一種鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法與流程

本發(fā)明屬于藥物檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體來說，涉及到一種鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。
背景技術(shù)：
：鹽酸右美托咪定是一種全新的α2-腎上腺素受體激動劑，具有強效鎮(zhèn)靜作用，是可樂定作用的8倍。主要作用于腦橋和延髓以及腦干籃斑的腎上腺素受體，具有抗交感療效，半衰期2.3h，鎮(zhèn)靜效果強大兼具其他麻醉輔助作用。主要適用于重癥監(jiān)護治療期間最初插管和使用呼吸機病人的鎮(zhèn)靜，可在機械通氣患者拔管之前、拔管中和拔管后連續(xù)使用，在拔管前無需停藥；也可用于非插管患者在尹術(shù)和其他操作前和/或術(shù)中的鎮(zhèn)靜。在美國應用5年多的臨床經(jīng)驗表明，鹽酸右美托咪定可產(chǎn)生穩(wěn)定的鎮(zhèn)定和覺醒作用，對重癥病人的生理及心理方面的需求有獨特的協(xié)同作用，可明顯減少誘導麻醉所需的麻醉劑用量；術(shù)前給予本品可減少術(shù)前和術(shù)后的阿片或非阿片類止痛劑的用量，這一特性對于麻醉和重癥監(jiān)護有重要的意義；還可以促進兒茶酚胺血流動力學的穩(wěn)定性，有效減輕氣管插管、手術(shù)應激和麻醉及恢復早期血流動力學應答。目前，鹽酸右美托咪定原料和制劑有關(guān)物質(zhì)測定方法還未有國家標準。李鴻雁曾采用如下方法對鹽酸右美托咪定中的有關(guān)物質(zhì)：采用WelchUltimateAQC18(250mm×4.6mm，3μm)為色譜柱，柱溫35℃；以乙腈-磷酸鹽緩沖液為流動相，進行梯度洗脫；流速為1.0mL·min-1；檢測波長為220nm。該測定方法驗證結(jié)果表明：鹽酸右美托咪定與各已知雜質(zhì)及強制破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物均分離良好；七種雜質(zhì)在各自的線性范圍內(nèi)質(zhì)量濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，且校正因子(相對于鹽酸右美托咪定)分別為1.73、1.55、0.98、1.45、0.92、0.98、1.04；且六種雜質(zhì)的平均回收率及該法精密度試驗都符合要求。但上述方法專屬性不強，靈敏度較低，不能滿足鹽酸右美托咪定的各種制劑。技術(shù)實現(xiàn)要素：為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種專屬性強、靈敏度高的鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。本發(fā)明所述的一種鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，所述測定方法具體步驟為：采用高效液相色譜法進行進檢測，檢測波長為220nm；樣品溶解溶劑為50％-95％的乙腈磷酸鹽緩沖液溶液；用辛烷基鍵合硅膠、十八烷基鍵合硅膠或N-氧化石松堿M鍵合硅膠中的一種為填料的色譜柱，流動相為磷酸鹽緩沖液和乙腈；所述磷酸鹽緩沖液均為取磷酸氫二銨2.64g，加水溶解并稀釋至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.3所得；采用梯度流動相洗脫，以流動相體積比為100％計，流動相的梯度設(shè)置如下：本發(fā)明所述的一種鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，所述樣品溶解溶劑為50％的乙腈磷酸鹽緩沖液溶液；所述流動相的梯度設(shè)置如下：時間(min)磷酸鹽緩沖液(％)乙腈(％)07030155050305050357030407030本發(fā)明所述的一種鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，所述樣品溶解溶劑為80％的乙腈磷酸鹽緩沖液溶液；所述流動相的梯度設(shè)置如下：本發(fā)明所述的一種鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，所述樣品溶解溶劑為80％的乙腈磷酸鹽緩沖液溶液；所述流動相的梯度設(shè)置如下：時間(min)磷酸鹽緩沖液(％)乙腈(％)06040154060304060356040406040本發(fā)明所述的一種鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，所述N-氧化石松堿M鍵合硅膠的制備步驟為：1)取20g活化的硅膠于500mL三口瓶中，再量取100mL甲苯和40mL的γ-氨丙基三乙氧基硅烷，120℃下油浴，攪拌回流13h，待冷卻后，產(chǎn)物依次用甲苯，乙醇洗滌抽濾至無膠狀物存在；在60℃下干燥24h，干燥箱內(nèi)冷卻；2)在500mL的單口瓶中加入步驟1)的產(chǎn)物，然后依次加入120mL35％的甲醛溶液和2mL的乙酸溶液，室溫攪拌反應2h，經(jīng)無水乙醇抽濾后，置于500mL三口瓶中備用；取N-氧化石松堿M4g溶于適量水溶液中，調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0，加入上述三口瓶中，60℃攪拌下反應10h；待產(chǎn)物冷卻，依次用大量二次水、無水乙醇洗滌抽濾至濾液清亮；60℃恒溫干燥6h，于干燥箱內(nèi)冷卻后裝棕色瓶內(nèi)即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法可以很好地將鹽酸右美托咪定與其他非活性物質(zhì)分離，可以準確地測定其雜質(zhì)的含量。采用本發(fā)明的檢測方法，用50-95％的乙腈磷酸鹽緩沖液溶液作為溶劑可以迅速溶解樣品，并以乙腈、磷酸鹽緩沖液作為流動相進行梯度洗脫，分離過程所用時間大幅度縮短，適合鹽酸右美托咪定原料或制劑的有關(guān)物質(zhì)的檢測。本發(fā)明所建立的高效液相色譜法具有操作簡單，主峰的峰純度符合要求且靈敏度高，結(jié)果準確可靠，專一性強的特點。附圖說明圖1是鹽酸右美托咪定系統(tǒng)適用性HPLC圖譜；圖2是鹽酸右美托咪定小試粗品有關(guān)物質(zhì)HPLC圖譜；圖3是鹽酸右美托咪定原料有關(guān)物質(zhì)HPLC圖譜；圖4是鹽酸右美托咪定有關(guān)物質(zhì)定量限HPLC圖譜；圖5是鹽酸右美托咪定有關(guān)物質(zhì)檢測限HPLC圖譜；圖6是鹽酸右美托咪定原料在50％的甲醇磷酸鹽緩沖液溶液中降解HPLC圖譜；圖7是鹽酸右美托咪定注射液空白輔料HPLC圖譜；圖8是鹽酸右美托咪定注射液樣品有關(guān)物質(zhì)HPLC圖譜。具體實施方式下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明所述鹽酸右美托咪定原料或制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法做進一步說明，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于此。實施例1儀器與條件：Agilent1260液相色譜系統(tǒng)，DAD檢測器，色譜柱：WatersC18(250×4.6mm，5μm)；檢測波長：220nm；以磷酸鹽緩沖液為流動相A、乙腈為流動相B，按表1進行梯度洗脫。表1流動相的濃度梯度試驗步驟：1、系統(tǒng)適用性試驗：取鹽酸右美托咪定原料約10mg，置10ml量瓶中，加6％的雙氧水1ml，60℃烘箱中加熱30分鐘，用乙腈-磷酸鹽緩沖液(1:1)稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，HPLC圖譜見附圖1。由圖1可見：鹽酸右美托咪定主峰的保留時間8.5min，與其相鄰兩雜質(zhì)峰的分離度分別為2.9、6.2，均符合測定要求。2、鹽酸右美托咪定小試粗品有關(guān)物質(zhì)的測定：取鹽酸右美托咪定小試粗品約10mg，置10ml量瓶中，加乙腈-磷酸鹽緩沖液(1:1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，依法測定，HPLC圖譜見附圖2。由圖2可見：鹽酸右美托咪定最后一雜質(zhì)峰在梯度條件下保留時間29.1min，同時，其主峰峰純度符合規(guī)定。3、鹽酸右美托咪定原料有關(guān)物質(zhì)的測定：取鹽酸右美托咪定原料約10mg，置10ml量瓶中，加乙腈-磷酸鹽緩沖液(1:1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，依法測定，HPLC圖譜見附圖3。4、靈敏度試驗：取鹽酸右美托咪定對照品適量，加乙腈-磷酸鹽緩沖液(1:1)稀釋制成每1ml中含0.25μg(0.05％)、0.125μg(0.025％)的溶液，精密量取10μl，依法檢查，結(jié)果見附圖4、5。由圖4-5可見：濃度為0.25μg/ml時，信噪比為27.7，濃度為0.125μg/ml時，信噪比為23.6，結(jié)果表明本方法的靈敏度高，0.025％的雜質(zhì)也能檢出。證明該方法靈敏度較好。5、鹽酸右美托咪定在甲醇磷酸鹽緩沖液溶液中的穩(wěn)定性測定試驗：取鹽酸右美托咪定原料適量，加50％的甲醇磷酸鹽緩沖液溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，室溫放置24小時，HPLC圖譜見附圖6。6、由圖6可見：鹽酸右美托咪定在50％的甲醇磷酸鹽緩沖液溶液中的穩(wěn)定性差，本發(fā)明的檢測方法能將鹽酸右美托咪定與其降解產(chǎn)物很好分離。7、取鹽酸右美托咪定注射液空白輔料適量(約相當于鹽酸右美托咪定10mg)置于10ml量瓶中，加乙腈-磷酸鹽緩沖液(1:1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，依法測定，HPLC圖譜見附圖7。由圖7可見：空白輔料對樣品的有關(guān)物質(zhì)測定無干擾。8、取鹽酸右美托咪定注射液，依法測定，HPLC圖譜見附圖8。由圖8可見：鹽酸右美托咪定注射液有關(guān)物質(zhì)檢查符合規(guī)定，同時鹽酸右美托咪定峰的峰純度符合要求。由上述試驗結(jié)果可知：利用本發(fā)明的檢測方法能將鹽酸右美托咪定與其雜質(zhì)峰很好分離、檢測波長選擇合理、主峰的峰純度符合要求且靈敏度高，因此本方法可用于鹽酸右美托咪定及其制劑的質(zhì)量控制。實施例2儀器與條件：Agilent1260液相色譜系統(tǒng)，DAD檢測器，色譜柱：WelchMaterialsC8(150×4.6mm，5μm)；檢測波長：220nm；以磷酸鹽緩沖液為流動相A、乙腈為流動相B，按表2進行梯度洗脫。表2流動相的濃度梯度實驗步驟：取鹽酸右美托咪定原料約10mg，置10ml量瓶中，加6％的雙氧磷酸鹽緩沖液1ml，60℃烘箱中加熱30分鐘，用乙腈-磷酸鹽緩沖液(8:2)稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液，精密量取10μl注入液相色譜儀，依法測定。由試驗結(jié)果可知：利用本發(fā)明的檢測方法能將鹽酸右美托咪定與其最難分離的氧化降解產(chǎn)物很好分離，同時主峰的峰純度符合要求，較難洗脫的雜質(zhì)峰也能較快洗脫下來，本發(fā)明方法可用于鹽酸右美托咪定及其制劑的質(zhì)量控制。實施例3儀器與條件：Agilent1260液相色譜系統(tǒng)，DAD檢測器，色譜柱：N-氧化石松堿M鍵合硅膠柱(250×4.6mm，5μm)；檢測波長：220nm；以磷酸鹽緩沖液為流動相A、乙腈為流動相B，按表3進行梯度洗脫。表3流動相的濃度梯度實驗步驟：取鹽酸右美托咪定原料約10mg，置10ml量瓶中，加6％的雙氧磷酸鹽緩沖液1ml，60℃烘箱中加熱30分鐘，用乙腈-磷酸鹽緩沖液(9.5:0.5)稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液，精密量取10μl注入液相色譜儀，依法測定。所述N-氧化石松堿M鍵合硅膠柱的制備步驟為：1)取20g活化的硅膠于500mL三口瓶中，再量取100mL甲苯和40mL的γ-氨丙基三乙氧基硅烷，120℃下油浴，攪拌回流13h，待冷卻后，產(chǎn)物依次用甲苯，乙醇洗滌抽濾至無膠狀物存在；在60℃下干燥24h，干燥箱內(nèi)冷卻；2)在500mL的單口瓶中加入步驟1)的產(chǎn)物，然后依次加入120mL35％的甲醛溶液和2mL的乙酸，室溫攪拌反應2h，經(jīng)無水乙醇抽濾后，置于500mL三口瓶中備用；取N-氧化石松堿M4g溶于適量水溶液中，調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0，加入上述三口瓶中，60℃攪拌下反應10h；待產(chǎn)物冷卻，依次用大量二次水、無水乙醇洗滌抽濾至濾液清亮；60℃恒溫干燥6h，于干燥箱內(nèi)冷卻后裝棕色瓶內(nèi)得N-氧化石松堿M鍵合硅膠；3)將N-氧化石松堿M鍵合硅膠常規(guī)裝柱，即得。試驗結(jié)果表明，和以往采用辛烷基鍵合硅膠、十八烷基硅烷鍵合硅膠柱相比，采用N-氧化石松堿M鍵合硅膠柱后，各雜質(zhì)峰之間分離更好，同時對流動相的梯度洗脫條件選擇性要求相對可以更低。由試驗結(jié)果可知：利用本發(fā)明的檢測方法能將鹽酸右美托咪定與其最難分離的氧化降解產(chǎn)物很好分離，同時主峰的峰純度符合要求，較難洗脫的雜質(zhì)峰也能較快洗脫下來，本方法可用于鹽酸右美托咪定及其制劑的質(zhì)量控制。當前第1頁1 2 3