一種采用氣相色譜質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定果蔬中氯吡脲、2，4?D、多效唑殘留量的方法與流程

本發(fā)明涉及果蔬殘留化學(xué)物質(zhì)檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體為一種采用氣相色譜質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定果蔬中氯吡脲、2，4-D、多效唑殘留量的方法。
背景技術(shù)：
：咸植物生長調(diào)節(jié)劑是用于調(diào)節(jié)植物生長、發(fā)育的一類物質(zhì)，它的應(yīng)用能保障農(nóng)作物穩(wěn)產(chǎn)、改進(jìn)農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)，而且能增強(qiáng)作物的抗逆性，使農(nóng)業(yè)生產(chǎn)省工省時(shí)、節(jié)本增效。在我國黃瓜種植登記允許使用的品種有噻苯隆、氯吡脲、核苷酸、蕓薹素內(nèi)酯、復(fù)硝酚鈉、萘乙酸、吲哚丁酸、2，4-滴、多效唑等，主要作用是促進(jìn)雌花生長、提高座果率、抗擊病蟲害等，其中氯吡脲即為俗稱的“膨大劑”，化學(xué)名稱為l-(2-氯-4-吡啶)-3-苯基脲，具有促進(jìn)坐果，使果實(shí)膨大的功效；2，4-滴通常高濃度時(shí)作為一種效果顯著的除草劑被廣泛使用，低濃度時(shí)則作為植物生長調(diào)節(jié)劑用于瓜果蔬菜種植，以提高?；?、保果率；多效唑作為一種植物生長調(diào)節(jié)劑可抑制赤霉素的生物合成，控制植株的過量營養(yǎng)生長，以利于成花、坐果。隨著人們生活水平的日益提高以及對(duì)農(nóng)產(chǎn)品有機(jī)生產(chǎn)的逐漸重視，對(duì)日常食用食品的安全性也將提出更高要求，因此建立一套有效的檢測(cè)果蔬中氯吡脲、2，4-滴、多效唑的殘留量的方法具有突出的社會(huì)意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供了一種采用氣相色譜質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定果蔬中氯吡脲、2，4-D、多效唑殘留量的方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：一種采用氣相色譜質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定果蔬中氯吡脲、2，4-D、多效唑殘留量的方法，其制備步驟如下：步驟A:制備標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮溶解成以下濃度：2，4-D濃度為1000ug/mL，氯吡脲濃度為400ug/mL，多效唑濃度為400ug/mL；步驟B:混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別移取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量配制3種標(biāo)準(zhǔn)液的混標(biāo)工作液系列，稀釋混合標(biāo)液為0.04-10ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液系列；步驟C:樣品提取，稱取絞碎均勻樣品10g于50mL塑料離心管中，加入提取劑，勻漿2min后，加入氯化鈉和無水硫酸鎂，充分振搖，靜置后放入離心機(jī)離心分離，移取上清液5.0mL于試管中，用氮?dú)獯蹈?，?mL丙酮溶解殘?jiān)⒌玫酱齼艋?；步驟D:凈化，用5：95的丙酮：正己烷混合液5mL預(yù)淋洗弗羅里硅土柱，棄去；將待凈化液轉(zhuǎn)移至小柱，并用5：95的丙酮：正己烷混合液10mL淋洗液分多次洗滌試管，并轉(zhuǎn)移至小柱，收集淋洗液，再用30：70的丙酮：正己烷混合液10mL淋洗液淋洗小柱，合并淋洗液，用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器濃縮近干，用丙酮將濃縮液轉(zhuǎn)移定容至2mL，經(jīng)0.45um濾膜過濾并得到待分析液；步驟E：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀聯(lián)用分析，對(duì)含有2,4-D、氯吡脲、多效唑的待分析液和系列標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行色譜和質(zhì)譜檢測(cè)分析；步驟F：結(jié)果計(jì)算和分析，以2,4-D、氯吡脲、多效唑的質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)Y，以對(duì)應(yīng)的峰面積為橫坐標(biāo)X，進(jìn)行線性回歸制圖并獲得曲線Y=KX的線性方程，線性濃度范圍為0.04-10ug/mL，按照信噪比3倍，以實(shí)際稱取樣品10.00g，10mL乙腈提取，取5.0mL提取液過弗羅里硅土柱，淋洗液最終定容至2mL；計(jì)算檢出限，線性方程Y=KX、相關(guān)系數(shù)K及檢出限。在本發(fā)明的上述方法中，上述提取劑為10.0mL的乙腈，上述氯化鈉為1g、無水硫酸鎂為5g。在本發(fā)明的上述方法中，在上述氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀聯(lián)用分析中，色譜條件為：色譜柱：HP-5MS，30m×250um×0.25um；柱溫：初溫100℃，停留2min，以10℃/min升至180℃，再以5℃/min升至260℃，停留2min，后運(yùn)行溫度280℃，停留5min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：280℃；載氣：高純氦氣，流速1.2mL/min；進(jìn)樣量：2μL；不分流。在本發(fā)明的上述方法中，質(zhì)譜條件為：離子源溫度：230℃，傳輸線溫度：280℃；電子轟擊電離源（EI），電子能量70eV，選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）方式，溶劑延遲4.5min，2，4-D以m/z154為定量離子，m/z119、m/z91位特征離子峰；氯吡脲以m/z128為定量離子，m/z93、m/z66位特征離子峰；多效唑以m/z236為定量離子，m/z125、m/z167位特征離子峰。在本發(fā)明的上述方法中，X=c*V*V1/(V2*m)，式中：X——樣品中各氯吡脲、2，4-D、多效唑的含量,單位：mg；C——實(shí)測(cè)樣中氯吡脲、2，4-D、多效唑的質(zhì)量濃度，單位：ug/mL；V1---提取劑的體積，單位：mL；V2——分取提取液用于凈化的體積，單位：mL；V——凈化濃縮后定容體積，單位：mL；m——稱取樣品的質(zhì)量，單位：g。有益效果本發(fā)明提供一種采用氣相色譜質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定果蔬中氯吡脲、2，4-D、多效唑殘留量的方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：1.本發(fā)明一次性同時(shí)測(cè)量氯吡脲、2，4-D、多效唑三種物質(zhì)，操作檢測(cè)快速，一次檢測(cè)多種不同物質(zhì)，且檢測(cè)的有效性高。2.本發(fā)明在0.04-10ug/mL濃度范圍內(nèi)，線性良好，方法的回收率在85.7-95.9%，精密度結(jié)果RSD值均小于10.0%，滿足實(shí)驗(yàn)和日常監(jiān)測(cè)要求。3.本發(fā)明利用乙腈將目標(biāo)物提取出來，利用氯化鈉和無水硫酸鎂降低目標(biāo)物在水中的溶解度，促進(jìn)乙腈層與水的分離，利用弗羅里硅土柱除去色素等雜質(zhì)，減少雜質(zhì)的干擾，有效提高果蔬中2,4-D、氯吡脲、多效唑含量的測(cè)定的精度。4.本發(fā)明對(duì)2,4-D、氯吡脲、多效唑的測(cè)定重復(fù)性良好，其RSD值均小于10.0%。5.本發(fā)明使用混合洗脫液，綜合考慮洗脫液為先用10mL5%丙酮-正己烷洗脫再用10mL30%丙酮-正己烷洗脫，合并兩次的洗脫液，其洗脫效果更佳。本發(fā)明選擇乙腈作為提取劑，其提取回收率較好，且提取的雜質(zhì)較少。附圖說明圖1為2,4-D的全掃描質(zhì)譜圖。圖2為2,4-D的計(jì)數(shù)質(zhì)譜圖。圖3為2,4-D的相對(duì)豐度質(zhì)譜圖。圖4為氯吡脲的全掃描質(zhì)譜圖。圖5為氯吡脲的計(jì)數(shù)質(zhì)譜圖。圖6為氯吡脲的相對(duì)豐度質(zhì)譜圖。圖7為多效唑的全掃描質(zhì)譜圖。圖8為多效唑的計(jì)數(shù)質(zhì)譜圖。圖9為多效唑的相對(duì)豐度質(zhì)譜圖。圖10為2,4-D、氯吡脲、多效唑標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。圖11為草莓樣本添加標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。具體實(shí)施方式在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似推廣，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實(shí)施例的限制。下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式做進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1一種采用氣相色譜質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定果蔬中氯吡脲、2，4-D、多效唑殘留量的方法，其制備步驟如下：步驟A:制備標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮溶解成以下濃度：2，4-D濃度為1000ug/mL，氯吡脲濃度為400ug/mL，多效唑濃度為400ug/mL。步驟B:混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別移取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量配制3種標(biāo)準(zhǔn)液的混標(biāo)工作液系列，稀釋混合標(biāo)液為0.04-10ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液系列。步驟C:樣品提取，稱取絞碎均勻樣品10g于50mL塑料離心管中，加入提取劑，勻漿2min后，加入氯化鈉和無水硫酸鎂，充分振搖，靜置后放入離心機(jī)離心分離，移取上清液5.0mL于試管中，用氮?dú)獯蹈桑?mL丙酮溶解殘?jiān)⒌玫酱齼艋?。所述提取劑?0.0mL的乙腈，所述氯化鈉為1g、無水硫酸鎂為5g。步驟D:凈化，用體積比為5：95的丙酮：正己烷混合液5mL預(yù)淋洗弗羅里硅土柱，棄去；將待凈化液轉(zhuǎn)移至小柱，并用體積比為5：95的丙酮：正己烷混合液10mL淋洗液分多次洗滌試管，并轉(zhuǎn)移至小柱，收集淋洗液，再用體積比為30：70的丙酮：正己烷混合液10mL淋洗液淋洗小柱，合并淋洗液，用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器濃縮近干，用丙酮將濃縮液轉(zhuǎn)移定容至2mL，經(jīng)0.45um濾膜過濾并得到待分析液。步驟E：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀聯(lián)用分析，對(duì)含有2,4-D、氯吡脲、多效唑的待分析液和系列標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行色譜和質(zhì)譜檢測(cè)分析。步驟F：結(jié)果計(jì)算和分析，以2,4-D、氯吡脲、多效唑的質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)Y，以對(duì)應(yīng)的峰面積為橫坐標(biāo)X，進(jìn)行線性回歸制圖并繪制曲線Y=KX的線性方程，線性濃度范圍為0.04-10ug/mL，按照信噪比3倍，以實(shí)際稱取樣品10.00g，10mL乙腈提取，取5.0mL提取液過弗羅里硅土柱，淋洗液最終定容至2mL；計(jì)算檢出限，線性方程、相關(guān)系數(shù)K及檢出限。X=c*V*V1/(V2*m)，式中：X——樣品中各氯吡脲、2，4-D、多效唑的含量,單位：mg；C——實(shí)測(cè)樣中氯吡脲、2，4-D、多效唑的質(zhì)量濃度，單位：ug/mL；V1---提取劑的體積，單位：mL；V2——分取提取液用于凈化的體積，單位：mL；V——凈化濃縮后定容體積，單位：mL；m——稱取樣品的質(zhì)量，單位：g。在所述氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀聯(lián)用分析中，色譜條件為：色譜柱：HP-5MS，30m×250um×0.25um；柱溫：初溫100℃，停留2min，以10℃/min升至180℃，再以5℃/min升至260℃，停留2min，后運(yùn)行溫度280℃，停留5min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：280℃；載氣：高純氦氣，流速1.2mL/min；進(jìn)樣量：2μL；不分流；在所述氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀聯(lián)用分析中，質(zhì)譜條件為：離子源溫度：230℃，傳輸線溫度：280℃；電子轟擊電離源（EI），電子能量70eV，選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）方式，溶劑延遲4.5min，2，4-D以m/z154為定量離子，m/z119、m/z91位特征離子峰；氯吡脲以m/z128為定量離子，m/z93、m/z66位特征離子峰；多效唑以m/z236為定量離子，m/z125、m/z167位特征離子峰。實(shí)施例2在本實(shí)施例中，結(jié)合實(shí)施例1中實(shí)驗(yàn)方法，具體實(shí)驗(yàn)過程如下：2.1試劑和材料除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水。乙腈、正己烷、丙酮、乙酸乙酯、氯吡脲、2，4-滴、多效唑標(biāo)準(zhǔn)品：Dr.Ehrenstorfer提供。氯吡脲、2，4-滴、多效唑標(biāo)準(zhǔn)溶液：標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮溶解成以下濃度：2，4-滴濃度為1000ug/mL，氯吡脲濃度為400ug/mL，多效唑濃度為400ug/mL。混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別移取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量配制3種標(biāo)準(zhǔn)液的混標(biāo)工作液系列。稀釋混合標(biāo)液為0.04-10ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液系列。儀器和設(shè)備氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：7890/7000GCQQQ,美國安捷倫公司。分析天平：感量為0.0001g和0.01g。氮吹儀。旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器2.3樣品處理2.3.1提取稱取絞碎均勻樣品10g（精確到0.01g）于50mL塑料離心管中，準(zhǔn)確加入10.0mL乙腈，勻漿2min后，分別加入1g氯化鈉和5g無水硫酸鎂，充分振搖，靜置后放入離心機(jī)離心。移取上清液5.0mL于試管中，用氮?dú)獯蹈桑?mL丙酮溶解殘?jiān)?，備凈化。凈化?mL丙酮：正己烷（5：95）預(yù)淋洗弗羅里硅土柱，棄去；將待凈化液轉(zhuǎn)移至小柱，并用10mL丙酮：正己烷（5：95）淋洗液分多次洗滌試管，并轉(zhuǎn)移至小柱，收集淋洗液，再用10mL丙酮：正己烷（30：70）淋洗液淋洗小柱，合并淋洗液，用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器濃縮近干，用丙酮將濃縮液轉(zhuǎn)移定容至2mL，經(jīng)0.45um濾膜過濾，供分析。儀器分析條件2.4.1色譜條件色譜柱：HP-5MS，30m×250um×0.25um；柱溫：初溫100℃，停留2min，以10℃/min升至180℃，再以5℃/min升至260℃，停留2min，后運(yùn)行溫度280℃，停留5min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：280℃；載氣：高純氦氣，流速1.2mL/min；進(jìn)樣量：2μL；不分流。質(zhì)譜條件離子源溫度：230℃，傳輸線溫度：280℃；電子轟擊電離源（EI），電子能量70eV，選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）方式，溶劑延遲4.5min，2，4-滴以m/z154為定量離子，m/z119、m/z91位特征離子峰；氯吡脲以m/z128為定量離子，m/z93、m/z66位特征離子峰；多效唑以m/z236為定量離子，m/z125、m/z167位特征離子峰。實(shí)施例3結(jié)合實(shí)施例1和實(shí)施例2，對(duì)實(shí)施例2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論和分析如下：3.1色譜條件的優(yōu)化通過比較摸索發(fā)現(xiàn)氯吡脲、2，4-滴、多效唑在DB-1701及HP-5色譜柱上均能被分離，但在DB-1701上，2,4-滴的峰形有鼓包，響應(yīng)偏小，綜合考慮在HP-5（30m×250um×0.25um）分離效果較好，峰形相對(duì)較好，對(duì)稱性好。根據(jù)全掃描分別確定了2,4-D、氯吡脲、多效唑的選擇碎片離子見圖1-3，其中2，4-滴以m/z154為基峰，m/z119、m/z91位特征離子峰；氯吡脲以m/z128為基峰，m/z93、m/z66位特征離子峰；多效唑以m/z236為基峰，m/z125、m/z167位特征離子峰?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)色譜（SIM）及草莓樣本添加標(biāo)準(zhǔn)色譜圖分別見圖4、圖5。樣品預(yù)處理?xiàng)l件的優(yōu)化3.2.1提取劑的選擇比較了乙腈、丙酮：乙酸乙酯（20:80）的提取效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用乙腈提取回收率較好，且提取的雜質(zhì)較少。因此選用乙腈作為提取劑。洗脫劑的選擇比較了5%丙酮-正己烷、10%丙酮-正己烷、15%丙酮-正己烷、20%丙酮-正己烷、30%丙酮-正己烷的洗脫效果，發(fā)現(xiàn)2,4-D用5%丙酮-正己烷洗脫效果最好，洗脫液用量10mL就能將98%以上的2,4-D洗脫下來，但是洗脫氯吡脲、多效唑的效果不明顯，而用10mL30%丙酮-正己烷就能將二者完全洗脫下來，因此，綜合考慮洗脫液為先用10mL5%丙酮-正己烷洗脫再用10mL30%丙酮-正己烷洗脫，合并兩次的洗脫液。線性關(guān)系和檢出限以2,4-D、氯吡脲、多效唑的質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的峰面積為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，線性濃度范圍為0.04-10ug/mL。按照信噪比3倍，以實(shí)際稱取樣品10.00g，10mL乙腈提取，取5.0mL提取液過弗羅里硅土柱，淋洗液最終定容至2mL計(jì)算檢出限，線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見表1.由表1可見本方法線性良好，檢測(cè)限滿足果蔬中2,4-D、氯吡脲、多效唑日常監(jiān)測(cè)要求。表1標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程及方法檢出限3.4精密度和回收率按本實(shí)驗(yàn)方法操作，在某草莓樣品中添加混合標(biāo)準(zhǔn)工作液并分別進(jìn)行6次平行測(cè)定,測(cè)得樣品中2,4-D、氯吡脲、多效唑含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和回收率結(jié)果見表2。由表可以看出，2,4-D、氯吡脲、多效唑的測(cè)定重復(fù)性良好，其RSD值均小于10.0%，回收率也在85.7-95.9%之間。表2精密度和回收率試驗(yàn)（n=6）名稱RSD（%）平均回收率（%）2,4-D8.685.7氯吡脲7.690.4多效唑4.395.93.5實(shí)際樣品測(cè)定選取了市售的10種新鮮果蔬進(jìn)行2,4-D、氯吡脲、多效唑的含量測(cè)定，發(fā)現(xiàn)結(jié)果如表3，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在草莓和西瓜樣品有檢出氯吡脲，社會(huì)上傳言此類水果廣泛使用膨大劑氯吡脲得到了部分證實(shí)，正常使用狀態(tài)下，使用氯吡脲可以促進(jìn)果實(shí)增大、早產(chǎn)、提高產(chǎn)量，過量使用會(huì)導(dǎo)致果型畸形、裂果等現(xiàn)象，目前沒有明確的科學(xué)依據(jù)證明氯吡脲對(duì)人體健康產(chǎn)生明顯危害，國外曾做的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明氯吡脲對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的GTP組裝有影響，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也表明，長期使用氯吡脲對(duì)大鼠的腎臟有影響，會(huì)導(dǎo)致體重下降，對(duì)兔子的皮膚、眼睛有輕微刺激。表3實(shí)際樣品中2,4-D、氯吡脲、多效唑的含量名稱2,4-D(mg/kg)氯吡脲(mg/kg)多效唑(mg/kg)草莓N.D0.22N.D西瓜N.D0.12N.D獼猴桃N.DN.DN.D梨N.DN.DN.D蘋果N.DN.DN.D黃瓜N.DN.DN.D菠菜N.DN.DN.D辣椒N.DN.DN.D西紅柿N.DN.DN.D西葫蘆N.DN.DN.D4結(jié)論通過以上驗(yàn)證，得出本方法在0.04-10ug/mL濃度范圍內(nèi)，線性良好，方法的回收率在85.7-95.9%，精密度結(jié)果RSD值均小于10.0%，滿足實(shí)驗(yàn)要求，實(shí)驗(yàn)中利用乙腈將目標(biāo)物提取出來，利用氯化鈉和無水硫酸鎂降低目標(biāo)物在水中的溶解度，促進(jìn)乙腈層與水的分離，利用弗羅里硅土柱除去色素等雜質(zhì)，實(shí)驗(yàn)證明本方法適用于果蔬中2,4-D、氯吡脲、多效唑含量的測(cè)定。本發(fā)明雖然以較佳實(shí)施例公開如上，但其并不是用來限定本發(fā)明，任何本領(lǐng)域技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可以做出可能的變動(dòng)和修改，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以本發(fā)明權(quán)利要求所界定的范圍為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁1 2 3