本發(fā)明涉及漁業(yè)環(huán)境監(jiān)測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種底泥沉積物中三唑磷的超高效液相色譜質(zhì)譜檢測方法。
背景技術(shù)：
三唑磷(triazophos)是一種廣譜有機磷殺蟲劑、殺螨劑、殺線蟲劑，主要用于防治果樹、棉花、糧食類作物上的鱗翅目害蟲、害螨、蠅類幼蟲及地下害蟲等, 具有強烈的觸殺、胃毒作用和兼具一定內(nèi)吸作用。隨著大多數(shù)有機氯和有機磷高毒農(nóng)藥的禁用,因三唑磷在環(huán)境中能較快速的降解，所以對其需求越來越大,而且在短時間內(nèi)難以被其它品種農(nóng)藥完全取代。石利利研究了3種不同類型土壤中的降解特性，表明降解半衰期分別為28.3、3.75和3.28d，且不易向下滲漏，在水體環(huán)境中，三唑磷會被吸附于懸浮顆粒物（礦物、生物碎屑、膠體物質(zhì)和有機質(zhì)）中，最終通過物理、化學(xué)及生物作用沉積于水體底部。三唑磷在大規(guī)模使用后可通過遷移、擴散和轉(zhuǎn)化，進入到食物鏈和食物網(wǎng)，可對生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生不可避免的影響。由于三唑磷對水生生物具有毒性，國內(nèi)外很多學(xué)者對其毒理學(xué)進行了多方面的研究?，F(xiàn)對三唑磷的檢測分析一般都是GC和GC-MS為主，但其對三唑磷靈敏度在10ppb左右，有時候并不能滿足底泥沉積物中痕量三唑磷的分析要求，由于底泥沉積物品樣品基質(zhì)復(fù)雜，若樣品前處理過程中雜質(zhì)去除不好，可直接干擾儀器的測定結(jié)果，甚至損壞儀器。目前國內(nèi)還沒有針對底泥沉積物中三唑磷超高液相色譜質(zhì)譜檢測的方法。因此如何高效地從底泥沉積物中提取三唑磷并進行凈化，成了底泥沉積物痕量三唑磷分析的一個瓶頸。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種底泥沉積物中三唑磷的超高效液相色譜質(zhì)譜檢測方法，能快速、準(zhǔn)確的對沉積物中三唑磷測定，實現(xiàn)三唑磷的定量及定性測定。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：
一種底泥沉積物中三唑磷的超高效液相色譜質(zhì)譜檢測方法，包括如下步驟：
①渦旋震蕩+超聲溶劑萃?。阂约儍羲鸵宜嵋阴槿軇瑢悠窚u旋震蕩后，進行超聲萃取得萃取液；
②分散固相萃取+固相萃取柱富集凈化：萃取液中加入石墨化碳黑和N-丙基乙二胺（或稱乙二胺-N-丙基硅烷），渦旋震蕩，離心，過無水硫酸鈉，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入正己烷洗滌溶解后得待檢測液，待檢測液上弗羅里硅土固相萃取柱，二氯甲烷洗脫，收集洗脫液；
③超高效液相色譜質(zhì)譜檢測：取洗脫液進行液相色譜-質(zhì)譜檢測，然后繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，外標(biāo)法定量，根據(jù)峰面積計算三唑磷的濃度。
作為優(yōu)選，步驟①渦旋震蕩+超聲溶劑萃取具體過程為：稱量10g樣品于50毫升離心管中，加入10毫升純凈水，再加入15毫升乙酸乙酯，加蓋渦旋震蕩混勻2分鐘，在40KHz超聲波作用下35℃-45℃溫度萃取10 min，然后將萃取樣品在5000 轉(zhuǎn)每分鐘轉(zhuǎn)速下離心5 分鐘，分離出萃取液，再加15毫升乙酸乙酯重復(fù)提取一次，合并萃取液；
作為優(yōu)選，步驟②中：萃取液中加入石墨化碳黑和N-丙基乙二胺各0.2克，渦旋震蕩2分鐘，5000轉(zhuǎn)每分鐘轉(zhuǎn)速下離心2分鐘，離心分離出的液體過無水硫酸鈉，收集于100毫升雞型瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入3毫升正己烷洗滌溶解后得待檢測液。
作為優(yōu)選，步驟②中：待檢測液上弗羅里硅土固相萃取柱，棄去流出液，再向弗羅里硅土固相萃取柱加入色譜純二氯甲烷洗脫，每次5mL，收集洗脫液。
作為優(yōu)選，步驟③中液相色譜檢測條件為：色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱，規(guī)格：2.1 mm×50 mm，1.7 μm；樣品室溫度4 ℃；柱溫40 ℃；進樣量10 μL；流速 0.2 mL/min；流動相A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈，梯度洗脫：0~2.0 min，40% A；2.0~4.0 min，10% A；4.0~5.0 min，40% A。
作為優(yōu)選，步驟③中質(zhì)譜檢測條件為：電噴霧離子源，正離子掃描（ESI+）；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；毛細(xì)管電壓：3.5 kV；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：360℃；錐孔氣流量：50L/h；脫溶劑氣流量：800L/h；三唑磷母離子m/z313.9，定量離子m/z161.7，駐留時間0.15秒，錐孔電壓30伏特，碰撞能20Ev，定性離子選擇m/z285.7，駐留時間0.15秒，錐孔電壓30伏特，碰撞能15Ev。
本發(fā)明主要是開發(fā)一種檢測靈敏度比傳統(tǒng)氣相色譜和質(zhì)譜低兩個數(shù)量級左右的檢測方法，滿足底泥沉積物中痕量三唑磷的分析研究。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明在一定的溫度下采用渦旋震蕩+超聲輔助乙酸乙酯萃取底泥沉積物中的三唑磷，萃取效果好，操作簡單；采用石墨化碳黑和PSA分散固相萃取+弗羅里硅土固相萃取柱富集凈化，凈化效果好，有效地降低了萃取液中雜質(zhì)對超高效液相色譜質(zhì)譜測定過程的干擾；采用超高效液相色譜質(zhì)譜進行選擇離子監(jiān)測，具有非常高的靈敏度和精確度；與已有的測試技術(shù)相比，本發(fā)明在檢測三唑磷過程中耗時少，靈敏度高，方法可同時進行定性及定量測定，操作簡單易行，消耗成本低，能夠快速分析底泥沉積物中三唑磷。
附圖說明
圖1是三唑磷的離子色譜流圖。圖中下半部分為三唑磷定量離子對m/z 313.9>161.7采集通道，上半部分為定性離子對m/z 313.9>285.7采集通道。
具體實施方式
下面通過具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的具體說明。
本發(fā)明中，若非特指，所采用的原料和設(shè)備等均可從市場購得或是本領(lǐng)域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。
本發(fā)明采用ACQUITYTM超高效液相色譜儀，配Waters Quattro Premier XE質(zhì)譜儀測定。三唑磷的離子色譜流圖見圖1，由圖中可看出三唑磷的保留時間為1.61min，峰形尖銳對稱，無毛刺，整體基線平穩(wěn)，且無溶劑峰或其它雜峰，完全滿足日常分析測試的需要。
實施例：
泥鰍養(yǎng)殖塘中底泥三唑磷測定
1、渦旋震蕩+超聲溶劑萃?。悍Q量10g左右濕樣于50毫升離心管中，加入10毫升純凈水，再加入15毫升乙酸乙酯，加塞震蕩混勻2分鐘，在40KHz超聲波作用下35℃-45℃溫度萃取10 min，然后將萃取樣品離心5 分鐘，轉(zhuǎn)速5000 轉(zhuǎn)每分鐘，分離出萃取液，再加15毫升乙酸乙酯重復(fù)提取一次，合并萃取液。
2、分散固相萃取+固相萃取柱富集凈化：萃取液中加入石墨化碳黑和N-丙基乙二胺（PSA）各0.2克左右，渦旋震蕩2分鐘，5000轉(zhuǎn)每分鐘離心2分鐘，離心分離出的液體過無水硫酸鈉，收集于100毫升雞型瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入3毫升正己烷洗滌溶解后得待檢測液。0.5g/3mL規(guī)格佛羅里硅土柱，用3毫升正己烷活化弗羅里硅土固相萃取柱，待檢測液上弗羅里硅土固相萃取柱，棄去流出液，再向弗羅里硅土固相萃取柱加入色譜純二氯甲烷5毫升洗脫，收集洗脫液于15毫升規(guī)格離心管中。
3、超高效液相色譜質(zhì)譜檢測：
取收集的洗脫液經(jīng)氮吹至干，以初始流動相（0.1%甲酸水：乙腈，4:6體積比）1 mL洗脫定容，經(jīng)0.22 μm的有機濾膜過濾到進樣瓶中，進行液相色譜-質(zhì)譜檢測。
色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；樣品室溫度4 ℃；柱溫40 ℃；進樣量10 μL；流速 0.2 mL/min；流動相A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈，梯度洗脫：0~2.0 min，40% A；2.0~4.0 min，10% A；4.0~5.0 min，40% A；質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，正離子掃描（ESI+）；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；毛細(xì)管電壓：3.5 kV；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：360℃；錐孔氣流量：50L/h；脫溶劑氣流量：800L/h；三唑磷母離子m/z313.9，定量離子m/z161.7，駐留時間0.15秒，錐孔電壓30伏特，碰撞能20Ev，定性離子選擇m/z285.7，駐留時間0.15秒，錐孔電壓30伏特，碰撞能15Ev。
4、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
0.1%甲酸水和乙腈（V/V,4:6）配置使用濃度為100μg/L三唑磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后逐級稀釋成濃度為1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.0μg/L、100.0μg/L三唑磷標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)分面積進行定量，保留時間定性。
5、方法回收率的測定
分別添加0.5μg/Kg，2.0μg/Kg,8.0μg/Kg的三個梯度濃度加標(biāo)，每個添加水平做三個平行樣，按1-3步驟進行超高效液相色譜質(zhì)譜檢測，并與上述得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，通過換算最終得到泥樣中三唑磷濃度，方法回收率在60%-120%之間，RSD≤15%。
利用本發(fā)明的方法檢測海洋沉積物30份，同采用DB 33/T 610 -2006 的方法檢測結(jié)果一致。儀器檢出限為0.1μg/L，方法檢出限為0.25μg/Kg。
以上所述的實施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。