閉塞性動脈病的診斷的制作方法

本發明涉及用于診斷或預測諸如冠狀動脈疾病等閉塞性動脈病的標記物。

背景技術：

閉塞性動脈病由一組以動脈狹窄為特征的病理現象組成。該狹窄可影響各類動脈，尤其是冠狀動脈、腦動脈、下肢動脈。閉塞性動脈病的最常見類型是冠狀動脈疾病。

冠狀動脈疾病(cad)是心臟病的主要類型，并且是心臟病的主要原因。cad還是世界上主要的死因之一。cad是由沿著心臟動脈內壁積累的斑塊所引起的，積累的斑塊使動脈變窄并使流向心臟的血液減少。患有cad的大多數個體在首次出現癥狀(大部分情況是心臟病)之前，幾十年沒有出現任何疾病的跡象，但隨著疾病的發展最終會發病。

腺苷是一種內源性嘌呤核苷，其由三磷酸腺苷(atp)水解產生并在缺血期間釋放到細胞外間隙中(sollevietal.,1986；paganellietal.,2000)。它通過四類g蛋白偶聯受體，即a1、a2a、a2b和a3受體發揮各種生理作用。腺苷通過激活腺苷a2a受體(a2ar)，是增加冠狀動脈血流量的冠狀血管擴張劑(olsson,1990；shryocketal.,1997)。

a2ar和較小程度的a2br參與缺血誘導的冠狀動脈血管舒張(eckleetal.,2007,berwicketal.,2012,sanjanietal.,2011)。在實驗性冠狀動脈反應性充血期間，腺苷以劑量依賴性方式將冠狀動脈血流量增加高達3倍(berwicketal.,2012)。這種血管舒張經由a2ar發生，并涉及kv和katp通道(berwicketal.,2012)。

因此，這樣的冠狀動脈血管舒張構成了對血氧不足或缺血期間發生o2供應下降的適應性反應(grenzetal.,2011；hedegaardetal.,2014)。在運動壓力測試期間，心肌o2需求增加，這可能導致cad患者缺血。

deharoetal.(2012)報道了低a2ar表達與低腺苷血漿濃度(apc)相關，而高a2ar表達與高apc相關。因此，通過調節核苷轉運蛋白的表達，a2ar表達自身部分控制細胞外apc(pinto-duarteetal.,2005)。還示出a2ar的多態性與缺血性心肌病患者的梗死面積相關(tangetal.,2007)。該a2ar的多態性與a2ar表達水平的變化相關(saadjianetal.,2009)。

跑步機(treadmill)是診斷和評估冠狀動脈疾病的最常用的測試。然而，其預測價值有限(nymanetal.,1993)。特別地，盡管一些患者存在缺血負荷，但可能缺乏心電圖(ecg)變化和胸痛。因此，提出使用額外的研究，如應力回波、磁共振成像(mri)和閃爍掃描，以克服這些局限。然而，它們的可用性有限且成本很高。

在閉塞性動脈病，例如冠狀動脈疾病的診斷或預測中提供新的生物學標記物是有臨床價值的。該標記物可進一步增加平板運動測試的預測價值。

技術實現要素：

發明人發現，特別與確定是否存在保留的a2ar(儲備a2ar)和/或與確定個體在運動壓力測試(est)期間apc變化相結合時，個體中在外周血單核細胞(pbmc)的細胞表面上表達的a2ar的表達水平，構成冠狀動脈疾病的新型生物學標記物。此外，由于a2ar還在冠狀動脈區外，包括腦部(murphyetal.,2003)和主動脈(iwamototetal.,1994)，的動脈中表達，所以可能在閉塞性動脈病中發現a2ar的表達異常。

因此，本發明涉及一種診斷或預測個體中的閉塞性動脈病，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病，優選冠狀動脈疾病的體外方法，所述體外方法包括以下步驟：

a)確定在獲自所述個體的外周血單核細胞(pbmc)的細胞表面上表達的腺苷a2a受體(a2ar)的表達水平，以及

b)將步驟a)中確定的表達水平與在先前獲自所述個體的pbmc細胞表面上表達的a2ar的表達水平，或與在pbmc細胞表面上表達的a2ar的標準表達水平進行比較；

低于先前獲自所述個體的a2ar的表達水平，或者低于所述a2ar的標準表達水平的步驟a)中確定的表達水平，構成閉塞性動脈病，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病的標記物，或構成易患閉塞性動脈病，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病的標記物。

“個體”是指哺乳動物，優選人。

閉塞性動脈病是指以導致動脈阻塞的狹窄為特征的動脈病理現象。所述阻塞可能是由于動脈粥樣硬化或血栓形成。閉塞性動脈病可影響任何種類的動脈，如腦動脈(導致中風)、冠狀動脈、下肢動脈。閉塞性動脈病特別是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病，優選冠狀動脈疾病。

冠狀動脈疾病(cad)是指冠狀(心臟)動脈的病理學現象，如阻塞性冠狀動脈疾病。

外周閉塞性動脈病包括除冠狀動脈外的血管床中的狹窄，如下肢缺血和中風。

優選地，外周血單核細胞(pbmc)是淋巴細胞。

在本發明方法的優選實施方式中，pbmc獲自從個體的肱靜脈收集的血液樣品。該血液樣品可以被收集在含有檸檬酸鈉、聚酯凝膠和密度梯度液體的管中。

用于確定在pbmc細胞表面上表達的a2ar的表達水平的方法是本領域已知的(franceschietal.,2013；jacquinetal.,2013)。

在本發明方法的一個有利的實施方式中，通過蛋白質印跡法(westernblotting)確定a2ar的表達水平。

在本發明方法的另一個有利的實施方式中，可以通過使用完整(未裂解)的pbmc樣品和a2arab進行流式細胞術測定(參見例如koshibaetal.,1999)來確定a2ar的表達水平。

制備和裂解pbmc的方法是本領域公知的。在裂解前，可用商業試劑盒制備pbmc。舉例來說，可以使用用于蛋白質印跡法應用的緩沖液樣品，直接制備pbmc：含有2％sds、10％甘油、0.01％溴酚藍和5％巰基乙醇的62.5mmtris-hcl緩沖液，ph8.3。可以通過在47khz下施加10分鐘的超聲處理來裂解pbmc。

可以通過使用a2ar抗體(a2arab)的蛋白質印跡法，來確定裂解物中的a2ar的表達水平。

超聲后，樣品可以進行標準電泳。可將分離的蛋白質電轉到膜上，然后將膜置于蛋白質檢測裝置的印跡架中，并與a2arab孵育。

印跡可以通過經標記的抗a2arab種類進行可視化。可對條帶(人a2ar為45kda)進行密度測量。結果可以以定義成a2ar條帶對印跡背景的像素的任意單位來表示。

如本文所使用的，術語“抗體”包括多克隆或單克隆抗體，天然、合成或重組的抗體，嵌合抗體如人源化抗體，及其保留了結合a2ar能力的片段(例如，fab'2、fab、fv、scfv)。全長抗體可以是五種主要類型之一：iga、igd、ige、igg和igm。將這些全長抗體中的幾種進一步分為亞類或同種型，例如igg1、igg2、igg3、igg4等。不同類型的免疫球蛋白的亞基結構和三維構型是本領域公知的。本發明所使用的抗體的優選類型是igg和/或igm，因為它們是在生理狀況下最常見的抗體，并且因為它們最容易在實驗室環境中制備。抗體還包括免疫粘附素、雙抗體、納米抗體、janusins、微型抗體。保留了結合a2ar能力的片段抗體包括fab、fab'2、fv、scfv片段。

術語“重組(的)抗體”旨在表示通過遺傳工程，例如通過克隆和基因擴增產生的抗體。

術語“合成(的)抗體”旨在表示通過酶法合成和/或化學合成產生的抗體。

術語“嵌合抗體”旨在表示來自特定動物物種或特定抗體種類的抗體，其包括來自另一物種或另一抗體種類的抗體的全部或部分重鏈和/或輕鏈。

術語“嵌合抗體”還可以表示多特異性抗體，即對至少兩種不同表位具有特異性的抗體。可以從如上定義的所述抗體片段獲得多特異性抗體。

術語“人源化抗體”是指如下的人免疫球蛋白，在該人免疫球蛋白中，形成抗原結合位點的cdr(互補決定區)的殘基被替代成具有期望特異性、親和力和/或活性的非人單克隆抗體中的cdr。

抗體和抗體片段可以通過本領域技術人員熟知的常規技術來制備。

a2ar抗體是本領域已知的。舉例來說，可以使用抗a2ar的細胞內結構域的單克隆ab(koshibaetal.1999)或市售的多克隆a2arab，例如refssab1408884和sab1410228(sigma-aldrich)。

在一個優選的實施方式中，a2arab可使用對應于人a2ar的第二胞外環的、序列seqidno：1的30個氨基酸殘基的肽免疫哺乳動物，優選小鼠來獲得。由于該肽在不同物種(小鼠、大鼠、狗和人)間的保守氨基酸序列，因此具有低免疫原性。有利地，a2arab結合序列seqidno：2的線性表位。包含在序列seqidno：2中的氨基酸殘基，苯丙氨酸和谷氨酸對于抗體結合是重要的(jaakolaetal.,2010)。

在另一個優選實施方式中，a2arab是根據布達佩斯條約于2014年11月7日保藏于巴黎15區75724，魯博士路25街(25ruedudocteurroux,75724pariscedex15)的cncm，保藏編號為i-4908的雜交瘤產生的單克隆抗體。該命名為阿多尼斯(adonis)的單克隆抗體的性質描述于byetal.,2009中。

如byetal.,2009中所述，by等人用seqidno：1的肽免疫小鼠來生產阿多尼斯。by等人不得不進行了許多細胞融合和雜交瘤篩選實驗，最終只得到一種可行的雜交瘤。因此，不可能使用相同的免疫方案來重新生產出該雜交瘤(和相應的阿多尼斯)。

通常，健康人(即未患有冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病變的人)中pbmc細胞表面上a2ar的標準表達水平(以任意單位表示)比cad患者中的a2ar表達水平高1.5至2倍。

在本發明方法的一個優選實施方式中，進一步包括確定在獲自個體的pbmc，優選淋巴細胞，上是否存在儲備a2ar的步驟，儲備a2ar的存在構成閉塞性動脈病變，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病變，優選冠狀動脈疾病的另一標記物，或構成易患閉塞性動脈病變，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病，優選冠狀動脈疾病的另一標記物。

從藥理學角度來看，在僅占用少量的可用受體時，給定的配體能發揮最大的生物學效應。這種受體保留，也稱為儲備受體，可以對與幾種t細胞性質兼容的低、瞬時配體濃度和低親和力的相互作用作出反應，因此支持了用于t細胞受體活化的保留受體的存在(mcneiletal.,2002)。以實用的方式，當半數最大有效濃度(ec50)低于解離常數(kd)時，確定儲備受體的存在，其中半數最大有效濃度是指達到最大生物學效應(在當前情況中為pbmc產生的camp)的50％所需的配體濃度，而解離常數是指達到最大結合的50％所需的配體濃度。

用于確定是否存在儲備a2ar的方法是本領域中已知的(例如，參見shryocketal.,1998)。

有利地，可以使用a2ar不可逆激動劑作為camp產生的特異性效應劑，來確定是否存在儲備a2ar，并確定a2ar的ec50和kd。

不可逆激動劑是指a2ar激動劑，該a2ar激動劑至少在確定kd和ec50值所需的孵育期間穩定地結合a2ar胞外部分(jacquinetal.,2013；franceschietal.,2013)。

舉例來說，可以使用pbmc與六種濃度的a2ar激動劑孵育，來建立a2ar激動劑結合曲線。可以使用適當的軟件，用一個位點特異性結合方程y＝bmax×x/(kd+x)進行非線性回歸分析。可以估計與每一pbmc制備物結合的a2ar激動劑的bmax和kd，其中bmax以與y值相同的單位來表示，且kd以與x值相同的單位來表示。可以對與a2ar激動劑(優選用a2ar的激動劑樣抗體，如市售的elisa試劑盒中的單克隆抗體阿多尼斯[見下文])孵育的pbmc，進行細胞camp的測量。可以通過加入適當的化合物，如十二烷基三甲基溴化銨乙酸鹽緩沖液來終止刺激。結果可以表示為最大camp產量的百分比。使用六種濃度的a2ar激動劑獲得的結果可以用合適的軟件和s型劑量-反應曲線進行檢查：y＝底部+(頂部-底部)/(1+10^{[(logec50-x)×希爾斜率]})。頂部(此處的emax)和底部是以y為單位的平臺值，ec50是給出頂部值和底部值之間一半處的反應的a2ar激動劑的濃度。希爾斜率描述了一系列曲線的傾斜度。

a2ar激動劑可以是抗a2ar的激動劑樣抗體，例如保藏于cncm，保藏編碼為i-4908的雜交瘤所生產的單克隆抗體阿多尼斯。根據本發明的(見下文)，名為阿多尼斯的單克隆a2arab至少在估計kd和ec50值所需的孵育期間被同化為不可逆激動劑。

術語“激動劑樣抗體”是指像常規有機激動劑那樣、具有活化a2ar的性質的抗體，其中有機激動劑被定義為與a2ar結合并導致靶細胞產生camp的分子。

可以通過使用a2ar的有機拮抗劑(例如fsptp)使受體失活并降低對激動劑(尤其是不可逆激動劑)的反應，以確定平衡解離常數和ec50，來確定是否存在儲備a2ar(shryocketal.,1998)。

在本發明方法的另一個優選實施方式中，進一步包括由血液樣品確定運動壓力測試(est)期間，所述個體中的腺苷血漿濃度(apc)變化的步驟，apc在est期間的增加構成閉塞性動脈病變，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病變，優選冠狀動脈疾病的另一標記物，或構成易患閉塞性動脈病變，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病，優選冠狀動脈疾病的另一標記物。

在一個具體的實施方式中，apc的增加與陽性est相關。

陽性est指的是存在顯著的st段波變化(>2mm)和st段水平或向下循環下移和/或典型的胸痛)。

該步驟可以與或不與上述確定在pbmc上是否存在儲備a2ar的步驟組合進行。

如果進行該步驟，則從處于基礎水平(即，在運動壓力測試之前)的所述個體獲得用于確定a2ar的表達水平及可選地用于確定是否存在儲備a2ar的pbmc。

用于由血液樣品確定個體中的apc的方法是本領域公知的(guieuetal.,1999；saadjianetal.,2002和2009；jacquinetal.,2013)。

舉例來說，血液樣品收集后，離心，然后脫蛋白。然后使用高壓液相色譜定量腺苷。

est是本領域眾所周知的，因為它是廣泛使用的cad篩選方法(banerjeeetal.,2012)。est包括跑步運動，自行車運動，或下肢癱瘓患者使用手臂的自行車運動。

有利地，est是可以根據bruce方案進行的平板運動測試(bruce,1974)。在此過程中，在自行車上，從20瓦特起每分鐘逐漸增加工作負荷，直至達到最大心率(220次/分鐘-年齡)。還可以使用空氣面罩估計o2消耗，來估計運動壓力測試期間的vo2最大值。

通過在基礎水平(t0)和est結束(t1)時測量apc，有利地確定apc變化。

本發明還涉及產生抗人a2ar的激動劑樣單克隆抗體(稱為阿多尼斯)的雜交瘤，所述雜交瘤于2014年11月7日保藏于cncm，保藏編號為i-4908。

本發明還涉及由2014年11月7日保藏于cncm、保藏編號為i-4908的雜交瘤細胞系產生的，抗人a2ar的激動劑樣單克隆抗體或其片段。

本發明還涉及由保藏于cncm、保藏編號為i-4908的雜交瘤細胞所產生的激動劑樣單克隆抗體的分離片段，該分離片段由所述激動劑樣單克隆抗體的一個互補決定區(cdr)組成，或包括所述激動劑樣單克隆抗體的一個、兩個或三個cdr，優選三個cdr或六個cdr。

測定抗體中cdr的方法是本領域技術人員所熟知的(kurodaetal.,2012)。

所述分離片段可以是fab或fab'2片段。

本發明還涉及一種多肽，該多肽包括由保藏于cncm、保藏編號為i-4908的雜交瘤細胞所產生的激動劑樣單克隆抗體的一個、兩個、三個cdr，或六個cdr，優選三個或六個cdr。

有利地，所述分離片段或多肽能結合a2ar。

本發明還涉及一種抗人a2ar的激動劑樣單克隆抗體或其片段，包括由保藏于cncm、保藏編號為i-4908的雜交瘤所產生的激動劑樣單克隆抗體的三個cdr。

本發明還涉及根據本發明的抗人a2ar的激動劑樣單克隆抗體或能結合a2ar的分離片段或多肽，用于在體外診斷或預測個體中的閉塞性動脈病，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病，優選冠狀動脈疾病中的用途。

有利地，所述抗人a2ar的激動劑樣單克隆抗體由保藏于cncm，保藏編號為i-4908的雜交瘤產生。

本發明還涉及一種用于在體外診斷或預測個體中的閉塞性動脈病，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病，優選冠狀動脈疾病的試劑盒，包括：

-抗人a2ar的激動劑樣單克隆抗體，例如由保藏于cncm、保藏編號為i-4908的雜交瘤產生的單克隆抗體，或根據本發明的能結合a2ar的分離片段或多肽，

-至少一種陽性對照，例如患有閉塞性動脈病，尤其是冠狀動脈疾病或外周閉塞性動脈病，優選冠狀動脈疾病的個體的pbmc裂解物，以及

-至少一種陰性對照，例如健康個體的pbmc裂解物。

除上述特征之外，本發明進一步包括從下文對本發明實施例及附圖的描述中所逐漸顯現出來的其它特征。

附圖說明

圖1顯示了30例患者在基礎水平(t0)、運動壓力測試結束時(t1)和10分鐘恢復后(t2)的腺苷血漿濃度(apc)。a：與t0相比，p<0.01。

圖2顯示了具有陽性(+，n＝15)est或陰性(-，n＝15)est的患者及作為對照的15名健康個體中，在基礎水平(t0)、est結束時(t1)和10分鐘恢復后(t2)的apc。a：與t0+相比，p<0.01；b：與t0-相比，p＝0.12。

圖3顯示了(a)通過蛋白質印跡法，估計了按照臨床隨訪計劃進行了est的患者(全組患者n＝30)，及作為對照的15名健康個體中的a2a腺苷受體表達(a2ar)。15例患者est為陽性，而15例患者est為陰性。還給出了作為陽性或陰性est及對照的函數的a2ar表達。(b)：對獲自陽性est(est+)、陰性est(est-)的患者及對照個體的a2ar進行的蛋白質印跡的實施例。

具體實施方式

實施例：冠狀動脈疾病的診斷

1)患者及方法

患者

進行了一項包括連續發病的33例患者的單中心觀察性研究(monocenterobservationalstudy)：25男8女，平均年齡為62.6±13.5歲，年齡范圍為33～89歲。在患者中，16例已確定為冠狀動脈疾病并且作為臨床隨訪計劃的一部分進行了est，而17例作為其臨床隨訪計劃的一部分首次進行了est。15名健康個體(9名男性和6名女性，平均年齡為60±15.6歲，年齡范圍為27～81歲)作為基礎生物學參數的對照。

est方案

所有患者根據bruce方案進行平板運動測試(brucera1974)。當患者發生顯著的st段波變化(>2mm)和st段水平或向下循環下移和/或典型的胸痛時，則認為est是陽性的。

apc測量

在真空下，使用含有2ml冷終止液的實驗室制管子收集血液樣品(3ml)并如前所述(saadjianetal.,2002；deharoetal.,2012)進行處理。終止液由以下物質構成：含有0.2mm雙嘧達莫的鹽酸；乙二胺四乙酸二鈉(na2edta4mm)；赤-9-(2-羥基-3-壬基腺嘌呤(ehna，5mm)；α,β-亞甲基腺苷5'二磷酸(aopcp，79mm)；2'脫氧柯福霉素10μg/ml；和硫酸肝素1iu/ml。

這種方法允許全血與終止液快速混合，從而防止紅細胞攝取和腺苷降解(guieuetal.,1999,saadjianetal.,2002,deharoetal.,2012,bonelloetal.,2013)。對于患者，在基礎水平、est結束時及10分鐘恢復期后收集樣品。

已描述了apc劑量(guieuetal.,1999；saadjianetal.,2002)。簡言之，收集后，將樣品快速離心(4℃，1500g)，然后脫蛋白(高氯酸，70％1/10v)。再次離心(2500g，10分鐘)后，移出上清液，將其與1ml磷酸鹽緩沖液混合，并用hplc進行分析。使用具有二極管陣列檢測器(chromsystem，德國)的模塊化系統。在mercklichrospherc18柱(nottingham,uk)上用甲醇梯度(60分鐘內從0％至35％)洗脫樣品。用洗脫時間和光譜來鑒定腺苷，并通過與已知量腺苷的峰面積進行比較，來定量。靈敏度閾值為2nm血漿基質。分析內和分析間變化系數范圍為1％至3％。

外周血單核細胞上的a2ar表達

選擇pbmc是因為，在外周血單核細胞(pbmc)表面上表達a2ar的行為反映了這些受體在心血管系統的細胞上的行為(varanietal.,2003)。已經描述了該方法(franceschietal.,2013；jacquinetal.,2013)。簡言之，在基礎水平將來自患者肱靜脈的血液樣品收集到含有檸檬酸鈉、聚酯凝膠和密度梯度液體的管中(bdvacutainercpt,becktondickinson,富蘭克林湖,nj)。根據制造商的說明書制備pbmc，之后使用含有2％sds、10％甘油、0.01％溴酚藍和5％巰基乙醇的62.5mmtris-hcl緩沖液ph8.3裂解，接著在47khz下超聲處理10分鐘。通過蛋白質印跡法，使用命名為阿多尼斯的抗a2ar的單克隆抗體確定裂解物中的a2ar表達(byetal.,2009)。超聲處理后，樣品在miniproteanii系統(biorad,hercules,ca)中進行標準電泳。將12％丙烯酰胺微型凝膠中的分離的蛋白質電轉到pvdf膜上，然后將其置于snapi.d.蛋白質檢測系統(millipore，billerica，ma)的印跡架中，用脫脂奶粉飽和，并與阿多尼斯(1μg/ml)孵育20分鐘。使用柯達系統，通過辣根過氧化物酶標記的抗小鼠抗體和增強的化學發光底物(supersignalwestfemto,piercebiotechnology,rockford,il)使印跡可視化。使用美國國立衛生研究院開發的imagej1.42q軟件，對條帶(a2ar為45kda)進行密度測量。結果以定義成a2ar條帶對印跡背景的像素的任意單位來表示。

統計分析

使用中位數和四分位數或平均值和標準偏差(sd)，表示定量的變量。方差分析(雙因素方差分析)用于比較apc和a2ar表達。威爾科克森檢驗(wilcoxontest)通過邦費羅尼校正(bonferronicorrection)用于配對比較，以解釋i型誤差的膨脹。所有統計檢驗均為雙側的，p值小于0.05被認為具有統計學意義。使用軟件進行分析。

2)結果

患者的臨床特征在下表1中給出。運動壓力測試的結果在下表2中給出。表i：患者基線特征n＝30。cabg：冠狀動脈旁路移植；cad：冠狀動脈疾病；pci：經皮冠狀動脈介入治療

表2：壓力測試結果。數據以中位數和四分位數范圍表示。

十五例est為陽性，十五例為陰性，一例可疑病例并在進一步調查中被排除在外。一名患者無法達到最大心率。

在基礎水平上，全組患者(n＝30)的apc(μm)(中位數[25％～75％])為0.6[0.5～0.7]，其與對照:0.6[0.5～0.7]無顯著差異；p＝0.7。參見圖2，基礎的est-或est+患者的apc與對照無顯著差異：est-：0.65[0.55～0.7]比對照；p＝0.7，est+:0.6[0.5～0.6]比對照；p＝0.7。在est期間，apc在全組患者中顯著增加，0.6[0.5～0.7]比0.8[0.7～0.9]，p＝0.0002。然而，該增加限于est+患者，0.6[0.5～0.6]比0.80[0.75～0.9]；p<0.01。參見圖2，apc在est-組中未顯著增加，0.65[0.55～0.7]比0.70[0.65～0.9]；p＝0.12。參見圖1，在10分鐘恢復后，apc回到基礎值，0.52[0.31～0.63]。

全組患者中，a2ar表達量(任意單位，au)低于對照，22.5[19～29]比30[26.75～32.25]；p＝0.005(參見圖3)。然而，低a2ar表達限于est+患者，19[16～21.25]；與對照相比p<0.0001。參見圖3，est-患者的a2ar表達與對照無顯著差異，29[26～32.25]；p＝0.75。

3)結論

這些結果表明，陽性平板運動測試患者具有比陰性平板運動測試患者低的a2ar表達，且與陰性平板運動測試患者相比，在峰值運動處apc顯著增加。這種增加可能與阻塞性冠狀動脈疾病患者在est期間發生的心肌缺血過程有關。

本研究表明低基礎的a2ar表達和平板運動期間apc的增加，與陽性est和冠狀動脈疾病相關。

由于100％的cad患者也具有低基礎的a2ar表達，因此本研究表明單核細胞的低a2ar表達水平與cad有關。因此，對單核細胞的基礎a2ar表達的測量對篩選cad患者是有用的。

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序列表

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國立健康與醫學研究所

吉恩·拉夫

瑞吉斯·歸尤

弗蘭克·帕加內利

勞倫特·博內洛

喬瓦那·莫托拉

娜塔麗·克普森

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<130>xrnclgf2245-12pct

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<151>2014-11-26

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<213>人類

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<213>人類

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pct/ro/134表