小清咽顆粒質(zhì)量檢查方法與流程

本發(fā)明涉及一種藥物質(zhì)量檢查方法，具體涉及一種用于急性咽炎及上呼吸道感染引起的咽喉疼痛的治療的小清咽顆粒質(zhì)量檢查方法。

背景技術(shù)：

小清咽顆粒一種用于急性咽炎及上呼吸道感染引起的咽喉疼痛的治療的藥物，具有滋陰潤(rùn)肺，消腫利咽之效。主要用于急性咽炎及上呼吸道感染引起的咽喉疼痛的治療，對(duì)內(nèi)、外諸邪侵犯咽喉，如外感，風(fēng)熱寒濕，溫邪時(shí)毒，內(nèi)傷飲食，辛辣煎煿，內(nèi)蘊(yùn)痰熱等搏結(jié)氣血、蘊(yùn)結(jié)成毒，引發(fā)的咽喉疾患，癥見咽喉紅腫疼痛，吞咽困難，廣泛潰爛，呼吸不利，咽癢咳嗽，聲音嘶啞，發(fā)熱惡寒等癥。

小清咽顆粒由以下數(shù)量份數(shù)的原料藥制成：桑葉390.6 g、板藍(lán)根390.6 g、射干260.4 g、玄參260.4 g、甘草260.4 g、薄荷素油 2.5 mL、可溶性淀粉 433~550 g；制成1000 g。

制法是：將處方五味飲片，加10倍量的水（第一次煎煮加水12.5倍），浸泡1小時(shí)，煎煮3次，每次0.5小時(shí)。合并煎液，濾過。濾液常壓濃縮至相對(duì)密度為1.35~1.40（60 ℃）的稠浸膏，至于80℃減壓干燥。干膏粉碎成細(xì)粉（過60目篩）與可溶性淀粉433~550 g混合均勻，95 %乙醇適量制軟材，14目篩制粒，60 ℃干燥，12目篩整粒，噴入薄荷素油2.5 mL，混勻，制成1000 g顆粒，分裝，即得。

目前沒有適用小清咽顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，為了保證制劑的穩(wěn)定性和療效，需要對(duì)該藥物的質(zhì)量檢測(cè)進(jìn)行研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題提供一種用于小清咽顆粒質(zhì)量檢查方法，以保證該小清咽顆粒的穩(wěn)定性和療效。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

小清咽顆粒質(zhì)量檢查方法，該小清咽顆粒1000g由以下數(shù)量份數(shù)的原料藥制成：桑葉390.6 g、板藍(lán)根390.6 g、射干260.4 g、玄參260.4 g、甘草260.4 g、薄荷素油 2.5 mL、可溶性淀粉 433~550 g；

其質(zhì)量檢測(cè)方法包括如下各項(xiàng)：

性狀：本品為顆粒劑，棕黃色至棕褐色，氣芳香，味微甘，略苦；

鑒別：采用薄層色譜法鑒別；

檢查：符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（《中國藥典》（通則0104））；

浸出物測(cè)定：包括稀乙醇浸出物含量測(cè)定；

含量測(cè)定：包括射干苷的含量測(cè)定。

其中，鑒別包括：

（1）取本發(fā)明制劑制備供試品溶液，取板藍(lán)根對(duì)照藥材制備對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，噴以茚三酮試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

（2）取本發(fā)明制劑制備供試品溶液，取射干對(duì)照藥材制備對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液分別點(diǎn)于同一硅膠GF₂₅₄薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

其中，浸出物測(cè)定按照如下步驟進(jìn)行：取供試品精密稱定，在錐形瓶中加稀乙醇，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)；放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取續(xù)濾液，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。

其中，射干苷的含量按照高效液相色譜法測(cè)定；以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1 %磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫；流速1 mL·min^-1；柱溫25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm。

通過以上方法，能夠制定出小清咽顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)小清咽顆粒的質(zhì)量檢測(cè)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，以該方法為標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)小清咽顆粒，可以很好的保證制劑的穩(wěn)定性，從而保證其療效。

附圖說明

圖1是小清咽顆粒中板藍(lán)根薄層鑒別1.陰性供試品（缺板藍(lán)根藥材）；2.板藍(lán)根對(duì)照藥材；3、4、5小清咽顆粒供試品（批號(hào)：20110201，20110202，20110203）；

圖2是小清咽顆粒中射干薄層鑒別1.陰性供試品（缺射干藥材）；2.射干對(duì)照藥材；3、4、5小清咽顆粒供試品（批號(hào)：20110201，20110202，20110203）；

圖3是小清咽顆粒中桑葉薄層鑒別1.陰性供試品（缺桑葉藥材）；2.桑葉對(duì)照藥材；3、4、5小清咽顆粒供試品（批號(hào)：20110201，20110202，20110203）；

圖4是小清咽顆粒中玄參薄層鑒別1.陰性供試品（缺玄參藥材）；2.玄參對(duì)照藥材；3、4、5小清咽顆粒供試品（批號(hào)：20110201，20110202，20110203）；

圖5是小清咽顆粒中甘草薄層鑒別1.陰性供試品（缺甘草藥材）；2.甘草對(duì)照藥材；3、4、5小清咽顆粒供試品（批號(hào)：20110201，20110202，20110203）；

圖6是小清咽顆粒中薄荷素油薄層鑒別1.陰性供試品（缺薄荷素油）；2.薄荷素油；3、4、5小清咽顆粒供試品（批號(hào)：20110201，20110202，20110203）；

圖7是高效液相色譜圖:A 射干苷對(duì)照品；

圖8是高效液相色譜圖:B 顆粒劑提取液；

圖9是陰性浸膏對(duì)照溶液色譜圖；

圖10是陰性顆粒溶液色譜圖；

圖11是射干苷線性關(guān)系考察試驗(yàn)結(jié)果；

圖12是顆粒劑中射干苷含量測(cè)定的精密度試驗(yàn)HPLC圖譜；

圖13是顆粒劑中射干苷含量測(cè)定的穩(wěn)定性試驗(yàn)HPLC圖譜；

圖14是顆粒劑中射干苷含量測(cè)定的重復(fù)性試驗(yàn)HPLC圖譜；

圖15是顆粒劑中射干苷含量測(cè)定的回收率試驗(yàn)HPLC圖譜上半部分；

圖16是顆粒劑中射干苷含量測(cè)定的回收率試驗(yàn)HPLC圖譜下半部分；

圖17是顆粒劑色譜圖(358 nm)；

圖18是蘆丁對(duì)照品色譜圖；

圖19是哈巴俄苷對(duì)照品疊加顆粒劑樣品色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

實(shí)施例1：

組方小清咽顆粒，由以下原料藥制成：桑葉 390.6 g、板藍(lán)根 390.6 g、射干 260.4 g 、玄參 260.4 g、甘草260.4 g、薄荷素油2.5 mL、可溶性淀粉433~550g，制成1000 g。

制法將處方五味飲片，加10倍量的水（第一次煎煮加水12.5倍），浸泡1小時(shí)，煎煮3次，每次0.5小時(shí)。合并煎液，濾過。濾液常壓濃縮至相對(duì)密度為1.35~1.40（60 ℃）的稠浸膏，至于80℃減壓干燥。干膏粉碎成細(xì)粉（過60目篩）與可溶性淀粉433~550 g混合均勻，95 %乙醇適量制軟材，14目篩制粒，60 ℃干燥，12目篩整粒，噴入薄荷素油2.5 mL，混勻，制成1000 g顆粒，分裝，即得。

性狀本品為顆粒劑，棕黃色至棕褐色，氣芳香，味微甘，略苦。

鑒別

（1）取本制劑0.5 g，加稀乙醇20 mL，加熱回流20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)酉∫掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取板藍(lán)根對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5~10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（19:5:5）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（2）取本制劑1 g，加甲醇10 mL，加熱回流30分鐘，濾過，濾液濃縮至1.5 mL，作為供試品溶液。另取射干對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF₂₅₄薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（8:2:0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

檢查應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（《中國藥典》（通則0104））。

浸出物測(cè)定

取供試品2 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。本品含稀乙醇浸出物含量不低于43 %。

含量測(cè)定

射干苷照《中國藥典》高效液相色譜法（通則0512）測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基鍵合硅膠為填充劑（依利特Hypersil BDS C₁₈（250 mm × 4.6 mm，5 μm））；以乙腈-0.1 %磷酸水溶液為流動(dòng)相（表1），梯度洗脫；流速1 mL·min^-1；柱溫25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm；理論板數(shù)按射干苷計(jì)算應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒定質(zhì)量的射干苷對(duì)照品10.56 mg，加50%甲醇適量溶解，定容至50 mL，配制成0.2112 mg·mL^-1的對(duì)照品溶液，即得。

供試品溶液的制備精密稱取小清咽顆粒1 g于錐形瓶中，加25 mL 50 %甲醇搖勻，靜置30 min，稱定重量，超聲提取60 min，補(bǔ)重，濾過。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

本品含射干苷不得少于0.22%。

功能主治滋陰潤(rùn)肺，消腫利咽之效。主要用于急性咽炎及上呼吸道感染引起的咽喉疼痛的治療，對(duì)內(nèi)、外諸邪侵犯咽喉，如外感，風(fēng)熱寒濕，溫邪時(shí)毒，內(nèi)傷飲食，辛辣煎煿，內(nèi)蘊(yùn)痰熱等搏結(jié)氣血、蘊(yùn)結(jié)成毒，引發(fā)的咽喉疾患，癥見咽喉紅腫疼痛，吞咽困難，廣泛潰爛，呼吸不利，咽癢咳嗽，聲音嘶啞，發(fā)熱惡寒等癥。

實(shí)施例2：

1.鑒別

本品由桑葉、板藍(lán)根等五味中藥材組成，經(jīng)提取、精制而成，成分較復(fù)雜。我們對(duì)各味中藥材的成分進(jìn)行了鑒別方法的試驗(yàn)研究，建立了板藍(lán)根、玄參、射干的薄層鑒別方法。

（1）板藍(lán)根的鑒別：取本制劑0.5 g，加稀乙醇20 mL，加熱回流20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)酉∫掖? mL使溶解，作為供試品溶液。取缺板藍(lán)根的陰性模擬制劑0.5 g，同法制備陰性對(duì)照溶液。另取板藍(lán)根對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5~10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（19:5:5）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。經(jīng)3批中試樣品驗(yàn)證，此方法重復(fù)性好，故將其收入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案正文（見圖1）。

（2）射干的鑒別：取本制劑1 g，加甲醇10 mL，加熱回流30分鐘，濾過，濾液濃縮至1.5 mL，作為供試品溶液。取缺射干的陰性模擬制劑1 g，同法制備陰性對(duì)照溶液。另取射干對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF₂₅₄薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（8:2:0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。經(jīng)3批中試樣品驗(yàn)證，此方法重復(fù)性好，故將其收入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案正文（見圖2）。

（3）桑葉的鑒別：取本制劑2 g，加石油醚（60~90℃）30 mL，加熱回流30分鐘，棄去石油醚液，藥渣揮干，加乙醇30 mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0 mL，置60℃水浴上攪拌使溶解，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取缺桑葉的陰性模擬制劑2 g，同法制備陰性對(duì)照溶液。另取桑葉對(duì)照藥材2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:2:1）的上層溶液為展開劑，置用展開劑預(yù)飽和10分鐘的展開缸內(nèi)，展開約至8 cm，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。因該方法重復(fù)性不佳，暫不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案（見圖3）。

（4）玄參的鑒別：取本制劑2 g，加甲醇25 mL，浸泡1小時(shí)，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取缺玄參的陰性模擬制劑2 g，同法制備陰性對(duì)照溶液。另取玄參對(duì)照藥材2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（12:4:1）的下層溶液為展開劑，置用展開劑預(yù)飽和15分鐘的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以5 %香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。因該方法重復(fù)性不佳，暫不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案（見圖4）。

（5）甘草的鑒別：取本制劑5 g，加正丁醇25 mL，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取缺甘草的陰性模擬制劑5 g，同法制備陰性對(duì)照溶液。另取甘草對(duì)照藥材5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5~10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15:1:1:2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。因該方法重復(fù)性不佳，暫不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案（見圖5）。

（6）薄荷素油的鑒別：取本制劑1 g，加無水乙醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。取缺薄荷素油的陰性模擬制劑1 g，同法制備陰性對(duì)照溶液。另取薄荷素油 0.1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國藥典》薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5~10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF₂₅₄薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-（19:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。因該方法重復(fù)性不佳，暫不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案（見圖6）。

浸出物測(cè)定

參考小清咽顆粒組成中藥飲片在《中國藥典》中的相關(guān)藥材浸出物的溶劑選擇，結(jié)合小清咽顆粒組成藥材所含化學(xué)成分特性（主要為甾體類、三萜類、黃酮類、吲哚類生物堿等），綜合考慮選擇稀乙醇作為小清咽顆粒的醇浸出物溶劑。

測(cè)定方法

取供試品2 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。計(jì)算公式如下：

2.2通過對(duì)小清咽顆粒8個(gè)批次的的樣品進(jìn)行醇溶性浸出物測(cè)定，如下表所示，結(jié)果表明：其醇溶性浸出物平均含量為54.0%。以其醇溶性浸出物平均含量下浮20%為低限，質(zhì)量檢測(cè)應(yīng)當(dāng)要求小清咽顆粒的醇溶性浸出物的含量不低于43.2%。

含量測(cè)定

3.1材料

3.1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），安捷倫液相色譜系統(tǒng)化學(xué)工作站； AG135型電子天平（萬分之一，瑞士Mettler-Toledo公司）；CSF-1B超聲波清洗儀（上海超聲波儀器廠）；DZ-2BC II真空干燥器。

試劑

甲醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，色譜純）；磷酸（遵義師范學(xué)院化學(xué)試劑廠）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；其余試劑均為分析純。

對(duì)照品

射干苷對(duì)照品(中國生物制品檢定所，批號(hào)111632-200501) ；蘆丁(中國生物制品檢定所，批號(hào)：100080-200707)。

制劑樣品

小清咽顆粒由于貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部制劑室生產(chǎn)。

方法與結(jié)果

3.2.1 色譜條件

依利特Hypersil BDS C₁₈（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈-0.1 %磷酸水溶液，梯度洗脫；柱溫25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm；進(jìn)樣量5 μL。結(jié)果表明，在此條件下能達(dá)到較好的分離效果，分離度大于1.5，拖尾因子為0.95。流動(dòng)相梯度見表1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖7，圖8、圖9和圖10。

對(duì)照品溶液制備

精密稱取燥至恒定質(zhì)量的射干苷對(duì)照品10.56 mg，加50 %甲醇適量溶解，定容至50 mL，配制成0.2112 mg/mL的對(duì)照品溶液，即得。

供試品的制備

精密稱取浸膏粉及射干飲片各1g于錐形瓶中，加 25 mL 50 %甲醇搖勻，靜置30 min，稱定重量，超聲提取60 min，補(bǔ)重，濾過。

空白試驗(yàn)

取缺射干的陰性樣品1 g，按“3.2.3”項(xiàng)下制備陰性對(duì)照溶液，按含量測(cè)定方法試驗(yàn)，陰性樣品的HPLC 圖譜中，未呈現(xiàn)與射干苷對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰，表明本法專屬性良好。

射干苷測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積按外標(biāo)法計(jì)算。

方法學(xué)考察

3.2.6.1 線性關(guān)系考察

精密吸取射干苷對(duì)照品溶液，配制系列濃度對(duì)照品溶液。即42.24，84.48，126.72，168.96，211.20ug·mL^-1，照“3.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，分別重復(fù)進(jìn)樣3次，以峰面積平均值（A）對(duì)進(jìn)樣量（X）作線性回歸，得回歸方程為：Y=4147.19044X+5.142816，r = 0.99989。結(jié)果表明，射干苷進(jìn)樣量在42.24~211.20 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，見表3，圖11。

精密度試驗(yàn)

精密吸取同一濃度射干苷對(duì)照品溶液5 μL，照“3.2.3”項(xiàng)下色譜條件，注入高效液色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。RSD為0.49%，結(jié)果表明，儀器精密度良好，見表4，圖12。

穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一浸膏粉約1 g，精密稱定，照“3.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“3.2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0，2，4，6，8，10，12 h 進(jìn)樣測(cè)定，每次進(jìn)樣5 μL，計(jì)算射干苷峰面積的RSD為0.36%，結(jié)果表明，小清咽顆粒劑供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定，見表5，圖13。

重復(fù)性試驗(yàn)

取顆粒劑6份，每份約1 g，精密稱定，照“3.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“3.2.1”項(xiàng)下色譜條件依法測(cè)定，計(jì)算射干苷含量的RSD為0.83%，結(jié)果表明，本法測(cè)定的重復(fù)性良好，見表6，圖14。

加樣回收率試驗(yàn)

取已測(cè)定含量的小清咽顆粒9份，每份約1 g，精密稱定，分別加0.8，1.0，1.2倍量射干苷對(duì)照品，照“3.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“3.2.1”項(xiàng)下色譜條件依法測(cè)定，計(jì)算射干苷平均回收率分別為103.4%，99.60%，100.2%，RSD分別為 1.9%，1.6%，2.5%，結(jié)果表明，本法測(cè)定準(zhǔn)確度較高，見表7，圖15、圖16。

水煎煮工藝含量測(cè)定指標(biāo)選擇

本處方由桑葉、射干、玄參等組成，其中桑為君藥，均占處方的39.06%，射干占26.06%。最初嘗試選用桑葉中蘆丁，玄參中哈巴俄苷為測(cè)量指標(biāo)，結(jié)果其中含量低于萬分之一，均不能作為質(zhì)量控制指標(biāo)，因此最終確定射干苷為質(zhì)量控制指標(biāo)（見圖17，圖18，圖19）。

色譜條件的選擇

3.4.1 色譜柱的選擇

分別采用了：依利特Hypersil BDS C₁₈（250 mm × 4.6 mm，5 μm）和Agilent SB-C₁₈（250 mm × 4.6 mm，5 μm）色譜柱進(jìn)行分析試驗(yàn)，結(jié)果表明依利特Hypersil BDS C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱分離效果最好，故選擇該色譜柱。

流動(dòng)相的選擇

分別采用了乙腈-0.03%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果表明流動(dòng)相為時(shí)，色譜峰分離效果及色譜峰形較好，故選擇乙腈-0.1%磷酸水溶液作為流動(dòng)相。

柱溫考察

分別采用25℃和30℃柱溫進(jìn)行分析，25℃的柱溫所得的分離效果最好，故選擇25℃作為色譜柱溫度。

供試品提取條件的選擇

3.5.1提取溶劑的選擇

分別采用了甲醇、50%甲醇、70%乙醇作為提取溶劑，超聲提取30 min、45 min、60 min。結(jié)果表明以50%甲醇超聲提取含量最高，故選擇50%甲醇作為提取溶劑。

提取方式的選擇

用50%甲醇，分別采用回流提取60 min，超聲提取60 min。結(jié)果表明以超聲提取60 min供試品溶液，故選擇超聲提取60 min。

提取時(shí)間的選擇

用50%甲醇，分別比較了超聲提取30 min、45 min和60 min。超聲提取60 min射干苷含量較高，且峰形較好，故選擇超聲提取60 min。

當(dāng)然，以上只是發(fā)明的具體應(yīng)用范例，本發(fā)明還有其他的實(shí)施方式，凡采用等同替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。