本發明涉及心胸疾病檢測技術領域，具體涉及一種縱隔惡性畸胎瘤檢測膠體金免疫層析試紙。
背景技術：
畸胎瘤是一種真實性腫瘤。有2個或3個胚層的幾種不同類型的組織構成，這些組織可由成熟的、非成熟的或混合型成分所組成。偶爾也可見由1個胚層組織成分占優勢，或由一種高度特異性的組織類型占絕對優勢而成。畸胎瘤最常發生于卵巢，但也可見于睪丸、腹膜后、骶尾部、縱隔等處，其他部位少見。畸胎瘤良性和惡性的比率與發生部位有關。在卵巢囊腫畸胎瘤中惡性僅占1％～3％，而在睪丸則占95％，除發生在性腺外，縱隔也是其好發部位，絕大多數位于前縱隔，尤其是前下縱隔，位于后縱隔者僅為3％～8％。X線檢查多為胸骨后方單發的塊狀陰影，畸胎瘤的特點是：①常見于青壯年；②良性畸胎瘤一般無明顯癥狀，常在胸部X線檢查時被發現，惡性者則可出現胸痛、刺激性咳嗽、呼吸困難等不適；③若腫瘤破裂穿入氣管或支氣管，則可咳出囊內容物(豆渣樣皮脂、毛發、牙齒等)，若穿破縱隔胸膜則出現胸腔積液，若穿破心包則可造成心臟壓塞；④若腫瘤巨大并突入一側胸腔，則會造成肺不張、上腔靜脈綜合征等；⑤X線檢查表現為塊影密度均勻不一，含脂肪組織部位密度明顯降低，部分囊壁可出現鈣化，甚至可出現骨或牙齒之陰影；⑥良性者腫瘤標志物檢測為陰性，惡性者則可出現AFP、LDH不同的陽性表現，可為判斷畸胎瘤惡化的標志。
目前，良性畸胎瘤可經手術切除腫瘤治療，但惡性畸胎瘤在就診時大部分病人有轉移無法切除，即使切除主要也是為了活檢以明確診斷，而且病人大多在半年內復發或轉移而死亡。臨床上，一般這種分期在Ⅱ～Ⅲ期的病人已有周圍組織侵犯和轉移，主要以非手術治療為主，目前多采用放療、化療，但療效不佳。所以對于惡性畸胎瘤若可以早診斷，早發現，早治療，才能避免病情的惡化。
技術實現要素：
本發明解決的技術問題就是提供一種縱隔惡性畸胎瘤檢測膠體金免疫層析試紙。
本發明的技術方案為：一種縱隔惡性畸胎瘤檢測膠體金免疫層析試紙，所述試紙由以下步驟制備而得：
(1)制備膠體金-AFP和膠體金-LDH抗體復合物：取膠體金溶液分成均等兩份，記為第一份、第二份，調節pH在6-8，將AFP單克隆抗體以1:130的體積比加入到第一份膠體金溶液中，將LDH單克隆抗體以1:150的體積比加入到第二份膠體金溶液中，震蕩使單克隆抗體與得以標記，再分別加入質量濃度為5％的胎牛血清，最后濃度分別為1.2％和1.5％，兩份溶液4℃下先低速離心10min，取上清液再高速離心50min處理，棄去上清液，將沉淀物用硼酸鹽緩沖液溶解離心2次，所得離心沉淀物溶解于硼酸鹽緩沖液中，溶解量使其達到原體積，再次離心后所得上清液濃縮成原體積的1/12，4℃下保存，即得到所述膠體金-AFP和膠體金-LDH抗體復合物。
(2)制備雙抗體夾心試紙：
a,制備結合墊：以玻璃纖維膜為材料，將其剪切成備選的規格，備用；
b，制備樣品吸收墊：將樣品吸收墊用PBS緩沖液浸泡12h，烘干備用；
c，硝酸纖維膜的制備：在硝酸纖維素膜上用滑膜儀依次在不同位置劃出檢測線1、檢測線2和質控線，所述檢測線1包被有膠體金-AFP抗體復合物，所述檢測線2包被有膠體金-LDH抗體復合物，所述質控線包被有羊抗兔單克隆抗體，備用；
d，試紙的組裝：將樣品吸收墊、結合墊、硝酸纖維膜、吸水墊依次粘貼在PVC底板上，40℃下干燥處理40min后切成2cm寬的試紙條。
進一步地，所述檢測線1上膠體金-AFP抗體復合物的包被濃度為3mg/mL，所述檢測線2上膠體金-LDH抗體復合物的包被濃度為3mg/mL，所述質控線羊抗兔單克隆抗體的包被濃度為3.5mg/mL。
進一步地，所述(2)中PBS緩沖液中，PBS濃度為0.02mol/L，還含有1.5-2.5％的BSA，2-2.5％的海藻糖，0.6-0.8％的PVP，可加快樣品區的層析緩釋作用。
進一步地，所述膠體金的直徑為30-40nm。
本發明的試紙使用方法：按臨床檢驗常規取血分離得到血清，用吸管吸取100-120ul血清滴加到制備的試紙的樣品吸收墊上，10分鐘左右判讀結果：如果檢測線1和質控線均有紅色顯示則判定AFP為陽性，反之為陰性；如果檢測線2和質控線均有紅色顯示則判定LDH為陽性，反之為陰性；如果質控線未見顯色反應，則判斷檢測無效。
本發明的有益效果體現在：本發明操作簡單，特異性強，靈敏度高，通過AFP和LDH雙抗體夾心法判斷畸胎瘤是否轉化為惡性，為畸胎瘤的診治提供重要的參考依據。
具體實施方式
實施例1：一種縱隔惡性畸胎瘤檢測膠體金免疫層析試紙，所述試紙由以下步驟制備而得：
(1)制備膠體金-AFP和膠體金-LDH抗體復合物：取膠體金溶液分成均等兩份，記為第一份、第二份，調節pH在6，將AFP單克隆抗體以1:130的體積比加入到第一份膠體金溶液中，將LDH單克隆抗體以1:150的體積比加入到第二份膠體金溶液中，震蕩使單克隆抗體與得以標記，再分別加入質量濃度為5％的胎牛血清，最后濃度分別為1.2％和1.5％，兩份溶液4℃下先低速離心10min，取上清液再高速離心50min處理，棄去上清液，將沉淀物用硼酸鹽緩沖液溶解離心2次，所得離心沉淀物溶解于硼酸鹽緩沖液中，溶解量使其達到原體積，再次離心后所得上清液濃縮成原體積的1/12，4℃下保存，即得到所述膠體金-AFP和膠體金-LDH抗體復合物。
(2)制備雙抗體夾心試紙：
a,制備結合墊：以玻璃纖維膜為材料，將其剪切成備選的規格，備用；
b，制備樣品吸收墊：將樣品吸收墊用PBS緩沖液浸泡12h，烘干備用；
c，硝酸纖維膜的制備：在硝酸纖維素膜上用滑膜儀依次在不同位置劃出檢測線1、檢測線2和質控線，所述檢測線1包被有膠體金-AFP抗體復合物，所述檢測線2包被有膠體金-LDH抗體復合物，所述質控線包被有羊抗兔單克隆抗體，備用；
d，試紙的組裝：將樣品吸收墊、結合墊、硝酸纖維膜、吸水墊依次粘貼在PVC底板上，40℃下干燥處理40min后切成2cm寬的試紙條。
其中，所述檢測線1上膠體金-AFP抗體復合物的包被濃度為3mg/mL，所述檢測線2上膠體金-LDH抗體復合物的包被濃度為3mg/mL，所述質控線羊抗兔單克隆抗體的包被濃度為3.5mg/mL；所述(2)中PBS緩沖液中，PBS濃度為0.02mol/L，還含有1.5％的BSA，2％的海藻糖，0.6％的PVP，可加快樣品區的層析緩釋作用；所述膠體金的直徑為30nm。
實施例2：一種縱隔惡性畸胎瘤檢測膠體金免疫層析試紙，所述試紙由以下步驟制備而得：
(1)制備膠體金-AFP和膠體金-LDH抗體復合物：取膠體金溶液分成均等兩份，記為第一份、第二份，調節pH在7，將AFP單克隆抗體以1:130的體積比加入到第一份膠體金溶液中，將LDH單克隆抗體以1:150的體積比加入到第二份膠體金溶液中，震蕩使單克隆抗體與得以標記，再分別加入質量濃度為5％的胎牛血清，最后濃度分別為1.2％和1.5％，兩份溶液4℃下先低速離心10min，取上清液再高速離心50min處理，棄去上清液，將沉淀物用硼酸鹽緩沖液溶解離心2次，所得離心沉淀物溶解于硼酸鹽緩沖液中，溶解量使其達到原體積，再次離心后所得上清液濃縮成原體積的1/12，4℃下保存，即得到所述膠體金-AFP和膠體金-LDH抗體復合物。
(2)制備雙抗體夾心試紙：
a,制備結合墊：以玻璃纖維膜為材料，將其剪切成備選的規格，備用；
b，制備樣品吸收墊：將樣品吸收墊用PBS緩沖液浸泡12h，烘干備用；
c，硝酸纖維膜的制備：在硝酸纖維素膜上用滑膜儀依次在不同位置劃出檢測線1、檢測線2和質控線，所述檢測線1包被有膠體金-AFP抗體復合物，所述檢測線2包被有膠體金-LDH抗體復合物，所述質控線包被有羊抗兔單克隆抗體，備用；
d，試紙的組裝：將樣品吸收墊、結合墊、硝酸纖維膜、吸水墊依次粘貼在PVC底板上，40℃下干燥處理40min后切成2cm寬的試紙條。
其中，所述檢測線1上膠體金-AFP抗體復合物的包被濃度為3mg/mL，所述檢測線2上膠體金-LDH抗體復合物的包被濃度為3mg/mL，所述質控線羊抗兔單克隆抗體的包被濃度為3.5mg/mL；所述(2)中PBS緩沖液中，PBS濃度為0.02mol/L，還含有2.0％的BSA，2.25％的海藻糖，0.7％的PVP，可加快樣品區的層析緩釋作用；所述膠體金的直徑為35nm。
實施例3：一種縱隔惡性畸胎瘤檢測膠體金免疫層析試紙，所述試紙由以下步驟制備而得：
(1)制備膠體金-AFP和膠體金-LDH抗體復合物：取膠體金溶液分成均等兩份，記為第一份、第二份，調節pH在8，將AFP單克隆抗體以1:130的體積比加入到第一份膠體金溶液中，將LDH單克隆抗體以1:150的體積比加入到第二份膠體金溶液中，震蕩使單克隆抗體與得以標記，再分別加入質量濃度為5％的胎牛血清，最后濃度分別為1.2％和1.5％，兩份溶液4℃下先低速離心10min，取上清液再高速離心50min處理，棄去上清液，將沉淀物用硼酸鹽緩沖液溶解離心2次，所得離心沉淀物溶解于硼酸鹽緩沖液中，溶解量使其達到原體積，再次離心后所得上清液濃縮成原體積的1/12，4℃下保存，即得到所述膠體金-AFP和膠體金-LDH抗體復合物。
(2)制備雙抗體夾心試紙：
a,制備結合墊：以玻璃纖維膜為材料，將其剪切成備選的規格，備用；
b，制備樣品吸收墊：將樣品吸收墊用PBS緩沖液浸泡12h，烘干備用；
c，硝酸纖維膜的制備：在硝酸纖維素膜上用滑膜儀依次在不同位置劃出檢測線1、檢測線2和質控線，所述檢測線1包被有膠體金-AFP抗體復合物，所述檢測線2包被有膠體金-LDH抗體復合物，所述質控線包被有羊抗兔單克隆抗體，備用；
d，試紙的組裝：將樣品吸收墊、結合墊、硝酸纖維膜、吸水墊依次粘貼在PVC底板上，40℃下干燥處理40min后切成2cm寬的試紙條。
其中，所述檢測線1上膠體金-AFP抗體復合物的包被濃度為3mg/mL，所述檢測線2上膠體金-LDH抗體復合物的包被濃度為3mg/mL，所述質控線羊抗兔單克隆抗體的包被濃度為3.5mg/mL；所述(2)中PBS緩沖液中，PBS濃度為0.02mol/L，還含有2.5％的BSA，2.5％的海藻糖，0.8％的PVP，可加快樣品區的層析緩釋作用；所述膠體金的直徑為40nm。
臨床統計試驗：
發明人收集40例惡性畸胎瘤患者，40例良性畸胎瘤患者，用本發明實施例2制備的試紙檢測，僅有1例良性畸胎瘤患者檢測無效，本發明靈敏度為97.5，特異性100％，表明本發明的檢測試紙條具有較高的靈敏度和特異性，適合臨床應用。
最后應說明的是：以上實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明實施例技術方案的精神和范圍。