：lc-20at，cbm-20a，sil-20ac，spd-m20a，cto-10asvp；色譜柱：c8（phenomenex，250×4.6mm，5μm）；流動相：a：0.05%三氟乙酸水溶液（1000ml水中加入0.5ml三氟乙酸）；b：乙腈；按以下濃度梯度進行洗脫時間（min）流動相a流動相b0901010901060505070307090307090.0190101009010流速：1.0ml/min檢測波長：230nm柱溫：30℃進樣體積：10μl實驗步驟取鹽酸魯拉西酮適量，用乙腈水溶解樣品，配制成含鹽酸魯拉西酮約1mg/ml的鹽酸魯拉西酮溶液；分別取鹽酸魯拉西酮的各有關(guān)物質(zhì)適量，用乙腈水溶解，分別配制成濃度約為0.5mg/ml的各有關(guān)物質(zhì)溶液；取各有關(guān)物質(zhì)溶液及鹽酸魯拉西酮溶液適量，用乙腈水稀釋，配制成系統(tǒng)適用性溶液；另取乙腈水適量作為空白溶劑。按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖5~7，圖5為溶劑色譜圖；圖6為系統(tǒng)適用性溶液色譜圖，圖中保留時間57.796min的色譜峰為鹽酸魯拉西酮，其余為各有關(guān)物質(zhì)色譜峰；圖7為鹽酸魯拉西酮色譜圖，圖中保留時間57.886min的色譜峰為鹽酸魯拉西酮。對上述鹽酸魯拉西酮終產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)分析方法的以下項目進行了驗證：系統(tǒng)適用性試驗根據(jù)上述實施例3確定的色譜條件，分別用鹽酸魯拉西酮終產(chǎn)品和各有關(guān)物質(zhì)的混合物來分析此色譜條件是否符合要求。由圖6可見此條件下各個有關(guān)物質(zhì)與主峰之間分離度符合要求，峰純度和單點閥值均符合要求。耐用性由于本品的色譜條件為梯度洗脫，并規(guī)定了相應(yīng)的色譜柱型號、柱溫、流速、ph值等，故我們將這些條件作相應(yīng)的微調(diào)，考察方法的耐用性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該方法對不同品牌的色譜柱、柱溫變化±5℃、流速變化±0.1ml/min、ph值變化±0.2等條件下耐用性良好。在不同品牌色譜柱、不同柱溫、流速、ph值等條件下，鹽酸魯拉西酮及其有關(guān)物質(zhì)保留時間無顯著變化，且均能達到有效分離。當前第1頁12