本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種軍團菌抗原膠體金檢測試劑盒及其制備方法和用途。
背景技術：
軍團菌為需氧的多性革蘭陰性菌，廣泛存在于自然環境中，其傳染源是水源和空調系統，通過空氣傳播。軍團桿菌的菌體微小,懸浮在空氣中,人在正常呼吸時,會將空氣中含有軍團桿菌的氣溶膠吸入呼吸道內,致使軍團桿菌有機會侵染肺泡組織和巨噬細胞,引發炎癥,導致軍團菌病，易爆發流行。
軍團桿菌可以侵犯身體內許多器官,因此其臨床表現常是多種多樣。軍團菌病根據臨床特征,一般分為兩種類型,一類為非肺炎型,病情較輕,潛伏期1～2d,似普通感冒或流感樣起病,有發熱、肌痛、咽喉疼痛、咳嗽等癥狀,約1～2周可自愈。另一類是肺炎型,潛伏期2～10d,其初發癥狀為全身不適、疲乏、肌肉酸痛、頭痛、發熱、咳嗽、胸痛、咳血、呼吸困難等,還能侵犯消化系統、中樞神經系統,重癥病人可出現肝功能變化及腎功能衰竭,并可出現精神紊亂等臟器損害。
技術實現要素：
鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種軍團菌抗原膠體金檢測試劑盒及其制備方法和用途，用于解決現有技術中的問題。
為實現上述目的及其他相關目的，本發明采用以下技術方案：
本發明的第一方面，提供一種軍團菌抗原膠體金檢測試劑盒，包括試紙卡，所述試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標墊上包含抗軍團菌單克隆抗體-1，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線，所述金標墊上的抗軍團菌單克隆抗體-1采用膠體金標記。
優選的，所述底板為PVC底板。
優選的，所述硝酸纖維素膜上，檢測線位于離加樣端較近一側，質控線位于離加樣端較遠一側。
優選的，所述檢測線上包被有抗軍團菌單克隆抗體-2。所述金標墊上的抗軍團菌單克隆抗體-1與檢測線上的抗軍團菌單克隆抗體-2可以是相同的抗體，也可以是不同的抗體。
優選的，質控線上包被羊抗鼠IgG多克隆抗體。
優選的，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為50-100mM。
優選的，本發明所述的金標墊還經過預處理，預處理時所使用的預處理緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為10-40mM。
優選的，所述緩沖液還包括反應增強劑，所述反應增強劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應增強劑的濃度為10～50g/L。
優選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19TWEEN 20、S-20TWEEN 80、S-13TRITON X-45、S-14TRITON X-100、S-15TRITON X305中的任意一種或多種的組合，所述表面活性劑的濃度為20～40g/L。
優選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發明所述的金標墊在預處理時所使用的預處理緩沖液包括下列組分：果糖、氫氧化鋁、葡萄糖、氯化鈉和甘氨酸，且果糖、氫氧化鋁、葡萄糖、氯化鉀和甘氨酸的總濃度為4.5－6.5g/L，緩沖液的pH值為7.3－7.5。
優選的，各組分在緩沖液中的濃度為：
果糖1.0-2.0g/L；氫氧化鋁0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化鈉0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。
所述預處理緩沖液的溶劑為水。
所述預處理的具體步驟為：將金標墊在預處理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。
所述預處理緩沖液可使用本領域各種常用的pH調節劑進行pH值的調節。
優選的，所述試劑盒還包括卡殼，所述卡殼包括背卡和上蓋，所述背卡設有試紙卡卡槽，所述試紙卡嵌于所述試紙卡卡槽內，所述上蓋設有測試窗和加樣孔，所述測試窗的位置與所述檢測線和質控線的位置相配合，所述加樣孔的位置與所述樣品墊的位置相配合。
更優選的，所述卡殼為塑料卡殼。
優選的，所述檢測試劑盒用于定性檢測人尿液中軍團菌抗原。
本發明第二方面提供所述軍團菌抗原膠體金檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：
1)用膠體金標記的抗軍團菌單克隆抗體-1溶液噴涂金標墊，制得包含抗軍團菌單克隆抗體-1的金標墊；
2)在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上分別噴涂抗軍團菌單克隆抗體-2及羊抗鼠IgG多克隆抗體，制得包被后的硝酸纖維素膜；
3)將樣品墊、步驟1)制備金標墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在底板上，切裁制得檢測試紙卡；最后將檢測試紙卡裝入卡殼制得檢測試劑盒。
優選的，本發明所述的金標墊還經過預處理，預處理時所使用的預處理緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為10-40mM。
優選的，所述緩沖液還包括反應增強劑，所述反應增強劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應增強劑的濃度為10～50g/L。
優選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19TWEEN 20、S-20TWEEN 80、S-13TRITON X-45、S-14TRITON X-100、S-15TRITON X305中的任意一種或多種的組合，所述表面活性劑的濃度為20～40g/L。
優選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發明所述的金標墊在預處理時所使用的預處理緩沖液包括下列組分：果糖、氫氧化鋁、葡萄糖、氯化鈉和甘氨酸，且果糖、氫氧化鋁、葡萄糖、氯化鉀和甘氨酸的總濃度為4.5－6.5g/L，緩沖液的pH值為7.3－7.5。
優選的，各組分在緩沖液中的濃度為：
果糖1.0-2.0g/L；氫氧化鋁0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化鈉0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。
所述預處理緩沖液的溶劑為水。
所述預處理的具體步驟為：將金標墊在預處理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。
所述預處理緩沖液可使用本領域各種常用的pH調節劑進行pH值的調節。
本發明第三方面提供所述軍團菌抗原膠體金檢測試劑盒在軍團菌抗原檢測領域的用途。
本發明的有益效果為：
本發明所提供的軍團菌抗原膠體金檢測試劑盒兼具高靈敏性和高特異性，能夠快速檢測軍團菌抗原。此外，所述檢測試劑盒具有操作快速簡便、結果準確、經濟適用等優點。
具體實施方式
以下通過特定的具體實例說明本發明的實施方式，本領域技術人員可由本說明書所揭露的內容輕易地了解本發明的其他優點與功效。本發明還可以通過另外不同的具體實施方式加以實施或應用，本說明書中的各項細節也可以基于不同觀點與應用，在沒有背離本發明的精神下進行各種修飾或改變。
在進一步描述本發明具體實施方式之前，應理解，本發明的保護范圍不局限于下述特定的具體實施方案；還應當理解，本發明實施例中使用的術語是為了描述特定的具體實施方案， 而不是為了限制本發明的保護范圍；在本發明說明書和權利要求書中，除非文中另外明確指出，單數形式“一個”、“一”和“這個”包括復數形式。
當實施例給出數值范圍時，應理解，除非本發明另有說明，每個數值范圍的兩個端點以及兩個端點之間任何一個數值均可選用。除非另外定義，本發明中使用的所有技術和科學術語與本技術領域技術人員通常理解的意義相同。除實施例中使用的具體方法、設備、材料外，根據本技術領域的技術人員對現有技術的掌握及本發明的記載，還可以使用與本發明實施例中所述的方法、設備、材料相似或等同的現有技術的任何方法、設備和材料來實現本發明。
除非另外說明，本發明中所公開的實驗方法、檢測方法、制備方法均采用本技術領域常規的分子生物學、生物化學、染色質結構和分析、分析化學、細胞培養、重組DNA技術及相關領域的常規技術。這些技術在現有文獻中已有完善說明，具體可參見Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；the series METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS IN ENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，Academic Press，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，Chromatin Protocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
實施例1 本發明試紙卡的制備
1)使用預處理緩沖液對金標墊進行預處理，預處理緩沖液為：果糖1.5g/L，氫氧化鋁0.5g/L，葡萄糖1.25g/L，氯化鈉0.3g/L，甘氨酸2.0g/L的水溶液，pH＝7.4，預處理的具體步驟為：將金標墊在預處理液中浸泡2h，取出放于37℃烘干；然后用膠體金標記的抗軍團菌單克隆抗體-1溶液噴涂經預處理的金標墊，制得包被抗軍團菌單克隆抗體-1的金標墊，溶液中膠體金與抗體的質量比為5:1，溶液的濃度為10mg/ml，噴涂量為4ul/cm；
2)在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上分別噴涂1mg/ml的抗軍團菌單克隆抗體-2溶液和羊抗鼠IgG多克隆抗體溶液，噴涂量為1ul/cm，制得包被后的硝酸纖維素膜；
3)將樣品墊、步驟1)制備金標墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在PVC底板上，切裁制得寬3-5mm的檢測試紙卡；最后將檢測試紙卡裝入卡殼制得檢測試劑盒。
實施例2 對比試劑盒的制備
對比例試紙卡的制備：采用25mM甘氨酸緩沖液預處理金標墊，其他試劑及實驗方法均同實施例1。
1)采用25mM甘氨酸緩沖液預處理金標墊，然后用膠體金標記的抗軍團菌單克隆抗體-1溶液噴涂經預處理的金標墊，制得包被抗軍團菌單克隆抗體-1的金標墊，溶液中膠體金與抗體的質量比為5:1，溶液的濃度為10mg/ml，噴涂量為4ul/cm；
2)在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上分別噴涂1mg/ml的抗軍團菌單克隆抗體-2溶液和羊抗鼠IgG多克隆抗體溶液，噴涂量為1ul/cm，制得包被后的硝酸纖維素膜；
3)將樣品墊、步驟1)制備金標墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在PVC底板上，切裁制得寬3-5mm的檢測試紙卡；最后將檢測試紙卡裝入卡殼制得檢測試劑盒。
實施例3 檢測試劑盒的特異性實驗
檢測方法：
1.取實施例1制備的本發明試劑盒和實施例2的對比試劑盒，將試劑盒放置在水平臺面上。2.待測樣品的制備：按表1的四類實驗對象，從檢測者尿液中取樣，使用0.01M pH7.2的PBS緩沖液稀釋，稀釋比例為1：1。。
3.每類實驗對象為100人，對比實驗所用的樣品相同，檢測結果如表1：
表1檢測試劑盒特異性試驗結果
由上表可知，本發明的檢測試劑盒對大腸桿菌及痢疾桿菌均無交叉反應，特異性良好。
綜上所述，本發明所提供的檢測試劑盒具有良好的抗干擾性和特異性，且具有很好的靈 敏性，陰性本底更低，有效克服了現有技術中的種種缺點而具高度產業利用價值。
上述實施例僅例示性說明本發明的原理及其功效，而非用于限制本發明。任何熟悉此技術的人士皆可在不違背本發明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因此，舉凡所屬技術領域中具有通常知識者在未脫離本發明所揭示的精神與技術思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應由本發明的權利要求所涵蓋。