本發明涉及需氧菌性陰道炎檢測試劑領域，具體涉及一種凝固酶檢測試劑、反應墊、其制備方法及試劑盒。
背景技術：
陰道炎是陰道黏膜及黏膜下結締組織的炎癥，是婦科門診常見的疾病。正常健康婦女，由于解剖學及生物化學特點，陰道對病原體的侵入有自然防御功能，當陰道的自然防御功能遭到破壞，則病原體易于侵入，導致陰道炎癥。常見的陰道炎有細菌性陰道炎(BV/AV)、霉菌性陰道炎(VVC)及滴蟲性陰道炎(TV)三大類。其中，女性細菌性陰道感染可分為兩種，一種由厭氧菌和兼性厭氧菌引起，臨床上稱細菌性陰道病(BV)，另一種由需氧菌引起，臨床上稱需氧菌性陰道炎(AV)。兩種細菌性陰道炎的病原體不同，臨床癥狀、治療方案和結局也不相同，區別這兩種細菌性陰道感染，在陰道感染的診療中具有重要意義。BV是指一類在生殖學上正常菌群(產H2O2乳酸桿菌)減少，代之以加德納菌、厭氧菌，彎曲弧菌大量繁殖，陰道內生態平衡系統改變引起的一類疾病。AV是由陰道乳酸桿菌減少，需氧菌感染引起的陰道炎癥。常見病原體為鏈球菌、葡萄球菌以及大腸埃希菌。正常陰道是以乳酸桿菌為優勢菌的正常微生物群，陰道pH＜4.5。而當患需氧菌性陰道炎時，陰道乳酸桿菌減少，而需氧菌繁殖導致陰道壁黏膜充血、水腫和產生膿性分泌物。臨床表現以陰道異常分泌物、性交痛為主。細菌預成酶是細菌在生長繁殖過程中合成的一系列與生長代謝有關的酶類，這些酶類能分解多種生化反應的底物，并且在有氧環境中能較長時間地保留其活性。不同種屬的細菌，其預成酶的種類不同。AV的主要致病菌黃色葡萄球菌、糞腸球菌、大腸埃希菌可產生凝固酶。通過檢測凝固酶來診斷陰道中需氧菌菌群結構是一個有效、可行的方法。但目前用于檢測凝固酶的檢測試劑其精確度有所欠缺。
技術實現要素：
為了克服現有技術的不足，本發明的第一個目的在于提供一種凝固酶檢測試劑，該試劑可使用生理鹽水作為樣品稀釋液，使用條件簡單方便，精確性高。
實現本發明的目的可以通過采取如下技術方案達到：一種凝固酶檢測試劑，包括反應劑和顯色劑；所述反應劑包括：嗎啉乙磺酸緩沖液、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺。
作為優選，所述反應劑的成分按重量份計包括：
蔗糖 0.2～10份；
聚乙烯吡咯烷酮 0.2～2份；
甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺 0.2～2份；
嗎啉乙磺酸緩沖液的摩爾濃度為：0.05～1.5mol/L。
再優選地，所述反應劑的成分按重量份計包括：
蔗糖 0.2份；
聚乙烯吡咯烷酮 2份；
甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺 2份；
嗎啉乙磺酸緩沖液的摩爾濃度為：0.2mol/L。
作為優選，所述顯色劑按重量份計包括：
鹽酸 3.5～14份；
肉桂醛 0.2～1份。
再優選地，所述顯色劑按重量份計包括：
鹽酸 7份；
肉桂醛 0.5份。
作為優選，所述聚乙烯吡咯烷酮為聚乙烯吡咯烷酮-K90。
作為優選，使用所述凝固酶檢測試劑進行檢測的樣品的稀釋液為生理鹽水。
本發明的第二個目的是為了提供一種反應墊，該反應墊使用方便快捷，精確性高。
實現本發明的目的可以通過采取如下技術方案達到：一種反應墊，包括載體和如上所述的反應劑的成分；所述反應劑的成分包被在載體上；所述反應墊用于檢測凝固酶。
作為優選，使用所述反應墊進行檢測的樣品的稀釋液為生理鹽水。
本發明的第三個目的是為了提供一種反應墊的制備方法，通過該制備方法結合檢測試劑的成分獲得一種靈敏度高、精確度高的反應墊。
實現本發明的目的可以通過采取如下技術方案達到：一種如上所述的反應墊的制備方法，包括以下步驟：
1)制備浸泡液：將蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺溶于嗎啉乙磺酸緩沖液中，得到浸泡液；
2)浸泡液處理：將載體置于浸泡液中充分浸泡后取出，然后進行干燥，得到反應墊。
作為優選，步驟2)中，所述載體置于浸泡液中充分浸泡10～20s。
作為優選，步驟2)中，所述干燥的溫度為20～70℃，時間為30～40min。
作為優選，步驟2)中，所述載體為濾紙。
本發明的第四個目的是為了提供一種試劑盒，試劑盒用于檢測凝固酶，使用方便靈活。
實現本發明的目的可以通過采取如下技術方案達到：
一種試劑盒，包括如上所述的反應墊，以及顯色劑；所述試劑盒用于檢測凝固酶。
本發明的設計原理如下：
當陰道分泌物中的凝固酶活性異常時，凝固酶水解甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺，在顯色劑的作用下顯淺紅色、玫紅色或紅紫色，呈色深度與凝固酶活性成正比。
相比現有技術，本發明的有益效果在于：
1、本發明的反應墊可使用生理鹽水作為檢測樣品稀釋液，使用條件簡單方便，并可結合使用條件相同的其他菌種預成酶的檢測反應墊同時對樣品進行檢測，效率更高；
2、本發明的反應墊制備方法最大限度地將檢測試劑的成分包被在反應墊中，獲得的反應墊靈敏度高，精確性好。
具體實施方式
下面，結合具體實施方式，對本發明做進一步描述：
一種凝固酶檢測試劑，包括：反應劑和顯色劑；反應劑按重量份計包括以下成分：
蔗糖 0.2～10份；
聚乙烯吡咯烷酮-K90 0.2～2份；
甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺 0.2～2份。
嗎啉乙磺酸緩沖液的摩爾濃度為：0.05～1.5mol/L；
顯色劑按重量份計包括：
鹽酸 3.5～14份；
肉桂醛 0.2～1份。
聚乙烯吡咯烷酮(PVP)-K90，在25℃下，體積百分數為5％的水溶液(aq)，其粘度為39.5～45.8mPas。
其中反應劑通過以下制備方法制得：
用嗎啉乙磺酸制備嗎啉乙磺酸緩沖液，然后將蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺依次溶于嗎啉乙磺酸緩沖液中，得到反應劑；
其中顯色劑通過以下制備方法制得：
將鹽酸制備鹽酸溶液，然后將肉桂醛溶于鹽酸溶液中，得到顯色劑，顯色劑配合反應劑，得到凝固酶檢測試劑。
一種反應墊，包括載體和如上所述的反應劑的成分；所述反應劑的成分包被在載體上；所述反應墊用于檢測凝固酶；使用該反應墊進行樣品檢測時，樣品的稀釋液為生理鹽水。
該反應墊的制備方法包括以下步驟：
1)備料：按以上重量份準備嗎啉乙磺酸、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺；
2)配置嗎啉乙磺酸緩沖液(MES)：將嗎啉乙磺酸溶于水溶劑中，得到嗎啉乙磺酸緩沖液，待用；
3)制備浸泡液：將蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺溶于嗎啉乙磺酸緩沖液中，得到浸泡液；
4)浸泡液處理：將濾紙置于浸泡液中充分浸泡10～20s后取出，然后在溫度為20～70℃，時間為30～40min的條件下進行干燥，得到反應墊。
更具體地，所述濾紙可以是Whatman玻璃纖維濾紙、GF/A Whatman的纖維濾紙Grade3或普通定量濾紙。
應用反應墊制備試劑盒：試劑盒包括反應墊和顯色劑；試劑盒通過以下步驟得到：
1)放置反應墊：將反應墊置于反應孔中，然后將反應孔密封；
2)制備顯色劑：將肉桂醛溶于鹽酸溶液中，得到顯色劑；
所述顯色劑配合反應墊，得到試劑盒；試劑盒置于2～8℃中保存。
實施例1～3
實施例1～3公開了凝固酶檢測試劑，按表1分別準備三組原料成分，按表2準備濃度不同的嗎啉乙磺酸緩沖液；按表3準備顯色劑原料；A組用于實施例1，B組用于實施例2，C組用于實施例3。
將蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺依次溶于100mL嗎啉乙磺酸緩沖液中，得到反應劑。
將肉桂醛溶于10mL鹽酸溶液中，得到顯色劑，顯色劑配合反應劑，得到凝固酶檢測試劑。
表1反應劑的成分及含量
表2嗎啉乙磺酸緩沖液的配制參數
表3顯色劑的成分及含量
對實施例1～3中得到的檢測試劑進行檢測：分別制備酶活性濃度不同的凝固酶標準品溶液，凝固酶標準品溶液以生理鹽水作為溶劑，檢測實施例1～3的靈敏度。
分別取實施例1～3的凝固酶檢測試劑各1mL，然后分別滴加標準品溶液35uL，在溫度為37±2℃的條件下水浴8～10min，然后滴入顯色劑，觀察溶液中的顏色變化，溶液顯色為淺紅色、玫紅色或紅紫色表示陽性，無顯色表示陰性；結果如表4所示：
表4實施例1～3的檢測結果
+表示陽性，-表示陰性。
實施例1～3均可檢測凝固酶，且當凝固酶活性較低時仍然能夠檢測到凝固酶；其中在酶活性濃度為3.75U/mL時，實施例1仍可檢測得到少量的凝固酶，實施例1的檢測試劑靈敏度最高。
實施例4～6
實施例4～6公開了一種試劑盒：
1)按表1、表2和表3進行備料和配制嗎啉乙磺酸緩沖液；A組用于實施例4，B組用于實施例5，C組用于實施例6；
2)制備浸泡液：將蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺溶于嗎啉乙磺酸緩沖液中，得到浸泡液；
3)浸泡液處理：將濾紙置于浸泡液中充分浸泡10～20s后取出，然后在溫度為40℃，時間為30～40min的條件下進行干燥，得到反應墊；
4)放置反應墊：將反應墊置于反應孔中，然后將反應孔密封；
5)制備顯色劑：將肉桂醛溶于鹽酸溶液中，得到顯色劑；所述顯色劑配合反應墊，得到試劑盒。
對實施例4～6中得到的試劑盒進行檢測：分別制備酶活性濃度不同的凝固酶標準品溶液，凝固酶標準品溶液以生理鹽水作為溶劑，檢測實施例4～6的靈敏度；在實施例4～6的試劑盒反應孔中分別滴加標準品溶液35uL，在溫度為37±2℃的條件下水浴8～10min，然后滴入顯色劑，觀察試劑盒中的顏色變化，顯色為淺紅色、玫紅色或紅紫色表示陽性，無顯色表示陰性；結果如表5所示：
表5實施例4～6的檢測結果
+表示陽性，-表示陰性。
實施例4～6的試劑盒均可檢測凝固酶，且當凝固酶活性較低時仍然能夠檢測到凝固酶；其中在酶活性濃度為3.75U/mL時，實施例4仍可檢測得到少量的凝固酶，實施例4的反應墊靈敏度最高。
對于本領域的技術人員來說，可根據以上描述的技術方案以及構思，做出其它各種相應的改變以及變形，而所有的這些改變以及變形都應該屬于本發明權利要求的保護范圍之內。