一種測(cè)定魚(yú)飼料中姜黃素含量的方法與流程

本發(fā)明屬于分析測(cè)試領(lǐng)域，更具體涉及一種測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素含量的UPLC-TUV方法，它適用于測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含量。

背景技術(shù)：

姜黃素，別名姜黃色素，包括雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素，具有保護(hù)腸粘膜、抗氧化、抗炎、抑菌、降血脂、保肝、利膽等藥理活性，3種成分的生理活性也有所不同，姜黃素的抗氧化活性大于去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素，去甲氧基姜黃素降血脂的活性明顯高于姜黃素，雙去甲氧基姜黃素在利膽及對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用方面，較去甲氧基姜黃素和姜黃素活性強(qiáng)。有研究表明，姜黃素在促進(jìn)魚(yú)類生長(zhǎng)、提高魚(yú)類消化酶活性和抗氧化力、增強(qiáng)免疫功能及改善肌肉品質(zhì)和魚(yú)體色澤方面具有一定作用：在魚(yú)飼料中添加姜黃素可顯著提高羅非魚(yú)、虹鱒和草魚(yú)的抗氧化能力；姜黃素可以促進(jìn)大黃魚(yú)的生長(zhǎng)、增強(qiáng)大黃魚(yú)皮膚與肌肉的著色；飼料中添加姜黃素可以顯著提高草魚(yú)腸道中蛋白酶和淀粉酶的活性，促進(jìn)魚(yú)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收；飼料中添加4％～6％的姜黃素還能夠預(yù)防魚(yú)腸炎病、小瓜蟲(chóng)病、赤皮病等疾病。由此可見(jiàn)姜黃素作為添加劑在魚(yú)飼料中使用具有較好的應(yīng)用前景和實(shí)用性，為有效測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素3種成分各自的含量，建立一種有效的方法測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含量是非常必要的。

目前，國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)有關(guān)魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素含量測(cè)定方法的報(bào)道或申請(qǐng)專利。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是在于提供了一種測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素含量的方法。該測(cè)定方法所用試劑價(jià)格便宜，操作方便快捷，測(cè)定方法的準(zhǔn)確性和靈敏度高，分析時(shí)間短。適于快速準(zhǔn)確測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、甲氧基姜黃素和姜黃素的含量。

為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施：

一種測(cè)定魚(yú)飼料中姜黃素含量的方法，其步驟是：

A、魚(yú)飼料(通威黃顙魚(yú)配合飼料1號(hào))中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素采用試劑A(15-30mL)提取，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(予華YRE2000E)將試劑揮干；

B、再經(jīng)試劑B(1～10mL)復(fù)溶旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后的殘?jiān)?，將?fù)溶溶液轉(zhuǎn)移到一支10mL塑料離心管中置40℃氮吹儀(大森DS-K200型)上氮吹至干，向10mL塑料離心管中加入1mL定容溶液C溶解塑料管中的殘?jiān)?/p>

C、再加入1mL試劑D，渦旋振蕩30s，7000r/min離心5min，將上層液體棄去；

D、用1mL注射器吸取下層液體過(guò)0.22μm聚醚砜水系濾頭，過(guò)濾液(溶解有雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的溶液C，1mL)放置到2mL進(jìn)樣瓶(Waters，12×32mm，帶蓋)中，超高效液相色譜紫外法(UPLC-TUV)測(cè)定。獲得雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的色譜圖，通過(guò)色譜圖積分得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的峰面積。

E、超高效液相色譜紫外法(UPLC-TUV)條件：流動(dòng)相的有機(jī)相為試劑A，水相為溶液E，試劑A與溶液E的兩者的體積比為1:1～2:3，流速為0.3mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為430nm，色譜柱：超高效液相色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18(100mm×2.1mm，1.7μm)，進(jìn)樣量為5.0μL。采用魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含量。獲得雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的色譜圖，通過(guò)色譜圖積分得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的峰面積，再將峰面積代入魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含量。

F、魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，分別在不含雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的魚(yú)飼料中添加系列濃度的雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素后得到系列濃度的魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，以其濃度分別為橫坐標(biāo)X₁，X₂，X₃，雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積分別為縱坐標(biāo)Y₁，Y₂，Y₃，繪制魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

G、將實(shí)際測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積值代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算得到魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量；如果魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量超出本基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍，可將前處理后得到的液體用定容溶液C稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并將測(cè)定值代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得出濃度值再乘以稀釋倍數(shù)即得到雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量。

優(yōu)選的，所述的試劑A中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中任一種液體試劑；

優(yōu)選的，所述的試劑B是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一種試劑；

優(yōu)選的，所述的溶液C是試劑A和溶液E按體積比1:1混合而成的溶液；

優(yōu)選的，所述的溶劑D是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一種試劑；

優(yōu)選的，所述的試劑F是甲酸、乙酸、氫氟酸、鹽酸中的任一種試劑；

優(yōu)選的，所述的溶液E是試劑F與蒸餾水按體積比1:2000～1:250混合而成的溶液；

所述的溶液C的配制方法：試劑A和溶液E按體積比1:1的比例混合而成。

所述的溶液E的配制方法：取50～400μL的試劑F加入到100mL蒸餾水混勻，配制成溶液E，其濃度為0.05～0.4％(體積比)。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果：

(1)該測(cè)定方法過(guò)程簡(jiǎn)單、操作方便、所用時(shí)間短(該測(cè)定方法測(cè)定一個(gè)魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含量只需2h)。

(2)測(cè)定過(guò)程中使用的優(yōu)選的試劑不僅提取、復(fù)溶效果好，而且價(jià)格低廉(測(cè)定1個(gè)魚(yú)飼料所用試劑費(fèi)用不足2元)。

(3)流動(dòng)相配制簡(jiǎn)單，檢測(cè)方法消耗試劑少，分析時(shí)間短，且測(cè)定方法的準(zhǔn)確度(見(jiàn)表1)和靈敏度高，分析一個(gè)樣品需要消耗試劑1.5mL，僅為普通分析方法分析一個(gè)樣品消耗試劑的1/12；該分析方法分析時(shí)間僅為5min，僅為普通分析方法分析時(shí)間的1/4；本分析方法的檢測(cè)限為10μg/kg，定量限為25μg/kg。

表1.魚(yú)飼料空白中添加雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素測(cè)定含量及精密度結(jié)果

附圖說(shuō)明

圖1為一種測(cè)定雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為100μg/L、100μg/L、100μg/L)的UPLC-TUV色譜圖。

其中，1-雙去甲氧基姜黃素，2-去甲氧基姜黃素，3-姜黃素。

圖2為一種魚(yú)飼料空白樣品的UPLC-TUV色譜圖。

圖3為一種魚(yú)飼料空白樣品中添加雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的加標(biāo)樣品(加標(biāo)濃度為100μg/kg)UPLC-TUV色譜圖。

其中，1-雙去甲氧基姜黃素，2-去甲氧基姜黃素，3-姜黃素。

圖4為一種測(cè)定的魚(yú)飼料空白中添加不同濃度雙去甲氧基姜黃素的加標(biāo)樣品繪制的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

圖5為一種測(cè)定的魚(yú)飼料空白中添加不同濃度去甲氧基姜黃素的加標(biāo)樣品繪制的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

圖6為一種測(cè)定的魚(yú)飼料空白中添加不同濃度姜黃素的加標(biāo)樣品繪制的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

經(jīng)本測(cè)定方法測(cè)定的魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素UPLC-TUV色譜圖基線平穩(wěn)，分離效果好，靈敏度高，重現(xiàn)性好。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。

一種測(cè)定魚(yú)飼料中姜黃素的方法，其步驟是

A、取魚(yú)飼料5.0g于50mL塑料離心管中，加入試劑A 15-30mL，振蕩30s，超聲5min，將50mL塑料離心管置離心機(jī)上7000r/min，離心5min；

B、將上層提取液轉(zhuǎn)移到125mL旋轉(zhuǎn)濃縮瓶中，再向50mL試管殘?jiān)屑尤朐噭〢 15-30mL重復(fù)提取一次，將旋轉(zhuǎn)濃縮瓶置40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至干，向旋轉(zhuǎn)濃縮瓶中加入試劑B 1～10mL渦旋振蕩30s復(fù)溶提取液殘?jiān)?/p>

C、將步驟B獲得的復(fù)溶溶液轉(zhuǎn)移到一支10mL塑料離心管中置40℃氮吹儀上氮吹至干，再向10mL塑料離心管中加入1mL定容溶液C溶解塑料管中的殘?jiān)?/p>

D、再在步驟C獲得的定容溶液C溶解塑料管中殘?jiān)娜芤褐屑尤?mL試劑D，渦旋振蕩30s，7000r/min離心5min，將上層液體棄去，用1mL注射器吸取下層液體過(guò)0.22μm聚醚砜水系濾頭，濾液放置到2mL進(jìn)樣瓶中，獲得待測(cè)定的液體。

E、在不含雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的魚(yú)飼料中添加系列濃度的雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素制作濃度為10、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000μg/kg魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，按照步驟A～D進(jìn)行處理。

F、UPLC-TUV測(cè)定條件：有機(jī)相為試劑A，水相為溶液E兩者的體積比為1:1～2:3；色譜柱為超高效液相色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，柱溫：30℃，流速0.3mL/min，進(jìn)樣量5.0μL；等度洗脫，分析時(shí)間：5.0min；獲得雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的色譜圖，通過(guò)色譜圖積分得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的峰面積。

G、魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，分別以在不含雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的魚(yú)飼料中添加系列濃度的雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素后得到的魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)濃度分別為10、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000μg/kg為橫坐標(biāo)X₁，X₂，X₃，峰面積分別為縱坐標(biāo)Y₁，Y₂，Y₃，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖4～圖6，獲得基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)指數(shù)和線性范圍見(jiàn)表2。魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素含量的計(jì)算公式為X₁＝(Y₁+1800.7)/309.65，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；魚(yú)飼料中去甲氧基姜黃素含量的計(jì)算公式為X₂＝(Y₂+3340.6)/260.88，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；魚(yú)飼料中姜黃素含量的計(jì)算公式為X₃＝(Y₃+14903)/256.06，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；將測(cè)得的雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積(Y₁，Y₂，Y₃)分別代入相應(yīng)方程中得出魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量分別為X₁，X₂，X₃。例如測(cè)定的魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積Y₁，Y₂，Y₃分別為306980，258384，254938，分別代入雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素含量計(jì)算公式分別得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量X₁，X₂，X₃，分別為997.19μg/kg，1003.24μg/kg，1053μg/kg。其中：X₁為雙去甲氧基姜黃素的含量，X₂為去甲氧基姜黃素的含量，X₃為姜黃素的含量；Y₁為雙去甲氧基姜黃素的峰面積，Y₂為去甲氧基姜黃素的峰面積，Y₃為姜黃素的峰面積。

通過(guò)變換雙去甲氧基姜黃素魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y₁＝309.65X₁-1800.7得到魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素含量的計(jì)算公式：X₁＝(Y₁+1800.7)/309.65；變換去甲氧基姜黃素魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y₂＝260.88X₂-3340.6得到魚(yú)飼料中去甲氧基姜黃素含量的計(jì)算公式：X₂＝(Y₂+3340.6)/260.88；變換姜黃素魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y₃＝256.06X₃-14903得到魚(yú)飼料中姜黃素含量的計(jì)算公式：X₃＝(Y₃+14903)/256.06。

H、將實(shí)際測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積值代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算得到魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量；如果魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量超出本基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍(10～10000μg/kg)可將前處理后得到的液體用定容溶液C稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并將測(cè)定值代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得出濃度值再乘以稀釋倍數(shù)即得到雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量。

優(yōu)選的，所述的試劑A中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中任一種液體試劑；

優(yōu)選的，所述的試劑B是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一種試劑；

優(yōu)選的，所述的溶液C是試劑A和溶液E按一定體積比混合而成的溶液；

優(yōu)選的，所述的溶劑D是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一種試劑；

優(yōu)選的，所述的試劑F是甲酸、乙酸、氫氟酸、鹽酸中的任一種試劑；

優(yōu)選的，所述的溶液E是試劑F與蒸餾水按體積比1:2000～1:250混合而成的溶液；

優(yōu)選的，所述的試劑F是甲酸、乙酸、氫氟酸、鹽酸中的任一種試劑；

所述的溶液C的配制方法：試劑A和溶液E按體積比1:1的比例混合而成。

所述的溶液E的配制方法：取50～400μL的試劑F加入到100mL蒸餾水混勻，配制成溶液E其濃度為0.05～0.4％(體積比)。

表2雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素魚(yú)飼料基質(zhì)曲線

注：X₁，X₂，X₃分別為雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量；Y₁，Y₂，Y₃分別為雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積。

實(shí)施例2：

一種測(cè)定魚(yú)飼料中姜黃素含量的方法，其步驟是：

A、取魚(yú)飼料5.0g于50mL塑料離心管中，加入試劑A 15-30mL，振蕩30s，超聲5min；

所述的試劑A可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中任一種液體試劑。

B、將離心管置離心機(jī)上7000r/min，離心5min，將上層提取液轉(zhuǎn)移到125mL旋轉(zhuǎn)濃縮瓶中，再向50mL試管殘?jiān)屑尤朐噭〢 15-30mL重復(fù)提取一次；所述的試劑A可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中任一種液體試劑。

C、將旋轉(zhuǎn)濃縮瓶置40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至干，向旋轉(zhuǎn)濃縮瓶中加入試劑B 1～10mL渦旋振蕩30s復(fù)溶旋轉(zhuǎn)濃縮瓶中的殘?jiān)凰龅脑噭〣是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一種試劑。

D、將復(fù)溶溶液轉(zhuǎn)移到一支10mL塑料離心管中置40℃氮吹儀上氮吹至干，再向10mL塑料離心管中加入1mL定容溶液C溶解塑料管中的殘?jiān)?，再加?mL試劑D，渦旋振蕩30s，7000r/min離心5min，將上層液體棄去；所述的溶液C是試劑A和溶液E按1:1的體積比混合而成的溶液；所述的試劑D是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一種試劑；所述的試劑F是甲酸、乙酸、氫氟酸、鹽酸中的任一種試劑；所述的溶液E是試劑F與蒸餾水按體積比1:2000～1:250混合而成的溶液；

E、用1mL注射器吸取下層液體過(guò)0.22μm聚醚砜水系濾頭，濾液放置到2mL進(jìn)樣瓶中，UPLC-TUV測(cè)定。

F、UPLC-TUV測(cè)定條件：流動(dòng)相組成是有機(jī)相為試劑A，水相為溶液E兩者的體積比為1:1～2:3。優(yōu)選的，所述的試劑A中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中任一種液體試劑；優(yōu)選的，所述的溶液E是試劑F與蒸餾水按體積比1:2000～1:250混合而成的溶液。所述的試劑F是甲酸、乙酸、氫氟酸、鹽酸中的任一種試劑；色譜柱為超高效液相色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，柱溫：30℃，流速0.3mL/min，進(jìn)樣量：5.0μL；等度洗脫；分析時(shí)間：5.0min。結(jié)果表明經(jīng)本測(cè)定方法測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素，色譜基線平穩(wěn)，姜黃素3種成分分離充分。

G、魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，分別在不含雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的魚(yú)飼料中添加系列濃度的雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素后得到系列濃度的魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，以其濃度分別為橫坐標(biāo)X₁，X₂，X₃，雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積分別為縱坐標(biāo)Y₁，Y₂，Y₃，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖4～圖6，獲得魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程見(jiàn)表2。魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素含量的計(jì)算公式為X₁＝(Y₁+1800.7)/309.65，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；魚(yú)飼料中去甲氧基姜黃素含量的計(jì)算公式為X₂＝(Y₂+3340.6)/260.88，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；魚(yú)飼料中姜黃素含量的計(jì)算公式為X₃＝(Y₃+14903)/256.06，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；將測(cè)得的雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積(Y₁，Y₂，Y₃)分別代入相應(yīng)方程中得出魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量分別為X₁，X₂，X₃。例如測(cè)定的魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積Y₁，Y₂，Y₃分別為306980，258384，254938，分別代入雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素含量計(jì)算公式分別得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量X₁，X₂，X₃分別為997.19μg/kg，1003.24μg/kg，1053μg/kg。

H、將實(shí)際測(cè)定魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積值代入魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)表1)中，計(jì)算得到魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量；如果魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量超出本基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍(10μg/kg～10000μg/kg)，可將前處理后得到的液體用定容溶液C稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并將測(cè)定值代入魚(yú)飼料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得出含量值再乘以稀釋倍數(shù)即得到魚(yú)飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量。

本實(shí)施例所有的試劑與實(shí)施例1相同。