一種婦女痛經顆粒指紋圖譜的建立方法與流程

本發明涉及中藥制劑的質量控制方法，特別是涉及一種用高效液相色譜法對婦女痛經顆粒制劑指紋圖譜的構建方法。

背景技術：

婦女痛經顆粒由丹參、五靈脂、延胡索、蒲黃四味藥制成的純中藥制劑。具有活血，調經，止痛的作用。用于氣血凝滯，小腹腫痛，經期腹痛。現行標準中婦女痛經顆粒的質量控制方法主要是含量測定，僅僅是選取其中一兩種成分的含量來說明產品的內在質量，這些控制方法不足以代表其質量整體，具有一定的局限性。現行的婦女痛經顆粒的質量控制標準已不能真實反映其內在品質及批次之間產品質量的一致性。近年來科技發展迅速，指紋圖譜技術、遠紅外在線控制技術等多種新技術用于中藥的生產和質量控制等方面，取得了很好的效果，極大的提高了中藥生產和質量控制等環節的科技含量。而現行參照西藥的質量控制模式的質量標準不能恰當有效的反映中藥內在的質量。宏觀的鑒別和主要有效成分含量測定結合才是質量控制模式的發展趨勢。

技術實現要素：

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種婦女痛經顆粒指紋圖譜的建立方法，該方法用于評價和控制婦女痛經顆粒的質量，以確保婦女痛經顆粒的質量穩定性、一致性和可控性，從而提高婦女痛經顆粒的安全性和有效性。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下的技術方案。

一種婦女痛經顆粒指紋圖譜的建立方法：取婦女痛經顆粒用甲醇超聲波提取，以延胡索乙素、丹酚酸B為對照品，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫過程為梯度洗脫。

上述婦女痛經顆粒指紋圖譜的建立方法如下：

（a）供試品溶液的制備：取婦女痛經顆粒1.5～2.5g，充分研細后加入甲醇10～50ml，超聲處理20～40分鐘，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量；搖勻，濾過，取續濾液為供試品溶液，所述濾過為采用0.45μm微孔濾頭濾過；

（b）對照品溶液的制備：精密稱取延胡索乙素對照品適量、丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1ml含胡索乙素0.05mg和丹酚酸B 0.10mg的混合溶液，即得；

（c）色譜條件為：ODS C18色譜柱，以甲醇-乙腈（1：1）為流動相A，以0.1%磷酸水溶液（用三乙胺調pH值=6.0）為流動相B，梯度洗脫，流速0.5～1.5ml/min，柱溫25～35℃，檢測波長：260～300nm；

（d）測定：精密吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到婦女痛經顆粒的指紋圖譜。

進一步地，前述婦女痛經顆粒指紋圖譜的方法優選方案如下：

（a）供試品溶液的制備：取本品5袋，研細，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量。搖勻，濾過，取續濾液為供試品溶液；所述濾過為采用0.45μm微孔濾頭濾過；

（b）對照品溶液的制備：分別精密稱取延胡索乙素對照品5mg和丹酚酸10mg，置同一100ml容量瓶中，加甲醇充分溶解，定容，作為對照品溶液；

（c）色譜條件為： ODS C18色譜柱，以甲醇-乙腈（1：1）為流動相A，以0.1%磷酸水溶液（用三乙胺調pH值=6.0）為流動相B，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫30℃，檢測波長：280nm；

（d）測定：分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到婦女痛經顆粒的指紋圖譜。

前述方法中所述梯度洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行：

用前述方法建立的指紋圖譜中有9個特征峰，其中峰3為丹酚酸B，峰8為延胡索乙素，圖譜總長度為100min。

使用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”2004版對所述指紋圖譜進行相似度評價，其相似度應大于0.950。

指紋圖譜相似度參數設置為：時間寬度為0.5秒；校正方式采用多點校正，校正色譜峰的匹配點為共有峰。

與現有技術相比，本發明的有益效果如下：

（1）將本發明所提供的方法建立的婦女痛經顆粒指紋圖譜與對照圖譜進行相似度評價，其相似度大于0.950，能有效的表征產品質量，有利于全面監控產品的質量。

（2）本發明采用高效液相建立標準指紋圖譜，通過多指標成分控制產品質量，能更有效的保證產品質量的長期穩定性，進而保障療效的安全性和有效性。

（3）本發明具有方便、快捷、穩定、精密度高、重現性好及適用范圍廣等優點，可準確可靠的控制婦女痛經顆粒的質量。

附圖說明

圖1 婦女痛經顆粒指紋圖譜。

圖2 10批次婦女痛經顆粒的指紋圖譜。

圖3 丹參藥材色譜圖。

圖4 延胡索藥材色譜圖。

具體實施方式

除非另有定義，本發明使用的所有技術和科學術語的含義與本發明所屬技術領域普通技術人員通常理解的含義相同。通常，本發明使用的命名及下述實驗方法都是本領域公知的或常用的。為了使本發明所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合具體實施例，對本發明作進一步的說明。

儀器：Waters高效液相色譜儀（Waters2695分離單元，Waters2996二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站）；AB104-N萬分之一天平（梅特勒-托利多）；AUW2200十萬分之一天平（SHIMADZU 島津）；KQ3200超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；Mili-Q超純水儀：（美國Milipore公司）。

試藥和試劑： 婦女痛經顆粒（批號：120301、120701、120702、120703、120801、120802、120803、120804、120805、120806）；甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、醋酸（分析純）。

實施例1：婦女痛經顆粒基于指紋圖譜的質量控制方法。

供試品溶液的制備：取婦女痛經顆粒5袋，研細，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量。搖勻，濾過，取續濾液，即得。

對照品溶液的制備：取延胡索乙素對照品、丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1ml含胡索乙素0.05mg和丹酚酸B 0.10mg的混合溶液，即得。

色譜條件為： ODS C18色譜柱，流動相A為甲醇-乙腈（1：1），流動相B為0.1%磷酸水溶液（用三乙胺調PH值=6.0），梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫25～35℃，檢測波長：280nm。

梯度洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行：

測定：精密吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到婦女痛經顆粒的指紋圖譜。

實施例2：婦女痛經顆粒指紋圖譜的建立。

采用實施例1 所述方法測定10個不同批次婦女痛經顆粒供試品溶液進行測定（批號：120301、120701、120702、120703、120801、120802、120803、120804、120805、120806））。

采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”2004年A版相似度軟件，對10批次婦女痛經顆粒進行相似度評價，得到10批次的婦女痛經顆粒相似度計算結果與婦女痛經顆粒指紋圖譜。

10批次婦女痛經顆粒指紋圖譜相似度計算結果

上表顯示，不同批次婦女痛經顆粒指紋圖譜的相似度大于0.95，說明各批次的樣品色譜模式相似，其化學成分一致性較好。