本發明屬于藥品檢測領域,具體涉及一種用于同時快速測定低分子右旋糖酐氨基酸注射液中EDTA和NaHSO3含量的方法。
背景技術:
作為一種重要復方制劑,低分子右旋糖酐氨基酸注射液常用于治療兼有蛋白質缺乏的血容量減少患者。該注射液是由右旋糖酐40和包括色氨酸、亮氨酸、胱氨酸等11種氨基酸制成的滅菌水溶液,因所含色氨酸性質不穩定,在光照或遇氧化劑條件下易被氧化,故處方中加入了NaHSO3及EDTA。NaHSO3及EDTA是醫藥工業中常用的輔料,其中前者為抗氧化劑,后者則可與金屬離子形成穩定的水溶性絡合物,從而降低右旋糖酐40與金屬離子間的氧化反應,提高藥物的穩定性,同時還可以起到一定抗凝作用。但兩種輔料均具有一定毒害作用,即使微過量的NaHSO3也可使患者短時間內發生過敏反應,造成肝功能患者轉氨酶升高甚至肝壞死;同樣過量EDTA也會引起患者惡心、頭痛、尿急、血液凝固性降低甚至心臟停搏等不良反應。因此,對注射用藥物中NaHSO3及EDTA輔料的用量控制成為藥品質量控制的關鍵之一。
傳統上NaHSO3及EDTA的測定方法多采用電位滴定法,液相色譜法,預處理-滴定法等。其中電位滴定法選擇性差,靈敏度低,檢測限高;液相色譜法(如專利“一種酒中EDTA的LC-MS/MS正離子模式檢測方法”申請號為 CN201510606389.9、專利“一種洗衣液中EDTA的檢測方法”申請號為 CN201410537619.6)檢測耗時長、檢測成本高,且難以實現兩種輔料的快速同時檢測,不利于藥物生產企業的質量控制。離子色譜法(IC)具有操作簡便、靈敏度高、可同時測定多組分等優點,在醫藥食品及水質檢測行業中得到越來越廣泛的重視(如專利“一種離子色譜檢測常規離子的方法”申請號為 CN201410151366.9、專利“一種采用離子色譜檢測制藥廢水中磷霉素鈉的方法”申請號為 CN201310719495.9等)。已有研究人員采用離子色譜法檢測其他藥物中NaHSO3或EDTA含量的檢測(容彥華等.IC法測定卡絡磺鈉氯化鈉注射液中NaHSO3的含量.藥物分析雜志,2011,31(1):160-162;李恒等.離子色譜法測定氨甲環酸注射液中EDTA的含量.藥物分析雜志,2012 32(9):1684-1686)。
現有技術中通常是對注射液中的EDTA或是NaHSO3進行分別檢測,未能實現對兩種輔料成分的同時檢測。因為同時檢測,往往EDTA和SO32-峰形較差以及相鄰的Cl-峰及NO3-峰具有較強的干擾效應;此外,SO32-峰與氧化產生的少量SO42-峰保留時間非常接近,難以區分。所以現有技術通常是分別單獨測定兩種輔料。
至今為止,未見有同時檢測低分子右旋糖酐氨基酸注射液中EDTA和NaHSO3的含量的方法。開發一種檢測限低、快速精確、可實現兩種輔料同時檢測的方法,可大大提高工作效率,目前已成為藥品生產企業質控及藥品檢驗工作人員亟待解決的技術問題。
技術實現要素:
為解決現有技術的缺點和不足之處,本發明的目的在于提供一種同時快速測定注射液,特別是低分子右旋糖酐氨基酸注射液中的主要輔料成分-乙二胺四乙酸(EDTA)和亞硫酸氫鈉(NaHSO3)含量的方法。
本發明所采取的技術方案是:
一種同時快速測定注射液中EDTA和NaHSO3含量的方法,包括下列步驟:
1) 配制EDTA和NaHSO3的標準溶液;
2) 配制濃度為10-15mmol·L-1的KOH溶液為淋洗液;
3) 制作標準曲線:采用逐級稀釋的方法配制不同濃度的EDTA和NaHSO3標準梯度溶液,進行色譜進樣分析,得到EDTA的線性回歸方程為y=0.0395x-0.0327,線性相關系數 R=0.9990;NaHSO3的線性回歸方程為:y=0.1438x-0.3908,線性相關系數 R=0.9993;
4) 離子色譜檢測待測注射液樣本,并對色譜峰面積處理分析。
優選的,步驟2)中淋洗液KOH溶液的濃度為10mmol·L-1、11mmol·L-1、12mmol·L-1、13mmol·L-1、14mmol·L-1、或15mmol·L-1。
優選的,步驟3)中,EDTA標準梯度溶液的濃度分別為1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml。
優選的,EDTA在1.25-20.03μg·mL-1范圍內具有良好的線性關系,EDTA的檢測限濃度為0.1μg·mL-1,EDTA的回收率為99.4%~102.3%。
優選的,步驟3)中NaHSO3 標準梯度溶液的濃度分別為4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml。
優選的,NaHSO3在3.82-60.84μg·mL-1范圍內均具有良好的線性關系,NaHSO3的檢測限濃度為0.06μg·mL-1,NaHSO3的回收率為94.2%~96.6%。
優選的,步驟4)中離子色譜檢測時,采用抑制電導法,抑制電流為70mA;進樣量為25-50μL;柱溫為30℃~36℃。
優選的,所述注射液選自低分子右旋糖酐氨基酸注射液、卡絡磺鈉氯化鈉注射液、氨甲環酸注射液、鹽酸多巴酚丁胺注射液。
本發明的有益效果是:
本發明方法實現了首次對低分子右旋糖酐氨基酸注射液中的兩種最重要輔料成分的同時檢測,對于藥物生產企業而言可更快反映和監控產品質量,保證合格率;對于藥品監督檢驗環節而言可簡化檢測環節,提高檢測效率。
本發明檢測耗時短,儀器檢測10min內即可出峰,而預處理-滴定法等檢測時間至少在30min以上,且多需要預處理,操作繁瑣。
本發明對采用優化的淋洗液和配比,與傳統的Na2CO3+NaHCO3相比峰形分離度大大提高,克服了EDTA和SO32-峰形較差以及相鄰的Cl-峰及NO3-峰保等的強干擾效應;同時也克服了SO32-峰與由于氧化產生的少量SO42-峰保留時間也非常接近,區分難度較大的難題。
此外,本發明方法還可以用于其它的注射液比如卡絡磺鈉氯化鈉注射液、氨甲環酸注射液、鹽酸多巴酚丁胺注射液中EDTA和NaHSO3的檢測。本發明無需均任何前處理,簡單方便。
附圖說明
圖1為采用本發明方法對右旋糖酐氨基酸注射液中EDTA和NaHSO3的含量檢測的峰形圖。
具體實施方式
本發明實施例中所用的離子色譜條件如下:
(1)色譜柱及色譜條件
采用陰離子交換色譜柱AS11分析柱為 IonPac AS11-HC (4×250mm),Dionex公司;采用保護柱為IonPac AH11-HC (4×50mm),Dionex公司;
(2)淋洗條件
采用淋洗液條件為KOH溶液,濃度為10-15mmol·L-1;采用自動淋洗液罐EGCⅡ;采用抑制型電導檢測器為ASRS 400 4mm,抑制電流為70mA;配套自動進樣器采用AS40 Automated Sampler;進樣量為25-50μL;柱溫為35℃。
(3)儲備液、混合對照品溶液及供試品溶液的配置
對照品儲備液的配制:精密稱取EDTA對照品0.05059g置100ml量瓶中,加超純水溶解并稀釋至刻度,作為EDTA對照品儲備液1;再精密量取1ml至100ml量瓶中,加水稀釋至刻度。精密稱取NaHSO3對照品0.15990g,置100ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,作為NaHSO3對照品儲備液2。
混合對照品溶液的配制:分別精密量取對照品儲備液1、2各1ml至100ml量瓶中,用水定量稀釋制成每1ml中分別約含EDTA 5μg和NaHSO3 16μg的溶液作為混合對照品溶液。
供試品溶液的配制:精密量取本品1ml置50ml量瓶中,加水定容,經0.45μm微孔濾膜過濾即可制得。
制取的對照品、混合對照品及供試品宜密閉置于陰涼干燥處保存。
本發明實施例中所用的離子色譜條件如上所述。
下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述,但不限于此。
實施例1
采用某批藥物檢品進行檢測。
(1)方法線性
分別取EDTA 和NaHSO3對照品儲備液,分別精密量取0.5ml至200ml量瓶、0.5ml至100 ml量瓶、1ml至100 ml量瓶、2ml至100 ml量瓶、4 ml至100 ml量瓶;然后分別加水溶解、定量稀釋制成每1ml分別含EDTA 1.25μg、2.5μg、5μg、10μg、20μg,以及每1ml含NaHSO3 4μg、8μg、16μg、32μg、64μg的溶液,分別作為對照品溶液。
分別以EDTA和NaHSO3的峰面積對濃度進行線性回歸,得EDTA的線性方程為:y=0.0395x-0.0327(R=0.9990);NaHSO3的線性方程為:y=0.1438x-0.3908(R=0.9993)。結果表明,EDTA在1.25-20.03μg·mL-1范圍內、NaHSO3在3.82-60.84μg·mL-1范圍內均具有良好的線性關系。
(2)精密度試驗
取同批次供試品溶液,連續進樣6次,計算EDTA和NaHSO3峰面積的RSD分別為0.35%和0.53%。
(3)重復性試驗
取同批注射液6份,分別進樣,結果EDTA峰面積的RSD為1.46%、NaHSO3峰面積的RSD為0.89%。
(4)穩定性試驗
取同批次含量測定下的樣品,放置1、2、4、8、12、24和48h后測定,結果EDTA峰面積的RSD為1.49%、NaHSO3峰面積的RSD為0.87%,表明樣品在48 h內穩定。
(5)加樣回收率試驗
精密移取同批次樣品0.5ml至100ml量瓶中,共9份,平均分成三組,分別加入EDTA對照品儲備液和NaHSO3儲備液300μl、500μl、700μl。結果表明,EDTA的回收率為99.4-102.3%,平均回收率為100.8%,RSD為1.30% ;NaHSO3的回收率為94.2-96.6%,平均回收率為95.3%,RSD為0.93%。該方法測定低分子右旋糖酐氨基酸注射液中NaHSO3和EDTA的含量回收率較好。
(6)檢測限試驗
將EDTA和NaHSO3對照品儲備液按照比例定量稀釋,以信噪比(s/n=3)時,EDTA的檢測限濃度為0.1μg·mL-1,NaHSO3的檢測限濃度為0.06μg·mL-1。
圖1為采用本發明方法對右旋糖酐氨基酸注射液中EDTA和NaHSO3的含量檢測的峰形圖。
實施例2
采用實施例1方法(淋洗液KOH溶液的濃度為10mmol·L-1);對20批次某藥物生產企業的右旋糖酐氨基酸注射液產品進行檢驗,合格率為100%,且同批次樣品檢測結果誤差小于0.5%,滿足方法學要求。
實施例3
某藥物生產企業采用本發明方法(淋洗液KOH溶液的濃度為15mmol·L-1)連續對15個月的右旋糖酐氨基酸注射液產品質量進行檢驗,合格率為98%,該企業迅速就輔料添加等生產進行控制,及時對生產環節進行調整,避免了更大損失。通過調整后,合格率達到99.5%。
實施例4
采用實施例1方法(淋洗液KOH溶液的濃度為14mmol·L-1);對10批次某藥物生產企業的卡絡磺鈉氯化鈉注射液產品進行檢驗,合格率為100%,且同批次樣品檢測結果誤差小于0.5%,滿足方法學要求。
對比例1
根據黃惠玲等人的文章(黃惠玲, 王玉健, 卓海華,等. 食品中亞硫酸鹽的離子色譜法測定[J]. 分析試驗室, 2009, 28(8):15-18.)記載的方法,以8 mmol/L Na2CO3和2.5 mmol/L NaOH的混合溶液為淋洗液,檢測右旋糖酐氨基酸注射液產品中的EDTA和NaHSO3。
結果:離子色譜檢測所得到的EDTA和SO32-峰形較差,此外,待測峰與臨近峰(包括Cl-峰及NO3-峰)產生部分重疊,導致無法定量檢測。
對比例2
根據容彥華等人的文章(容彥華, 周桂榮, 單玉富,等. IC法測定卡絡磺鈉氯化鈉注射液中亞硫酸氫鈉的含量[J]. 藥物分析雜志, 2011(1):160-162.)記載的方法,以10 mmol/L Na2CO3+1 mmo/L NaHCO3混合溶液為淋洗液,流速1.0 mL/min,抑制型電導檢測器檢測,檢測右旋糖酐氨基酸注射液產品中的EDTA和NaHSO3。
結果:由于操作條件未能有效優化,導致峰形難以區分,無法進行積分,無法對待測組分進行定量。
上述實施例為本發明較佳的實施方式,但本發明的實施方式并不受上述實施例的限制,其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化,均應為等效的置換方式,都包含在本發明的保護范圍之內。