用于分離不飽和分子的色譜材料的制作方法

本申請要求2014年3月1日提交的美國專利申請No.14/194,686的優先權，其全文經此引用并入本文。發明領域本公開大體上涉及用于分離不飽和分子的色譜材料。本公開在各種實施方案中更特別涉及用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法和疏水相互作用液相色譜法的色譜材料，其在表現出有助于分離不飽和分子的總體保留的同時減輕或避免保留漂移或變化，還涉及相應的裝置、試劑盒、制造方法和使用方法。發明背景色譜法是用于分離混合物的一組實驗室技術的統稱術語。將該混合物溶解在流動相中，以攜帶其經過固定相。該混合物的各種成分以不同速度行進，以使它們分離。該分離基于在流動相和固定相之間的差異分配。化合物的分配系數的細微差異導致在固定相上的差異保留，由此改變該分離。色譜法可用于分離結構上相關的化合物，如區域異構體、手性、非對映體等。一些技術，包括SFC已知特別可用于分離結構上相關的維生素、天然產物和化學材料。但是，色譜技術通常不足以分離所有結構上相關的化合物。例如，相關維生素的關鍵對（criticalpair）（例如D2和D3，K1和K2）難以分離/解析。用于流體或液相色譜法的填充材料可大致分成兩類：有機材料（例如聚二乙烯基苯）和無機材料（例如二氧化硅）。許多有機材料對強堿性和強酸性流動相化學穩定，以致可靈活選擇流動相組成和pH。但是，有機色譜材料會產生具有低效率的柱，特別是對低分子量分析物而言。許多有機色譜材料不僅缺乏典型色譜二氧化硅的機械強度，還在流動相的組成改變時收縮和溶脹。二氧化硅廣泛用于高效液相色譜法（HPLC）、超高效液相色譜法（UHPLC）和超臨界流體色譜法（SFC）。一些應用使用已用有機官能團，如十八烷基（C18）、辛基（C8）、苯基、氨基、氰基等表面衍生化的二氧化硅。作為用于HPLC的固定相，這些填充材料可產生具有高效率并且沒有表現出收縮或溶脹跡象的柱。雜化材料可提供對使用基于二氧化硅的填充材料時出現的某些色譜問題的解決方案。雜化材料可提供改進，包括改進的高和低pH穩定性、機械穩定性、在pH7下使用時的峰形、效率、保留性和合意的色譜選擇性。但是，傳統雜化材料和二氧化硅材料在其它應用中可能存在潛在問題。一個問題是在低pH下使用時對堿的差峰形，這可以不利地影響在低pH下使用時的載荷能力和峰容量。另一問題是在將柱暴露于流動相pH的反復變化（例如從pH10到3反復變換）之后酸性和堿性分析物保留時間的變化（被稱作“漂移”）。另一問題是保留漂移或變化，例如在具有少量水（例如少于5%，少于1%）的色譜模式中。例如，在標準SFC條件下對基于二氧化硅和有機-無機雜化物（例如可獲自WatersTechnologiesCorporation,MilfordMA的BEHTechnology?材料）的色譜相（鍵合和未鍵合的）都觀察到保留漂移或變化。其它SFC固定相也可表現出類似的保留漂移或變化。發明概述在各種方面和實施方案中，本公開提供用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法和疏水相互作用液相色譜法的色譜材料，其在表現出有助于分離不飽和分子的總體保留的同時減輕或避免保留漂移或變化，還提供相應的裝置、試劑盒、制造方法和使用方法。本公開包括各種附加優點，包括但不限于，通過選擇/設計化學改性來選擇/設計選擇性的能力。在一個實施方案中，本公開涉及一種從混合物中分離相關化合物的方法，所述方法包括提供含有相關化合物的混合物，將一部分所述混合物引入具有色譜柱的色譜系統，和從所述柱中洗脫分離的相關化合物，其中所述柱具有固定相，其具有下列結構(i)：[X](W)a(Q)b(T)c　　(i)其中X是含有二氧化硅、金屬氧化物、無機-有機雜化材料、一組嵌段共聚物或其組合的色譜基底，W選自氫和羥基，其中W鍵合到X的表面上，Q是在具有低水濃度的色譜條件下使隨時間經過的分析物保留變化最小化的第一取代基，T是色譜上保留分析物的第二取代基，其中T具有一個或多個芳烴、多環芳烴、雜環芳烴或多雜環芳烴基團，各基團任選被脂族基團取代；且b和c是正數，0.05≤(b/c)≤100，且a≥0。在一些實施方案中，Q具有下列結構(ii)：其中n1是1-30的整數，n2是1-30的整數，R1、R2、R3和R4各自獨立地選自氫、羥基、氟、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、低級烷基、保護或脫保護醇和兩性離子，Z是(a)具有式(B1)x(R5)y(R6)zSi-的表面連接基團，其中x是1-3的整數，y是0-2的整數，z是0-2的整數，且x+y+z=3，R5和R6各自獨立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、取代或未取代芳基、環烷基、支鏈烷基、低級烷基、保護或脫保護醇、兩性離子基團和硅氧烷鍵，且B1是硅氧烷鍵，或(b)通過直接碳-碳鍵形成或通過雜原子、酯、醚、硫醚、胺、酰胺、酰亞胺、脲、碳酸酯、氨基甲酸酯、雜環、三唑或聚氨酯（urethane）鍵與表面有機官能雜化基團的連接（attachment），或(c)沒有共價連接到所述材料的表面上的吸附表面基團，Y是嵌入的極性官能團、鍵或脂族基團，且A選自親水端基、可官能化基團、氫、羥基、氟、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、低級烷基和可極化基團。在一些實施方案中，T具有下列結構(iii)：其中m1是1-30的整數，m2是1-30的整數，m3是1-3的整數，R7、R8、R9和R10各自獨立地選自氫、羥基、氟、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、低級烷基、保護或脫保護醇、兩性離子、芳烴基團和雜環芳烴基團，Z是(a)具有式(B1)x(R5)y(R6)zSi-的表面連接基團，其中x是1-3的整數，y是0-2的整數，z是0-2的整數，且x+y+z=3，R5和R6各自獨立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、取代或未取代芳基、環烷基、支鏈烷基、低級烷基、保護或脫保護醇、兩性離子基團和硅氧烷鍵，且B1是硅氧烷鍵，(b)通過直接碳-碳鍵形成或通過雜原子、酯、醚、硫醚、胺、酰胺、酰亞胺、脲、碳酸酯、氨基甲酸酯、雜環、三唑或聚氨酯鍵與表面有機官能雜化基團的連接，或(c)沒有共價連接到所述材料的表面上的吸附表面基團，Y是嵌入的極性官能團、鍵或脂族基團，D選自鍵、N、O、S、–(CH2)0-12–N–R11R12、–(CH2)0-12–O–R11、–(CH2)0-12–S–R11、–(CH2)0-12–N–(CH2)0-12–R11R12、–(CH2)0-12–O–(CH2)0-12–R11、–(CH2)0-12–S–(CH2)0-12–R11、–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–N–R11R12、–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–O–R11、–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–S–R11；–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–N–(CH2)0-12–R11R12、–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–O–(CH2)0-12–R11和–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–S–(CH2)0-12–R11，R11是第一單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團，R12是氫、脂族基團或第二單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團，其中R11和R12任選被脂族基團取代。各種分數的Q、T或兩者可以聚合。在另一實施方案中，本公開涉及從混合物中分離脂質、維生素或多環芳烴的方法。在另一實施方案中，本公開涉及具有下列結構(i)的色譜固定相：[X](W)a(Q)b(T)c　　(i)其中X是含有二氧化硅、金屬氧化物、無機-有機雜化材料、一組嵌段共聚物或其組合的色譜基底，W選自氫和羥基，其中W鍵合到X的表面上，Q是在具有低水濃度的色譜條件下使隨時間經過的分析物保留變化最小化的第一取代基，T是色譜上保留分析物的第二取代基，其中T具有一個或多個單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團，各基團任選被脂族基團取代；且b和c是正數，0.05≤(b/c)≤100，且a≥0。在另一實施方案中，本公開涉及用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法的柱、毛細管柱、整體柱、微流體器件或裝置，其包含具有至少一個限定具有入口和出口的室的壁的外殼和布置在其中的具有上述結構，即(i)的固定相，其中所述外殼和固定相適用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法。在另一實施方案中，本公開涉及用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法的試劑盒，其包含具有至少一個限定具有入口和出口的室的壁的外殼和布置在其中的具有上述結構，即(i)的固定相，其中所述外殼和固定相適用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法；和用所述外殼和固定相實施正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法的說明書。在另一實施方案中，本公開涉及一種制備具有上述結構，即(i)的固定相的方法，其包括使色譜基底與具有側反應性基團的硅烷偶聯劑反應，使包含一個或多個芳烴、多環芳烴、雜環芳烴或多雜環芳烴基團的第二化學試劑與所述側反應性基團反應；和中和任何剩余未反應的側反應性基團，由此制造所述固定相。在另一實施方案中，本公開涉及一種制備具有上述結構，即(i)的固定相的方法，其包括使具有側反應性基團的硅烷偶聯劑低聚，使芯表面與低聚的硅烷偶聯劑反應，使包含一個或多個芳烴、多環芳烴、雜環芳烴或多雜環芳烴基團的第二化學試劑與所述側反應性基團反應；和中和任何剩余未反應的側反應性基團，由此制造所述固定相。在另一實施方案中，本公開涉及一種減輕或防止正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法中的保留漂移的方法，其包括使用包含布置在其中的具有上述結構，即(i)的色譜固定相的色譜裝置來色譜分離樣品，由此減輕或防止保留漂移。本公開有利地在表現出特別對不飽和相關分子或化合物有用的總體保留的同時減輕或避免保留漂移或變化。例如，在SFC中，保留漂移或變化可以（在各種其它理論中）歸因于在用于SFC的標準CO2/MeOH流動相（和/或用其它醇助溶劑）下粒子上的溶劑可達硅烷醇的烷氧基化。這是一個問題，因為隨著柱老化，使用者觀察到在他們的SFC系統上獲得的色譜變化（例如保留時間），并在將新的未烷氧基化的柱安裝在該系統上時，又觀察到變化。在各種方面和實施方案中，本公開通過色譜材料的選擇和/或改性來提供對這樣的保留漂移或變化和相關問題（例如保留、峰形等）的各種解決方案。例如，本發明包括色譜芯表面的專門官能化（例如用特定官能團及其組合），這基本防止分析物與色譜芯表面之間的色譜相互作用，這保持分析物與色譜材料之間的所需相互作用。在其它各種方面和實施方案中，本公開涉及具有極大減少的與基質粒子表面的次級相互作用（例如不想要的相互作用、非特異性吸附）的色譜材料。分析物與材料表面的次級相互作用可由于硅烷醇、側疏水基團和聚合物或雜化主鏈而發生。在各種方面和實施方案中，本公開提供許多優點。例如，本公開可提供能以優異的保留、峰容量和峰形解析所有種類的分析物（例如酸性、堿性和中性），特別是不飽和分析物的固定相，對堿的峰形較不重要。在各種實例中，本公開可有效地對相關分析物掩蔽硅烷醇，以產生可預測和穩定的色譜分離。在各種實例中，本公開可有效消除由于不想要的載體表面與分析物相互作用而發生的保留漂移或變化。本公開可尤其有效掩蔽二氧化硅或二氧化硅雜化材料上的硅烷醇，在各種實例中，本公開可在所有分析物種類中改進峰容量和拖尾，尤其是對堿而言。在各種實例中，本公開可避免孔隙堵塞，盡管與低聚硅氧烷鍵合（例如與多孔二氧化硅材料的傳統聚合涂層相比，所述傳統聚合涂層會造成孔隙堵塞以極大降低該材料的可用表面積并產生不均勻表面-盡管在本公開中促進硅烷低聚，但沒有孔隙堵塞或表面積降低的跡象）。本公開基于其獨特的化學和性能特性提供優于現有技術的優點。例如，不飽和化合物的液相分離通常涉及在C18鍵合相，如ACQUITYUPC2HSSC18SB上進行的分離。在該材料上，烷基鏈是產生高亞甲基/疏水選擇性但極小的形狀/異構選擇性的保留選擇因子（retentionselector）。本公開提供能夠實現亞甲基/疏水選擇性和形狀/異構選擇性兩者的保留選擇因子。例如，本公開的固定相優異地保留和分離脂溶性維生素、脂質和代謝產物以及提供與C18鍵合相相比增強的形狀/異構選擇性。通過僅用于舉例說明目的而非限制性的下列附圖和實施例更詳細描述本公開。附圖簡述在下列附圖和詳述的情況下更容易理解本公開。本領域普通技術人員會理解，下列附圖不必按比例，而是著重圖示本發明的發明概念。圖1顯示環氧丙氧丙基三甲氧基硅烷（GPTMS）（圖1A）和1-氨基蒽（圖1B）的結構。圖2顯示未改性色譜表面和GPTMS之間的反應的示意圖。圖3顯示改性色譜表面和1-氨基蒽之間的反應的示意圖。圖4顯示與改性劑GPTMS和1-氨基蒽交聯的色譜表面的示意圖。圖5顯示用于制備本公開的色譜固定相的兩個可能的合成途徑的示意圖。圖6顯示使用未改性BEH粒子作為固定相和根據本公開改性的BEH粒子洗脫的分析物的保留百分比的圖。圖7A和7B顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的示例性脂質分離。圖8A顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C22:0和C20:0的色譜圖。圖8B顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C16:0、C12:0和C8:0的色譜圖。圖9A顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C22:0和C20:0的色譜圖。圖9B顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C16:0、C12:0和C8:0的色譜圖。圖10A顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C24:1和C22:1的色譜圖。圖10B顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C20:1、C18:1和C14:1的色譜圖。圖11A顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C24:1和C22:1的色譜圖。圖11B顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C20:1、C18:1和C14:1的色譜圖。圖12A顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C18:0、C18:1和C18:2的色譜圖。圖12B顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C22:1、C22:2和C22.:6的色譜圖。圖13A顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C18:0、C18:1和C18:2的色譜圖。圖13B顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C22:1、C22:2和C22:6的色譜圖。圖14和15顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相的各種亞麻酸和二十碳二烯酸的色譜圖。圖16顯示使用如實施例9中所述的基于1-氨基蒽的固定相實現的示例性脂質分離。圖17A顯示使用如實施例3和10中所述的基于1-氨基蒽的固定相的各種脂質的色譜圖。圖17B顯示使用如實施例3和10中所述的基于2-氨甲基吡啶的固定相的各種脂質的色譜圖。圖17C顯示使用如實施例3和10中所述的基于吡啶的固定相的各種脂質的色譜圖。圖17D顯示使用如實施例3和10中所述的基于6-氨基喹啉的固定相的各種脂質的色譜圖。圖17E顯示使用如實施例3和10中所述的基于苯胺的固定相的各種脂質的色譜圖。圖17F顯示使用如實施例3和10中所述的基于GPTMS的固定相的各種脂質的色譜圖。圖17G顯示使用如實施例3和10中所述的基于4-正辛基苯胺的固定相的各種脂質的色譜圖。圖18A顯示使用如實施例3和10中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C18:0、C18:1和C18:2的色譜圖。圖18B顯示使用如實施例3和10中所述的基于1-氨基蒽的固定相的C22:1、C22:2和C22:6的色譜圖。圖19A顯示使用如實施例3和10中所述的基于2-氨甲基吡啶的固定相的C18:0、C18:1和C18:2的色譜圖。圖19B顯示使用如實施例3和10中所述的基于2-氨甲基吡啶的固定相的C22:1、C22:2和C22:6的色譜圖。圖20A顯示使用如實施例3和10中所述的基于吡啶的固定相的C18:0、C18:1和C18:2的色譜圖。圖20B顯示使用如實施例3和10中所述的基于吡啶的固定相的C22:1、C22:2和C22:6的色譜圖。圖21A顯示使用如實施例3和10中所述的基于6-氨基喹啉的固定相的C18:0、C18:1和C18:2的色譜圖。圖21B顯示使用如實施例3和10中所述的基于6-氨基喹啉的固定相的C22:1、C22:2和C22:6的色譜圖。圖22A顯示使用如實施例3和10中所述的基于苯胺的固定相的C18:0、C18:1和C18:2的色譜圖。圖22B顯示使用如實施例3和10中所述的基于苯胺的固定相的C22:1、C22:2和C22:6的色譜圖。圖23A顯示使用如實施例3和10中所述的基于GPTMS的固定相的C18:0、C18:1和C18:2的色譜圖。圖23B顯示使用如實施例3和10中所述的基于GPTMS的固定相的C22:1、C22:2和C22:6的色譜圖。圖24A-24F顯示使用如實施例3和10中所述的基于4-正辛基苯胺的固定相的C18:0、C18:1、C18:2、C22:1、C22:2和C22:6的色譜圖。發明詳述在各種方面和實施方案中，本公開提供用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法和疏水相互作用液相色譜法的色譜材料，其在表現出有助于分離不飽和分子的總體保留的同時減輕或避免保留漂移或變化，還提供相應的裝置、試劑盒、制造方法和使用方法。在一些實施方案中，本公開還提供難以分離的結構相關化合物，如關鍵對的保留和分離。本公開有利地在表現出有用的總體保留的同時減輕或避免保留漂移或變化。例如，在SFC中，保留漂移或變化可以（在各種其它理論中）歸因于在用于SFC的標準CO2/MeOH流動相（和/或用其它醇助溶劑）下粒子上的溶劑可達硅烷醇的烷氧基化。這是一個問題，因為隨著柱老化，使用者觀察到在他們的SFC系統上獲得的色譜變化（例如保留時間），并在將新的未烷氧基化的柱安裝在該系統上時，又觀察到變化。在各種方面和實施方案中，本公開通過色譜材料的選擇性改性和/或不飽和相關化合物的混合物的解析來提供對這樣的保留漂移或變化和相關問題（例如保留、峰形等）的各種解決方案。定義在各種方面和實施方案中，本發明用于減輕或防止保留漂移或變化。“保留漂移”或“保留變化”可包括色譜運行或實驗之間的不合意的洗脫時間差異（例如在運行1中，峰x在時間y洗脫，但在運行1+n中，峰x在時間z洗脫）。因此，保留漂移或變化會造成不合意的效應，包括實驗噪音、不可再現性或失敗。因此，在廣義上，減輕或防止保留漂移或變化包括在該色譜實驗提供色譜可接受的結果的程度上解決或抵消色譜運行之間的不合意的洗脫時間差異。在一些實施方案中，減輕或防止保留漂移或變化不是絕對值或恒定值。例如，在仍實現色譜可接受的結果的同時可發生的保留漂移或變化的量可取決于給定實驗中可接受的誤差或方差、樣品的復雜性（例如峰的數量和/或分離）而變化。在仍實現色譜可接受的結果的同時可發生的保留漂移或變化的量可取決于給定實驗的持續時間或所需可再現性而變化（例如如果需要在更大數量的運行上的可再現性，運行之間的可允許保留漂移或變化可以更小）。因此，應清楚的是，減輕或防止保留漂移或變化不一定意味著絕對消除保留漂移或變化。在一些實施方案中，可以量化減輕或防止保留漂移或變化。例如，可以對單峰測量保留漂移或變化，或得出一組峰的平均值。可以在給定時期或運行數量上測量保留漂移或變化。可以相對于標準值、起始值或在兩個或更多個給定運行之間測量保留漂移或變化。此外，可以通過標準化試驗量化保留漂移或變化。例如，可以通過取用由第3、10或30天色譜試驗測得的平均絕對峰保留與在第1天色譜試驗時測得的平均絕對峰保留的百分比差異來計算平均%保留變化。對于試驗的每天，可以在一組試驗條件下平衡該柱，接著多次注入第一試驗混合物，然后在第二組條件下平衡，接著多次注入第二試驗混合物。根據這一標準化試驗，減輕或防止保留漂移或變化可包括經30天≤5%、經30天≤4%、經30天≤3%、經30天≤2%、經30天≤1%、經10天≤5%、經10天≤4%、經10天≤3%、經10天≤2%、經10天≤1%、經3天≤5%、經3天≤4%、經3天≤3%、經3天≤2%、經3天≤1%、經30次運行≤5%、經30次運行≤4%、經30次運行≤3%、經30次運行≤2%、經30次運行≤1%、經10次運行≤5%、經10次運行≤4%、經10次運行≤3%、經10次運行≤2%、經10次運行≤1%、經3次運行≤5%、經3次運行≤4%、經3次運行≤3%、經3次運行≤2%或經3次運行≤1%的保留漂移或變化。在另一些實施方案中，減輕或防止保留漂移或變化可包含經31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1天（或運行）≤5.0、4.9、4.8、4.7、4.6、4.5、4.4、4.3、4.2、4.1、4.0、3.9、3.8、3.7、3.6、3.5、3.4、3.3、3.2、3.1、3.0、2.9、2.8、2.7、2.6、2.5、2.4、2.3、2.2、2.1、2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或0.1%的保留漂移或變化。“高純度”或“高純色譜材料”包括由高純前體制成的材料。在某些方面中，高純材料具有降低的金屬污染和/或不縮減的色譜性質，包括但不限于，表面硅烷醇的酸性和表面的不均勻性。“色譜表面”包括提供樣品的色譜分離的表面。在某些方面中，該色譜表面是多孔的。在一些方面中，色譜表面可以是粒子、表面多孔材料或整料的表面。在某些方面中，該色譜表面由在色譜分離過程中組合使用的一種或多種粒子、表面多孔材料或整料的表面構成。在另一些方面中，該色譜表面是無孔的。“可離子化改性劑”包括帶有供電子或吸電子基團的官能團。在某些方面中，可離子化改性劑含有一個或多個羧酸基、氨基、亞氨基、酰氨基、吡啶基、咪唑基、脲基、亞硫酰-脲基或氨基硅烷基或其組合。在另一些方面中，該可離子化改性劑含有帶有氮或磷原子的基團，所述原子具有自由電子孤對。在某些方面中，該可離子化改性劑共價連接到材料表面上并具有可離子化基團。在一些情況下，其通過表面雜化基團的化學改性連接到色譜材料上。“疏水表面基團”包括在色譜表面上表現出疏水性的表面基團。在某些方面中，疏水基團可以是氮鍵合相，如C4至C18鍵合相。在另一些方面中，疏水表面基團可含有嵌入的極性基團以使該疏水表面的外部保持疏水性。在一些情況下，其通過表面雜化基團的化學改性連接到色譜材料上。在另一些情況下，該疏水基團可以是C4-C30嵌入的極性、手性、苯基烷基或五氟苯基鍵合的涂層。“色譜芯”包括形成本公開的材料的內部的色譜材料，包括但不限于如本文中定義的有機材料，如二氧化硅或雜化材料，其為粒子、整料或另一合適的結構的形式。在某些方面中，色譜芯的表面代表如本文中定義的色譜表面，或代表被如本文中定義的色譜表面包圍的材料。色譜表面材料可以可辨認出離散或不同轉變的方式布置在或鍵合到或退火到色譜芯上或可以與色譜芯的表面共混的方式結合到色譜芯上以導致材料漸變并且沒有離散的內芯表面。在某些實施方案中，色譜表面材料可以與色譜芯的材料相同或不同并可表現出與色譜芯不同的物理或物理化學性質，包括但不限于，孔隙體積、表面積、平均孔隙直徑、碳含量或水解pH穩定性。“雜化”，包括“雜化無機/有機材料”，包括基于無機的結構，其中有機官能團整合到內部或“骨架”無機結構以及雜化材料表面中。該雜化材料的無機部分可以是例如氧化鋁、二氧化硅、鈦、鈰或鋯或它們的氧化物，或陶瓷材料。“雜化”包括基于無機的結構，其中有機官能團整合到內部或“骨架”無機結構以及雜化材料表面中。如上所述，示例性雜化材料顯示在美國專利Nos.4,017,528、6,528,167、6,686,035和7,175,913中，它們的內容全文經此引用并入本文。術語“脂環族基團”包括三個或更多個碳原子的閉環結構。脂環族基團包括環烷烴或環烷（其是飽和環烴）、環烯烴（其是不飽和的，具有兩個或更多個雙鍵）和具有三鍵的環乙炔。它們不包括芳族基團。環烷烴的實例包括環丙烷、環己烷和環戊烷。環烯烴的實例包括環戊二烯、環己二烯和環辛四烯。脂環族基團還包括稠環結構和取代的脂環族基團，如烷基取代的脂環族基團。在脂環族基團的情況下，這樣的取代基可進一步包括低級烷基、低級烯基、低級烷氧基、低級烷硫基、低級烷基氨基、低級烷基羧基、硝基、羥基、-CF3、-CN等。術語“脂族基團”包括以通常具有1至24個碳原子的直鏈或支鏈為特征的有機化合物。脂族基團包括烷基、烯基和炔基。在復雜結構中，該鏈可以是支鏈或交聯的。在一些實施方案中，該脂族基團可包括具有2至24個碳原子，或4至22個碳原子，或6至20個碳原子，或8至18個碳原子，或10至16個碳原子，或12至14個碳原子，或這些數值的任何組合，如大約6至12個碳原子或10至14個碳原子的鏈。烷基包括具有一個或多個碳原子的飽和烴，包括直鏈烷基和支鏈烷基。這樣的烴部分可以在一個或多個碳上被例如鹵素、羥基、硫醇、氨基、烷氧基、烷基羧基、烷硫基或硝基取代。除非另行規定碳數，本文所用的“低級脂族”是指如上文定義但具有1至6個碳原子的脂族基團（例如低級烷基、低級烯基、低級炔基）。這樣的低級脂族基團，例如低級烷基的代表是甲基、乙基、正丙基、異丙基、2-氯丙基、正丁基、仲丁基、2-氨基丁基、異丁基、叔丁基、3-硫戊基等。本文所用的術語“硝基”是指-NO2；術語“鹵素”是指-F、-Cl、-Br或-I；術語“硫醇”是指SH；且術語“羥基”是指-OH。因此，本文所用的術語“烷基氨基”是指具有連接到其上的氨基的如上定義的烷基。合適的烷基氨基包括具有1至大約12個碳原子，優選1至大約6個碳原子的基團。術語“烷硫基”是指具有連接到其上的巰基的如上定義的烷基。合適的烷硫基包括具有1至大約12個碳原子，優選1至大約6個碳原子的基團。本文所用的術語“烷基羧基”是指具有連接到其上的羧基的如上定義的烷基。本文所用的術語“烷氧基”是指具有連接到其上的氧原子的如上定義的烷基。代表性的烷氧基包括具有1至大約12個碳原子，優選1至大約6個碳原子的基團，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。術語“烯基”和“炔基”是指類似于烷基但分別含有至少一個雙鍵或三鍵的不飽和脂族基團。合適的烯基和炔基包括具有2至大約12個碳原子，優選1至大約6個碳原子的基團。術語“烷基”包括飽和脂族基團，包括直鏈烷基、支鏈烷基、環烷基（脂環族）、烷基取代的環烷基和環烷基取代的烷基。在某些實施方案中，直鏈或支鏈烷基在其主鏈中具有30個或更少碳原子，例如對直鏈而言C1-C30或對支鏈而言C3-C30。在某些實施方案中，直鏈或支鏈烷基在其主鏈中具有20個或更少碳原子，例如對直鏈而言C1-C20或對支鏈而言C3-C20，更優選18或更少。同樣地，優選環烷基在其環結構中具有4-10個碳原子，更優選在環結構中具有4-7個碳原子。術語“低級烷基”是指在鏈中具有1至6個碳的烷基和在環結構中具有3至6個碳的環烷基。此外，本公開通篇所用的術語“烷基”（包括“低級烷基”）包括“未取代烷基”和“取代烷基”，后者是指在烴主鏈的一個或多個碳上具有替代氫的取代基的烷基部分。這樣的取代基可包括，例如，鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、硫烷基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合（phosphonato）、次膦酸根合（phosphinato）、氰基、氨基（包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基）、酰氨基（包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基）、脒基、亞氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、磺酸根合（sulfonato）、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、芳烷基或芳族或雜芳族部分。本領域技術人員會理解，如果適當，在烴鏈上取代的部分本身可以被取代。環烷基可進一步例如被上述取代基取代。“芳烷基”部分是被例如具有1至3個分開或稠合的環和6至大約18個碳環原子的芳基取代的烷基，例如苯基甲基（芐基）。本文所用的術語“氨基”是指式-NRaRb的未取代或取代部分，其中Ra和Rb各自獨立地為氫、烷基、芳基或雜環基，或Ra和Rb與它們連接的氮原子一起形成在環中具有3至8個原子的環狀部分。因此，除非另行說明，術語“氨基”包括環狀氨基部分，如哌啶基或吡咯烷基。“氨基取代的氨基”是指其中Ra和Rb的至少一個進一步被氨基取代的氨基。術語“芳族基團”包括含有一個或多個環的不飽和環烴。術語“單環芳族”包括含有一個環的不飽和環烴。術語“多環芳族”包括含有兩個或更多個環的不飽和環烴。芳族基團包括5-和6-元單環基團，其可包括0至4個雜原子，例如呋喃、吡咯、吡咯啉、噁唑、噻唑、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、異噁唑、異噻唑、苯、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、噻吩等。該芳環可以在一個或多個環位置被例如鹵素、低級烷基、低級烯基、低級烷氧基、低級烷硫基、低級烷基氨基、低級烷基羧基、硝基、羥基、-CF3、-CN等取代。芳族基團包括5-和6-元多環基團，其可包括0至8個雜原子，例如茚、中氮茚（indolinzine）、吲哚、異吲哚、吲哚啉、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、萘、喹嗪、喹啉、異喹啉、噌啉、酞嗪、喹唑啉、喹喔啉、1,8-萘啶、奎寧環、芴、咔唑、蒽、吖啶、吩嗪（phanazine）、吩噻嗪、吩噁嗪、芘等。多環芳基包括稠合芳基。術語“芳基”包括5-和6-元單環芳基，其可包括0至4個雜原子，例如未取代或取代的苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪和嘧啶等。芳基還包括多環稠合芳基，如萘基、喹啉基、吲哚基等。該芳環可以在一個或多個環位置被例如如上文對烷基所述的取代基取代。合適的芳基包括未取代和取代的苯基。本文所用的術語“芳氧基”是指具有連接到其上的氧原子的如上定義的芳基。本文所用的術語“芳烷氧基”是指具有連接到其上的氧原子的如上定義的芳烷基。合適的芳烷氧基具有1至3個分開或稠合的環和6至大約18個碳環原子，例如O-芐基。術語“陶瓷前體”意在包括導致形成陶瓷材料的任何化合物。術語“手性部分”意在包括能夠手性或立體選擇性合成的任何官能團。手性部分包括，但不限于，具有至少一個手性中心的取代基、天然和非天然氨基酸、肽和蛋白質、衍生化纖維素、大環抗生素、環糊精、冠醚和金屬配合物。術語“嵌入的極性官能團”是提供整體極性部分使得由于屏蔽二氧化硅表面上的未反應硅烷醇基團而降低與堿性樣品的相互作用的官能團。嵌入的極性官能團包括，但不限于，如美國專利No.5,374,755中公開的碳酸酯、酰胺、脲、醚（例如在含碳基團之間的-O-）、硫醚、亞硫酰基、亞砜、磺酰基、硫脲、硫代碳酸酯、硫代氨基甲酸酯、乙二醇、雜環、三唑官能團或氨基甲酸酯官能團，和手性部分。詞語“色譜增強性孔隙幾何”包括本公開的材料的孔隙構造的幾何，其已被發現增強該材料的色譜分離能力，例如與本領域中的其它色譜介質相比。例如，可以形成、選擇或構造幾何，并可以使用各種性質和/或因素確定該材料的色譜分離能力是否已“增強”，例如與本領域中已知或常規使用的幾何相比。這些因素的實例包括高分離效率、較長柱壽命和高質量傳遞性質（如例如降低的譜帶展寬和良好的峰形所證實）。可以使用業內認可的技術測量或觀察這些性質。例如，本多孔無機/有機雜化材料的色譜增強性孔隙幾何由于不存在“墨水瓶（inkbottle）”或“貝殼形（shellshaped）”孔隙幾何或形態（兩者都不合意，因為它們例如降低傳質速率，以造成較低效率）而有別于現有技術材料。在僅含少量微孔的雜化材料中發現色譜增強性孔隙幾何。當所有直徑大約<34?的孔隙構成該材料的比表面積的小于大約110平方米/克時，在雜化材料中實現少量微孔。具有這樣低的微孔表面積（MSA）的雜化材料提供色譜增強，包括高分離效率和良好的質量傳遞性質（如例如降低的譜帶展寬和良好的峰形所證實）。微孔表面積（MSA）被定義為是使用BJH法由等溫線的吸附分支通過多點氮氣吸附分析測定的直徑小于或等于34?的孔隙中的表面積。本文所用的首字母縮略詞“MSA”和“MP”可互換使用以表示“微孔表面積”。術語“官能化基團”包括賦予色譜固定相特定色譜功能的有機官能團。術語“雜環基團”包括閉環結構，其中該環中的一個或多個原子是非碳元素，例如氮、硫或氧。雜環基團可以是飽和或不飽和的，且雜環基團如吡咯和呋喃可具有芳族性質，即“雜環芳基”。它們包括一個或多個環結構。具有兩個或更多個環結構的雜環基團是“多雜環芳基”。這些基團可具有稠環結構，如喹啉和異喹啉。雜環基團的其它實例包括吡啶和嘌呤。雜環基團也可以在一個或多個構成原子處被例如鹵素、低級烷基、低級烯基、低級烷氧基、低級烷硫基、低級烷基氨基、低級烷基羧基、硝基、羥基、-CF3、-CN等取代。合適的雜芳族和雜脂環族基團通常具有1至3個分開或稠合的環，每個環3至大約8個成員和一個或多個N、O或S原子，例如香豆素基、喹啉基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、哌啶基、嗎啉基和吡咯烷基。術語“金屬氧化物前體”意在包括含有金屬并導致形成金屬氧化物，例如氧化鋁、二氧化硅、氧化鈦、氧化鋯的任何化合物。術語“整料”意在包括填塞成床形式的單粒子集合，其中保持單粒子的形狀和形態。有利地使用將粒子粘合在一起的材料填塞粒子。可以使用本領域中公知的任何粘合材料，例如二乙烯基苯、甲基丙烯酸酯、氨基甲酸酯、烯烴、炔烴、胺、酰胺、異氰酸酯或環氧基的線性或交聯聚合物，以及有機烷氧基硅烷、四烷氧基硅烷、聚有機烷氧基硅氧烷、聚乙氧基硅氧烷和陶瓷前體的縮合反應。在某些實施方案中，術語“整料”還包括通過其它方法制成的雜化整料，如美國專利No.7,250,214中詳述的雜化整料；由一種或多種含有0-99摩爾%二氧化硅（例如SiO2）的單體的縮合制成的雜化整料；由聚結的多孔無機/有機粒子制成的雜化整料；具有色譜增強性孔隙幾何的雜化整料；沒有色譜增強性孔隙幾何的雜化整料；具有有序孔隙結構的雜化整料；具有非周期性孔隙結構的雜化整料；具有非結晶或無定形分子排序的雜化整料；具有結晶疇或區的雜化整料；具有各種不同的大孔和介孔性質的雜化整料；和各種不同縱橫比的雜化整料。在某些實施方案中，術語“整料”還包括無機整料，如G.Guiochon/J.Chromatogr.A1168(2007)101-168中描述的那些。術語“納米粒子”是具有至少一個小于大約100納米的維度，例如小于大約100納米（0.1毫米）的直徑或粒子厚度的微觀粒子/顆粒或粉末/納米粉末的微觀成員，其可以是結晶或非晶的。納米粒子具有不同于并通常優于傳統散裝材料的性質，包括例如更大的強度、硬度、延性、可燒結性和更大的反應性等。大量科學研究繼續致力于測定納米材料的性質，其中少量已通過許多方法合成（主要作為納米級粉末），包括膠體沉淀、機械研磨和氣相成核和生長。大量綜述已經記錄納米相材料中的最新發展并經此引用并入本文：Gleiter,H.(1989)“Nano-crystallinematerials,”Prog.Mater.Sci.33:223-315和Siegel,R.W.(1993)“Synthesisandpropertiesofnano-phasematerials,”Mater.Sci.Eng.A168:189-197。在某些實施方案中，納米粒子包含下列的氧化物或氮化物：碳化硅、鋁、金剛石、鈰、炭黑、碳納米管、鋯、鋇、鈰、鈷、銅、銪、釓、鐵、鎳、釤、硅、銀、鈦、鋅、硼及其混合物。在某些實施方案中，本公開的納米粒子選自金剛石、氧化鋯（非晶、單斜晶、四方晶和立方晶形式）、氧化鈦（非晶、銳鈦礦、板鈦礦和金紅石形式）、鋁（非晶、α和γ形式）和硼氮化物（立方晶型）。在特定實施方案中，本公開的納米粒子選自納米金剛石、碳化硅、二氧化鈦（銳鈦礦形式）、立方硼氮化物和它們的任何組合。此外，在特定實施方案中，該納米粒子可以是結晶或非晶的。在特定實施方案中，該納米粒子小于或等于100毫米直徑，例如小于或等于50毫米直徑，例如小于或等于20毫米直徑。此外，以分散在本公開的復合材料內為特征的納米粒子意在描述外源添加的納米粒子。這不同于能夠原位形成的納米粒子或與推定的（putative）納米粒子具有顯著類似性的形成物（formation），其中，例如，大分子結構，如粒子可包含內源生成的這些的聚集體。術語“基本無序”是指基于x-射線粉末衍射分析缺乏孔隙有序性。具體而言，通過在x-射線衍射圖中缺乏在與至少1納米的d值（或d間距）對應的衍射角的峰確定“基本無序”。“表面改性劑”通常包括賦予色譜固定相特定色譜功能的有機官能團。該多孔無機/有機雜化材料具有可另外用表面改性劑取代或衍生化的有機基團和硅烷醇基團。詞語“表面改性的”在本文中用于描述具有可另外用表面改性劑取代或衍生化的有機基團和硅烷醇基團的本公開的復合材料。“表面改性劑”包括（通常）賦予色譜固定相特定色譜功能的有機官能團。如本文中公開的表面改性劑例如通過衍生化或涂布和隨后交聯結合到基材上，以賦予基材該表面改性劑的化學特性。在一個實施方案中，雜化材料的有機基團反應以形成與表面改性劑的有機共價鍵。該改性劑可通過有機和聚合物化學中公知的許多機制（包括但不限于親核、親電子、環加成、自由基、卡賓、氮烯和碳陽離子反應）形成與該材料的有機基團的有機共價鍵。有機共價鍵被定義為涉及在有機化學的常見元素，包括但不限于氫、硼、碳、氮、氧、硅、磷、硫和鹵素之間形成共價鍵。此外，碳-硅和碳-氧-硅鍵被定義為有機共價鍵，而硅-氧-硅鍵不被定義為有機共價鍵。各種合成轉化是文獻中公知的，參見例如March、J.AdvancedOrganicChemistry,第3版,Wiley,NewYork,1985。本公開的色譜材料可包括包含二氧化硅芯材、金屬氧化物芯材、無機-有機雜化材料或一組嵌段共聚物芯材的那些。該芯材可以是如本文中論述的高純色譜芯組合物。類似地，該色譜芯材可以本文論述的高純材料的正常（例如非高純）形式/類似物/同系物。合適的芯材的實例包括，但不限于，傳統色譜二氧化硅材料、金屬氧化物材料、無機-有機雜化材料或它們的一組嵌段共聚物、陶瓷、氧化硅、亞氨基氮化硅、氮化硅、氮化硅鋁、二亞氨硅和氮氧化硅。合適的芯材的另一些實例（改性或未改性使用）描述在美國公開Nos.2009/0127177、2007/0135304、2009/0209722、2007/0215547、2007/0141325、2011/0049056、2012/0055860和2012/0273404以及國際公開No.WO2008/103423中，它們全文經此引用并入本文。色譜芯材可以是離散粒子的形式或可以是整料。該色譜芯材可以是任何多孔材料并可購得或可通過已知方法，如例如全文經此引用并入本文的美國專利Nos.4,017,528、6,528,167、6,686,035和7,175,913中描述的方法制造。在一些實施方案中，該色譜芯材可以是無孔芯。本領域普通技術人員可以改變色譜表面材料和色譜芯材的組成以提供增強的色譜選擇性、增強的柱化學穩定性、增強的柱效率和/或增強的機械強度。類似地，周圍材料的組成提供親水/親脂平衡（HLB）、表面電荷（例如等電點或硅烷醇pKa）和/或表面官能度的變化以增強色譜分離。此外，在一些實施方案中，該色譜材料的組成也可提供可用于進一步表面改性的表面官能。本公開的色譜材料的可離子化基團和疏水表面基團可以使用已知方法制備。一些可離子化改性劑可購得。例如，硅烷，包括氨基烷基三烷氧基硅烷、甲基氨基烷基三烷氧基硅烷和吡啶基烷基三烷氧基硅烷可購得。另一些硅烷，如氯丙基烷基三氯硅烷和氯丙基烷基三烷氧基硅烷也可購得。這些可以與咪唑鍵合和反應以制造咪唑基烷基甲硅烷基表面物類，或與吡啶鍵合和反應以制造吡啶基烷基甲硅烷基表面物類。另一些酸性改性劑也可購得，包括但不限于，磺丙基三硅烷醇、羧乙基硅烷三醇、2-(甲酯基)乙基甲基二氯硅烷、2-(甲酯基)乙基三氯硅烷、2-(甲酯基)乙基三甲氧基硅烷、n-(三甲氧基甲硅烷基丙基)乙二胺、三乙酸、(2-二乙基磷酰乙基)三乙氧基硅烷、2-(氯磺酰基苯基)乙基三氯硅烷和2-(氯磺酰基苯基)乙基三甲氧基硅烷。本領域技術人員已知使用常用合成程序，包括格氏反應和氫化硅烷化合成這些類型的硅烷。產物可通過色譜法、重結晶或蒸餾提純。其它添加劑，如異氰酸酯也可購得或可由本領域技術人員合成。常見的異氰酸酯形成程序是伯胺與光氣或被稱作三光氣的試劑的反應。一方面，本公開涉及一種從混合物中分離相關化合物的方法，所述方法包括(a)提供含有相關化合物的混合物；(b)將一部分所述混合物引入具有色譜柱的色譜系統；和(c)從所述柱中洗脫分離的相關化合物；其中所述柱具有固定相，其具有下列結構(i)：[X](W)a(Q)b(T)c　　(i)其中：X是含有二氧化硅、金屬氧化物、無機-有機雜化材料、一組嵌段共聚物或其組合的色譜基底；W選自氫和羥基，其中W鍵合到X的表面上；Q是在具有低水濃度的色譜條件下使隨時間經過的分析物保留變化最小化的第一取代基；T是色譜上保留分析物的第二取代基，其中T具有一個或多個單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團，各基團任選被脂族基團取代；且b和c是正數，0.05≤(b/c)≤100，且a≥0。在各種實施方案中，可以通過Q和/或T的選擇、表面上的Q和/或T的密度或其組合來控制或影響色譜材料的選擇性。在一些實施方案中，Q和T在保留相關化合物中起到一定作用。在另一些實施方案中，T選擇性保留各不同的相關化合物。在各種實施方案中，本公開提供一種配體可連接到其上的鍵合色譜材料。通過本發明的鍵合方法實現的高密度覆蓋率可以比傳統SFC材料中現行的硅烷鍵合化學高2X至3X。高覆蓋率和Q和/或T的其它性質的組合可防止表面硅烷醇與分析物的相互作用。在各種實施方案中，本公開提出鍵合相的高密度提高保留并防止由分析物與表面硅烷醇的相互作用或其它次級保留機制造成的保留漂移或變化。這些次級和次要選擇性組分的消除極大改進峰形和柱峰容量，尤其是對堿性分析物而言。在各種實施方案中，本公開提出基于偶聯化學的兩組分體系的使用產生混合表面官能團的均勻覆蓋。不同于混合粒子床（其中混合兩種單獨的具有不同表面化學的粒子），這種材料在各處具有均勻和可預測的表面特征。用這樣的材料填充的柱不容易由于柱填充過程中的差粒子混合或粒子類型偏析而發生色譜不穩定。在各種實施方案中，本公開提供由于使用單一粒子漿料而簡化的柱填充。在各種實施方案中，本公開提供在不使用基于混合或多粒子的床的情況下在單柱中對酸性、中性和堿性分析物具有提高的選擇性的色譜填充材料。在各種實施方案中，本公開提出可容易控制粒子表面上的組分的比率以改變載體的選擇性，提供寬范圍的色譜分離選項。在各種實施方案中，本公開提供通過表面反應性基團的聚合或通過在添加選擇性配體之前或之后添加交聯劑來形成硅烷表面改性劑的交聯膜的鍵合化學。在另一些實施方案中，本公開的色譜材料是無孔的。在另一實施方案中，本公開的色譜材料在大約1至大約14的pH下；在大約10至大約14的pH下；或在大約1至大約5的pH下水解穩定。另一方面，本公開提供如本文所述的材料，其中該色譜材料進一步包含分散在色譜表面內的納米粒子或多于一種納米粒子的混合物。在某些實施方案中，該納米粒子以納米復合材料的<20重量%、納米復合材料的<10重量%或納米復合材料的<5重量%存在。在另一些實施方案中，該納米粒子是結晶或非晶的，并可以是碳化硅、鋁、金剛石、鈰、炭黑、碳納米管、鋯、鋇、鈰、鈷、銅、銪、釓、鐵、鎳、釤、硅、銀、鈦、鋅、硼、它們的氧化物或它們的氮化物。在特定實施方案中，該納米粒子是包含一個或多個選自納米金剛石、碳化硅、二氧化鈦和立方氮化硼的部分的物質。在另一些實施方案中，該納米粒子可以小于或等于200納米直徑，小于或等于100納米直徑，小于或等于50納米直徑，或小于或等于20納米直徑。在一個或多個實施方案中，Q由下式表示：其中：n1是1-30的整數；n2是1-30的整數；R1、R2、R3和R4各自獨立地選自氫、羥基、氟、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、低級烷基、保護或脫保護醇和兩性離子；Z是(a)具有式(B1)x(R5)y(R6)zSi-的表面連接基團，其中x是1-3的整數，y是0-2的整數，z是0-2的整數，且x+y+z=3；R5和R6各自獨立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、取代或未取代芳基、環烷基、支鏈烷基、低級烷基、保護或脫保護醇、兩性離子基團和硅氧烷鍵；且B1是硅氧烷鍵；(b)通過直接碳-碳鍵形成或通過雜原子、酯、醚、硫醚、胺、酰胺、酰亞胺、脲、碳酸酯、氨基甲酸酯、雜環、三唑或聚氨酯鍵與表面有機官能雜化基團的連接；或(c)沒有共價連接到所述材料的表面上的吸附表面基團；Y是嵌入的極性官能團；且A選自親水端基、可官能化基團、氫、羥基、氟、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、低級烷基和可極化基團。在一個或多個實施方案中，T由下式表示：其中m1是1-30的整數；m2是1-30的整數；m3是1-3的整數；R7、R8、R9和R10各自獨立地選自氫、羥基、氟、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、低級烷基、保護或脫保護醇、兩性離子、芳烴基團和雜環芳烴基團；Z是(a)具有式(B1)x(R5)y(R6)zSi-的表面連接基團，其中x是1-3的整數，y是0-2的整數，z是0-2的整數，且x+y+z=3；R5和R6各自獨立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、取代或未取代芳基、環烷基、支鏈烷基、低級烷基、保護或脫保護醇、兩性離子基團和硅氧烷鍵；且B1是硅氧烷鍵；(b)通過直接碳-碳鍵形成或通過雜原子、酯、醚、硫醚、胺、酰胺、酰亞胺、脲、碳酸酯、氨基甲酸酯、雜環、三唑或聚氨酯鍵與表面有機官能雜化基團的連接；或(c)沒有共價連接到所述材料的表面上的吸附表面基團；Y是嵌入的極性官能團；D選自鍵、N、O、S、–(CH2)0-12–N–R11R12、–(CH2)0-12–O–R11、–(CH2)0-12–S–R11、–(CH2)0-12–N–(CH2)0-12–R11R12、–(CH2)0-12–O–(CH2)0-12–R11、–(CH2)0-12–S–(CH2)0-12–R11、–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–N–R11R12、–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–O–R11、–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–S–R11；–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–N–(CH2)0-12–R11R12、–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–O–(CH2)0-12–R11和–(CH2)0-12–S(O)1-2–(CH2)0-12–S–(CH2)0-12–R11，R11是第一單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團；且R12是氫、脂族基團或第二單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團，其中R11和R12任選被選自脂族基團、鹵素、羥基、硫醇、氨基、烷氧基、烷基羧基、烷硫基和硝基的一個或多個基團取代。在一些實施方案中，R11或R12的第一或第二單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團可以是具有至少2個芳環的多環芳烴或多雜環芳烴。R11或R12的第一或第二單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團也可以是具有至少3個芳環的多環芳烴或多雜環芳烴。R11或R12的第一或第二單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團也可以是具有至少4個芳環的多環芳烴或多雜環芳烴。在一個實施方案中，R11或R12的第一或第二單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團選自呋喃、吡咯、吡咯啉、噁唑、噻唑、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、異噁唑、異噻唑、苯、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、噻吩、茚、中氮茚、吲哚、異吲哚、吲哚啉、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、萘、喹嗪、喹啉、異喹啉、噌啉、酞嗪、喹唑啉、喹喔啉、1,8-萘啶、奎寧環、芴、咔唑、蒽、吖啶、吩嗪、吩噻嗪、吩噁嗪、芘及其衍生物，其中該基團未取代或任選被脂族基團取代。在另一些實施方案中，R11或R12的第一或第二單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團可以被至少一個C1-C24脂族基團取代。特別地，該基團可以被至少一個C2-C22脂族基團、一個C3-C20脂族基團、一個C4-C18脂族基團、一個C5-C16脂族基團、一個C6-C14脂族基團、一個C7-C12脂族基團、一個C8-C10脂族基團或一個前述碳長的任何組合的脂族基團，例如C8-C18脂族基團或如本公開中所述的其它各種尺寸的基團取代。R11或R12可以是氨基蒽（例如1-氨基蒽、2-氨基蒽或9-氨基蒽）或甲基氨基蒽（例如1-甲基氨基蒽、2-甲基氨基蒽或9-甲基氨基蒽）。該氨基蒽或甲基氨基蒽可以在環結構上被另外一個脂族基團，例如低級烷基取代。在一些實施方案中，該氨基蒽或甲基氨基蒽可具有式(X)-氨基-(Y)-烷基-蒽或(X)-甲基氨基-(Y)-烷基-蒽，其中X是1、2或9且Y是1-10，代表蒽上的碳位置（例如1-氨基-1-甲基-蒽；1-氨基-2-甲基-蒽；1-氨基-3-甲基-蒽；1-氨基-4-甲基-蒽；1-氨基-5-甲基-蒽；1-氨基-6-甲基-蒽；1-氨基-7-甲基-蒽；1-氨基-8-甲基-蒽；1-氨基-9-甲基-蒽；1-氨基-10-甲基-蒽；1-甲基氨基-1-甲基-蒽；1-甲基氨基-2-甲基-蒽；1-甲基氨基-3-甲基-蒽；1-甲基氨基-4-甲基-蒽；1-甲基氨基-5-甲基-蒽；1-甲基氨基-6-甲基-蒽；1-甲基氨基-7-甲基-蒽；1-甲基氨基-8-甲基-蒽；1-甲基氨基-9-甲基-蒽；和1-甲基氨基-10-甲基-蒽等）。在另一些實施方案中，該氨基蒽或甲基氨基蒽可具有式(X)-氨基-(Y)-烷基-(Z)-烷基-蒽或(X)-甲基氨基-(Y)-烷基-(Z)-烷基-蒽，其中X是1、2或9且Y和Z是1-10，代表蒽上的碳位置，條件是Y和Z不相同（例如1-氨基-1-甲基-2-甲基-蒽；1-氨基-1-甲基-3-甲基-蒽；1-氨基-1-甲基-4-甲基-蒽；1-氨基-1-甲基-5-甲基-蒽；1-氨基-1-甲基-6-甲基-蒽；1-氨基-1-甲基-7-甲基-蒽；1-氨基-1-甲基-8-甲基-蒽；1-氨基-1-甲基-9-甲基-蒽；1-氨基-1-甲基-10-甲基-蒽；等）。該氨基蒽或甲基氨基蒽可以在環結構上被第二極性基團，例如胺（例如1-氨基、4-N,N-二甲基氨基蒽）二取代。R11或R12可以是萘基胺（例如1-萘基胺或2-萘基胺）或甲基萘基胺（例如1-甲基萘基胺或2-甲基萘基胺）。該萘基胺或甲基萘基胺可以被另外一個脂族基團，例如低級烷基取代。在一些實施方案中，該萘基胺或甲基萘基胺可具有式(X’)-氨基-(Y’)-烷基-萘或(X’)-甲基氨基-(Y’)-烷基-萘，其中X’是1或2且Y’是1-8，代表萘上的碳位置（例如1-氨基-1-甲基-萘；1-氨基-2-甲基-萘；1-氨基-3-甲基-萘；1-氨基-4-甲基-萘；1-氨基-5-甲基-萘；1-氨基-6-甲基-萘；1-氨基-7-甲基-萘；1-氨基-8-甲基-萘；9和10位置不可取代；1-甲基氨基-1-甲基-萘；1-甲基氨基-2-甲基-萘；1-甲基氨基-3-甲基-萘；1-甲基氨基-4-甲基-萘；1-甲基氨基-5-甲基-萘；1-甲基氨基-6-甲基-萘；1-甲基氨基-7-甲基-萘；1-甲基氨基-8-甲基-萘；等）。在另一些實施方案中，該萘基胺或甲基萘基胺可具有式(X’)-氨基-(Y’)-烷基-(Z’)-烷基-萘或(X’)-甲基氨基-(Y’)-烷基-(Z’)-烷基-萘，其中X’是1或2且Y’和Z’是1-10，代表萘上的碳位置，條件是Y’和Z’不相同（例如1-氨基-1-甲基-2-甲基-萘；1-氨基-1-甲基-3-甲基-萘；1-氨基-1-甲基-4-甲基-萘；1-氨基-1-甲基-5-甲基-萘；1-氨基-1-甲基-6-甲基-萘；1-氨基-1-甲基-7-甲基-萘；1-氨基-1-甲基-8-甲基-萘；等）。R11或R12可以是氨基菲（例如1-氨基菲、2-氨基菲、3-氨基菲、4-氨基菲或9-氨基菲）或甲基氨基菲（例如1-甲基氨基菲、2-甲基氨基菲、3-甲基氨基菲、4-甲基氨基菲或9-甲基氨基菲）。該氨基菲或甲基氨基菲可以在環結構上被另外一個脂族基團，例如低級烷基取代。在一些實施方案中，該氨基菲或甲基氨基菲可具有式(X’’)-氨基-(Y’’)-烷基-菲或(X’’)-甲基氨基-(Y’’)-烷基-菲，其中X是1、2、3、4或9且Y是1-10，代表菲上的碳位置（例如1-氨基-1-甲基-菲；1-氨基-2-甲基-菲；1-甲基氨基-1-甲基-菲；1-甲基氨基-2-甲基-菲；等）。在另一些實施方案中，該氨基菲或甲基氨基菲可具有式(X’’)-氨基-(Y’’)-烷基-(Z’’)-烷基-菲或(X’’)-甲基氨基-(Y’’)-烷基-(Z’’)-烷基-菲，其中X是1、2、3、4或9且Y和Z是1-10（不計接合碳），代表菲上的碳位置，條件是Y和Z不相同（例如1-氨基-1-甲基-2-甲基-菲；等）。類似地，R11或R12可以是氨基芘（例如1-氨基芘、2-氨基芘、3-氨基芘、4-氨基芘或5-氨基芘）或甲基氨基芘（例如1-甲基氨基芘、2-甲基氨基芘、3-甲基氨基芘、4-甲基氨基芘或5-甲基氨基芘）。該氨基芘和甲基氨基芘可以與氨基蒽和甲基氨基蒽類似地被取代。類似地，R11或R12可以是氨基?（例如1-氨基?、2-氨基?、3-氨基?、4-氨基?、5-氨基?或6-氨基?）或甲基氨基?（例如1-甲基氨基?、2-甲基氨基?、3-甲基氨基?、4-甲基氨基?、5-甲基氨基?或6-甲基氨基?）。該氨基?和甲基氨基?可以與氨基蒽和甲基氨基蒽類似地被取代。在一些實施方案中，T由下列結構之一表示：其中各E獨立地為鍵或可任選被羥基、氟、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、低級烷基、保護或脫保護醇、兩性離子、芳烴基團或雜環芳烴基團取代的低級烷基，且其中Z、Y、R9、m1、m2和D如上定義。在另一些實施方案中，T由下列結構之一表示：其中Z、Y、R9、m1、m2和D如上定義。在一些實施方案中，b和c是正數，比率0.05≤(b/c)≤100，且a≥0。在一些實施方案中，Q和T不同，而在另一些實施方案中，Q和T相同。Q可包括兩個或更多個不同的部分，且T可包括兩個或更多個不同的部分。在一些實施方案中，第一、第二、第三、第四和第五分數各自獨立地為大約0-100、1-99、5-95、10-90、20-80、30-70、40-60、0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%。在一個或多個實施方案中，Q是非極性的。在一些實施方案中，Q包含硼酸酯或硝基官能團。在一些實施方案中，Q由下式之一表示：其中Z可包括具有式(B1)x(R5)y(R6)zSi-的表面連接基團，其中x是1-3的整數，y是0-2的整數，z是0-2的整數，且x+y+z=3。R5和R6在每一處可以獨立地代表甲基、乙基、正丁基、異丁基、叔丁基、異丙基、叔己基、取代或未取代芳基、環烷基、支鏈烷基、低級烷基、保護或脫保護醇或兩性離子基團，且B1可代表硅氧烷鍵。在另一實施方案中，Z是通過直接碳-碳鍵形成或通過雜原子、酯、醚、硫醚、胺、酰胺、酰亞胺、脲、碳酸酯、氨基甲酸酯、雜環、三唑或聚氨酯鍵與表面有機官能雜化基團的連接。在再一實施方案中，Z是沒有共價連接到所述材料的表面上的吸附表面基團。在一些實施方案中，T由下式之一表示：其中Z可包括具有式(B1)x(R5)y(R6)zSi-的表面連接基團，其中x是1-3的整數，y是0-2的整數，z是0-2的整數，且x+y+z=3。R5和R6在每一處可以獨立地代表甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、取代或未取代芳基、環烷基、支鏈烷基、低級烷基、保護或脫保護醇、兩性離子基團和硅氧烷鍵，且B1可代表硅氧烷鍵。在一些實施方案中，Z是通過直接碳-碳鍵形成或通過雜原子、酯、醚、硫醚、胺、酰胺、酰亞胺、脲、碳酸酯、氨基甲酸酯、雜環、三唑或聚氨酯鍵與表面有機官能雜化基團的連接。在一些實施方案中，Z是沒有共價連接到所述材料的表面上的吸附表面基團。在一些實施方案中，R11或R12的第一或第二單環芳族、多環芳族、雜環芳族或多雜環芳族基團可以轉化成環烯烴。例如，吡啶基團在某些條件下在溶液中可轉化成環烯烴。在一些情況下，環烯烴保持足夠的不飽和度以從混合物中保留并分離結構上相關的相關化合物（一種或多種）。在特定情況下，含有環烯烴的本公開的固定相可保留、分離和解析與維生素相關的關鍵對（例如D2和D3，K1和K2）。Q和T取代基也可以聚合。Q和T取代基可以聚合到各自本身上，例如Q-Q、T-T，或互相聚合，例如Q-T。如圖4中所示，聚合可以在表面層面在硅氧烷基團之間和/或在烴取代基之間發生。取代基之間的聚合可產生交聯表面涂層或在該表面涂層上的第二涂層，例如也可以聚合或不聚合的取代基或兩者的混合物的第二層。Q和T取代基的聚合度可變。例如，第一分數的Q可以鍵合到X上，且第二分數的Q可以聚合。同樣地，第一分數的T可以鍵合到X上，且第二分數的T可以聚合。在另一實施方案中，第一分數的Q可以鍵合到X上，第二分數的Q可以聚合，第三分數的T可以鍵合到X上，且第四分數的T可以聚合。Q和T的聚合部分可以自聚合或互相聚合。在任何上述方面的一個或多個實施方案中，X是具有在色譜條件下通過色譜流動相進行烷氧基化的芯表面的高純度色譜材料。X可以是具有在色譜條件下通過色譜流動相進行烷氧基化的芯表面的色譜材料。在一些實施方案中，包括Q的官能團是二醇。包括T的官能團可以是胺、醚、硫醚或其組合。T可包括適用于手性分離的手性官能團，Q可包括適用于手性分離的手性官能團，或T和Q可以都包括適用于手性分離的手性官能團。在上述方面的一個或多個實施方案中，比率b/c為大約0.05-75、0.05-50、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80或90。在一些實施方案中，X的表面不包括二氧化硅，且b=0或c=0。在一些實施方案中，合計表面覆蓋率大于大約0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、5、6、7或8微摩爾/平方米。在上述方面的一些實施方案中，該色譜固定相表現出經30天≤5%、經30天≤4%、經30天≤3%、經30天≤2%、經30天≤1%、經10天≤5%、經10天≤4%、經10天≤3%、經10天≤2%、經10天≤1%、經3天≤5%、經3天≤4%、經3天≤3%、經3天≤2%、經3天≤1%、經30次運行≤5%、經30次運行≤4%、經30次運行≤3%、經30次運行≤2%、經30次運行≤1%、經10次運行≤5%、經10次運行≤4%、經10次運行≤3%、經10次運行≤2%、經10次運行≤1%、經3次運行≤5%、經3次運行≤4%、經3次運行≤3%、經3次運行≤2%或經3次運行≤1%的保留漂移或變化。在一些實施方案中，該芯材基本由二氧化硅材料構成。任選地，該芯材基本由有機-無機雜化材料或表面多孔材料構成。在一個或多個實施方案中，該芯材基本由具有雜化表面層的無機材料、具有無機表面層的雜化材料、周圍雜化層或具有不同的雜化表面層的雜化材料構成。該固定相材料可任選為多粒子、整料或表面多孔材料的形式。在一些實施方案中，該固定相材料沒有色譜增強性孔隙幾何，而在另一些實施方案中，該固定相材料具有色譜增強性孔隙幾何。該固定相材料可以是球形材料、非球形材料（例如包括環圈、多面體）的形式。在某些實施方案中，該固定相材料具有高度球形的芯形態、桿形的芯形態、彎桿形的芯形態、環圈形的芯形態；或啞鈴形的芯形態。在某些實施方案中，該固定相材料具有高度球形、桿形、彎桿形、環圈形或啞鈴形的形態的混合物。在一些實施方案中，該固定相材料具有大約25至1100平方米/克、大約150至750平方米/克或大約300至500平方米/克的表面積。在一些實施方案中，該固定相材料具有大約0.2至2.0立方厘米/克或大約0.7至1.5立方厘米/克的孔隙體積。在一些實施方案中，該固定相材料具有小于大約105平方米/克、小于大約80平方米/克或小于大約50平方米/克的微孔表面積。該固定相材料可具有大約20至1500?、大約50至1000?、大約60至750?或大約65至200?的平均孔徑。在一些實施方案中，所述多粒子具有大約0.2至100微米、大約0.5至10微米或大約1.5至5微米的尺寸。在一個或多個實施方案中，X包括二氧化硅芯，c=0，且Q具有≥2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.5、4.0、4.5或5微摩爾/平方米的合計表面覆蓋率；或X包括非二氧化硅芯或二氧化硅-有機雜化芯，c=0，且Q具有≥0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5或5微摩爾/平方米的合計表面覆蓋率；或b>0，c>0，且Q具有≥0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5或5微摩爾/平方米的合計表面覆蓋率。在另一些實施方案中，Q具有≥0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0微摩爾/平方米的合計表面覆蓋率。在另一些實施方案中，T具有≥0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.5、3.0或3.5微摩爾/平方米的合計表面覆蓋率。T也可具有大約0.1至大約4.0微摩爾/平方米，或大約0.2至大約3.9微摩爾/平方米，或大約0.3至大約3.8微摩爾/平方米，或大約0.4至大約3.7微摩爾/平方米，或大約0.5至大約3.6微摩爾/平方米，或大約1.0至大約3.5微摩爾/平方米，或大約1.2至大約3.0微摩爾/平方米，或數值的任何組合，如大約3.0至大約4.0微摩爾/平方米的合計表面覆蓋率。在另一些實施方案中，Q和T的總合計覆蓋率≥0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.5、6.0或6.5微摩爾/平方米。該色譜固定相可用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法。該色譜固定相可包括徑向調節孔隙、非徑向調節孔隙、有序孔隙、非有序孔隙、單分散孔隙、非單分散孔隙、光滑表面、粗糙表面或其組合。在一個或多個實施方案中，T具有一個可離子化基團，T具有多于一個可離子化基團，T具有兩個或更多個pKa相同的可離子化基團，或T具有兩個或更多個pKa不同的可離子化基團。在另一實施方案中，本公開涉及具有下列結構(i)的色譜固定相：[X](W)a(Q)b(T)c　　(i)其中X是是含有二氧化硅、金屬氧化物、無機-有機雜化材料、一組嵌段共聚物或其組合的色譜基底；W選自氫和羥基，其中W鍵合到X的表面上；Q是在具有低水濃度的色譜條件下使隨時間經過的分析物保留變化最小化的第一取代基；T是色譜上保留分析物的第二取代基，其中T具有一個或多個芳烴、多環芳烴、雜環芳烴或多雜環芳烴基團，各基團任選被脂族基團取代；且b和c是正數，0.05≤(b/c)≤100，且a≥0。在另一實施方案中，本公開涉及用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法的柱、毛細管柱、微流體器件或裝置，其包含具有至少一個限定具有入口和出口的室的壁的外殼和布置在其中的如本公開中所述的固定相，其中所述外殼和固定相適用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法。在另一實施方案中，本公開涉及用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法的試劑盒，其包含具有至少一個限定具有入口和出口的室的壁的外殼和布置在其中的如本公開中所述的固定相，其中所述外殼和固定相適用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法；和用所述外殼和固定相實施正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法的說明書。該試劑盒可包括具有至少一個限定具有入口和出口的室的壁的外殼和布置在其中的根據本公開的任一實施方案的固定相。該裝置可具有預成型熔塊（frit）、由互連材料生成的熔塊或無熔塊的裝置。該外殼和固定相適用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法或其組合。另外，可包括用所述外殼和固定相實施正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法或其組合的說明書。相應地，本公開的試劑盒可用于實施本文所述的本發明的方法。另外，本發明的試劑盒可用于分析各種不同的樣品和樣品類型，包括下文描述的那些。在一個或多個實施方案中，本發明可考慮含有本公開的方面的試劑盒以降低或減輕保留漂移或變化的影響。例如，試劑盒可含有填充本公開的固定相介質的色譜柱。在一些實施方案中，該填充柱可直接用于標準色譜系統（例如市售色譜系統，如WatersAcquity?色譜系統）。試劑盒可進一步含有使用說明書。另外，試劑盒可進一步含有用于校準儀器和/或證實基本不存在保留漂移或變化的純分析物的儲備樣品。試劑盒可包括任何或所有上述組件（例如固定相、填充柱或色譜裝置）以減輕保留漂移或變化的影響。在另一實施方案中，本公開涉及一種減輕或防止正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法中的保留漂移的方法，其包括使用包含如本公開中所述的色譜固定相的色譜裝置色譜分離樣品，由此減輕或防止保留漂移。在一個或多個實施方案中，減輕或防止保留漂移或變化包括經30天≤5%、經30天≤4%、經30天≤3%、經30天≤2%、經30天≤1%、經10天≤5%、經10天≤4%、經10天≤3%、經10天≤2%、經10天≤1%、經3天≤5%、經3天≤4%、經3天≤3%、經3天≤2%、經3天≤1%、經30次運行≤5%、經30次運行≤4%、經30次運行≤3%、經30次運行≤2%、經30次運行≤1%、經10次運行≤5%、經10次運行≤4%、經10次運行≤3%、經10次運行≤2%、經10次運行≤1%、經3次運行≤5%、經3次運行≤4%、經3次運行≤3%、經3次運行≤2%或經3次運行≤1%的保留漂移或變化。在一些實施方案中，減輕或防止保留漂移或變化包括基本消除色譜材料的烷氧基化和/或脫烷氧基化對保留的影響。本文所用的化學改性色譜芯材的概念被理解為包括例如用極性硅烷或其它官能團將色譜芯官能化，由此減輕或避免保留漂移或變化。例如，官能化可基本防止分析物和色譜芯之間的色譜相互作用（例如有效消除芯表面硅烷醇和/或烷氧基化硅烷醇的色譜影響）。在一些情況下，官能化（例如使用非極性基團）可降低該柱的保留力。因此，在各種實施方案中，色譜芯材的官能化可包括使用親水、極性、可離子化和/或帶電的官能團，其與分析物色譜相互作用以保持或實現色譜有用的總體保留。可以例如通過標準鍵合化學引入這樣的封端基團。在一些實施方案中，官能化提供永久接合。因此，選擇適合該色譜相的官能化是重要的。在優選實施方案中，該色譜材料具有色譜合意性質（例如總體保留）。因此在一些實施方案中選擇具有可模仿傳統色譜材料的合意（例如總體保留）性質的性質的官能化是重要的。在各種實施方案中，可以選擇官能團的化學性質以實現所需效果。例如，可以使用一個或多個親水、極性、可離子化和/或帶電的官能團實現與分析物（例如色譜可接受的保留）和/或流動相（例如排斥可能使色譜芯表面烷氧基化的醇）的所需相互作用。同樣地，可以選擇端基尺寸和/或空間以掩蔽芯表面和/或實現手性分離。類似地，可以改變官能化的濃度。在一些實施方案中，較大和/或較強相互作用的官能團可在較低濃度下（例如與較小官能團相比）減輕或避免保留漂移或變化。在另一些實施方案中，可以針對所需性質調節覆蓋率。例如，非極性官能團可以在比極性官能團低的覆蓋率下使用（例如為了保持所需保留）。在各種實施方案中，官能化可以使用一個或多個極性或非極性端基或其組合。在一些實施方案中，提高或降低色譜介質的表面積以補償由于官能團的極性改變而降低或提高的保留。在另一實施方案中，本公開涉及一種制備如本公開中所述的固定相的方法，其包括使色譜基底與具有側反應性基團的硅烷偶聯劑反應；使包含一個或多個芳烴、多環芳烴、雜環芳烴或多雜環芳烴基團的第二化學試劑與所述側反應性基團反應；和中和任何剩余未反應的側反應性基團，由此制造所述固定相。在另一實施方案中，本公開涉及一種制備如本公開中所述的固定相的方法，其包括使具有側反應性基團的硅烷偶聯劑低聚；使芯表面與低聚的硅烷偶聯劑反應；使包含一個或多個芳烴、多環芳烴、雜環芳烴或多雜環芳烴基團的第二化學試劑與所述側反應性基團反應；和中和任何剩余未反應的側反應性基團，由此制造所述固定相。在一個或多個實施方案中，Q衍生自具有下列結構之一的試劑：。在一些實施方案中，Y包括下列結構之一：其中與Y基團締合的R6和R7基團各自獨立地為脂族基團。在一些實施方案中，Y基團也可以是鍵或脂族基團。上述方法可用于制造如本文所述的任何材料（例如色譜固定相材料）。例如，本公開的方法可包括使色譜固定相（例如二氧化硅粒子）與化學試劑（例如如本文所述的任何上述試劑）反應以化學改性固定相的表面以減輕保留漂移或變化的影響的方法。本公開包括包含本文所述的色譜材料的各種裝置（例如色譜柱、毛細管和微流體器件及其使用系統）。盡管下文論述一些示例性實例，本領域普通技術人員會理解，本公開可考慮許多不同的實施方案，包括但不限于色譜柱、裝置、使用方法或試劑盒。在一些實施方案中，本公開提供用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法或其組合的柱或裝置。該柱或裝置包括具有至少一個限定具有入口和出口的室的壁的外殼以及布置在其中的根據本公開的任一實施方案的固定相。該裝置可具有預成型熔塊、由互連材料生成的熔塊或無熔塊的裝置。該外殼和固定相適用于正相色譜法、高壓液相色譜法、溶劑化氣相色譜法、超臨界流體色譜法、亞臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、親水相互作用液相色譜法或疏水相互作用液相色譜法或其組合。相應地，本公開的裝置可含有（例如填充）本公開的材料（例如色譜固定相，如適用于降低或減輕保留漂移或變化的化學改性的固定相）。此外，本公開的裝置可用于進行如本文所述的本公開的方法。在一個實施方案中,本公開為填充柱形式。該柱可以填充本文所述的固定相（例如色譜材料）。這樣的柱可用于實施不同類型的色譜法（例如正相色譜法、超臨界流體色譜法、基于二氧化碳的色譜法、疏水相互作用液相色譜法、親水相互作用液相色譜法、亞臨界流體色譜法、高壓液相色譜法和溶劑化氣相色譜法），同時減輕或避免保留漂移或變化。該柱可以與現有色譜平臺，如市售色譜系統，包括WatersAlliance?HPLC系統、WatersAcquity?系統或WatersUPC2?系統結合使用。本公開的柱可用于許多不同的質量處理量（例如分析規模色譜法、制備規模色譜法），同時減輕保留漂移或變化的影響。同樣地，可以在毛細管和微流體器件及其使用系統（例如可購得并且為本領域普通技術人員已知）中具體實施本公開。本領域普通技術人員容易理解柱、毛細管和微流體器件和相關系統的選擇。在各種實施方案中，根據本公開的材料可用于SFC、HPLC和/或UHPLC系統上使用的微徑柱。在各種實施方案中，根據本公開的材料可用于快速平衡柱、長壽命柱和具有水穩定柱的SFC。本公開可用于從來自許多不同領域，例如來自臨床化學、醫學、獸醫學、法醫化學、藥理學、食品工業、職業安全和環境污染的許多不同樣品中保留、分離和/或分析許多不同的化合物。所述多種樣品包括但不限于，小有機分子、蛋白質、核酸、脂質、脂肪酸、碳水化合物、聚合物等。類似地，本公開可用于分離小分子、極性小分子、用于藥品、生物分子、抗體、聚合物和低聚物、糖、聚糖分析、石油化學分析、脂質分析、肽、磷酸肽、寡核苷酸、DNA、RNA、極性酸、多環芳烴、食品分析、化學分析、生物分析、濫用藥物、法醫學、農藥、農用化學品、生物仿制藥、制劑的分析物。可用本公開色譜分離的分析物可包括基本任何相關分子，包括例如小有機分子、脂質、肽、核酸、合成聚合物。臨床化學目標分析物可包括存在于生物體（例如人體、動物體、真菌、細菌、病毒等）中的任何分子。例如，臨床化學目標分析物包括，但不限于，蛋白質、代謝產物、生物標記和藥物。人類醫學和獸醫學目標分析物可包括可用于診斷、預防或治療對象的疾病或狀況的任何分子。例如，人類醫學和獸醫學目標分析物包括，但不限于，疾病標志物、預防藥或治療藥。法醫化學目標分析物可包括取自犯罪現場的樣品，如取自受害者身體的樣品（例如組織或體液樣品、毛發、血液、精液、尿等）中存在的任何分子。例如，臨床化學目標分析物包括，但不限于，毒劑、藥物和它們的代謝產物、生物標記和鑒別化合物。藥理學目標分析物可包括作為藥物或其代謝產物或可用于藥物的設計、合成和監測的任何分子。例如，藥理學目標分析物包括，但不限于，預防和/或治療藥、它們的前藥、中間體和代謝產物。藥理學分析可包括例如與通用名藥的批準、制造和監測相關的生物等效性試驗。食品工業和農業目標分析物可包括與監測食品、飲料和/或其它食品工業/農業產品的安全性有關的任何分子。來自食品工業領域的目標分析物的實例包括，但不限于，病原體標記、變應原（例如麩質和堅果蛋白）和霉菌毒素。目標分析物可包括多肽（例如天然和/或非天然存在的氨基酸，如Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Trp、Cys、Met、Ser、Thr、Tyr、His、Lys、Arg、Asp、Glu、Asn、Gln、硒半胱氨酸、鳥氨酸、瓜氨酸、羥基脯氨酸、甲基賴氨酸、羧基谷氨酸的聚合物）、肽、蛋白質、糖蛋白、脂蛋白；肽-核酸；激素（如肽激素（例如TRH和加壓素）以及合成和工業多肽。在一些實施方案中，相關化合物是飽和或不飽和脂質、維生素或多環芳烴。本文所用的術語“飽和”是指在該分子的酰基位點不含雙鍵的成分。本文所用的術語“飽和脂質”是指在該分子的酰基鏈位點不含雙鍵的脂肪和油的成分。本文所用的術語“不飽和”是指在該分子中含有一個或多個不飽和位點的成分。本文所用的術語“不飽和脂質”是指在該分子中含有一個或多個不飽和位點的脂肪和油的成分。這些可存在于該分子的脂肪酸部分中，如在甘油三酯、磷脂和糖脂中，或在該分子中的烷基鏈中，如在類胡蘿卜素、烴和脂溶性維生素中。該脂質可選自飽和和不飽和脂肪酸、磷脂、甘油脂、甘油磷脂、溶血磷酸甘油脂（lysophosphoglycerolipid）、鞘脂、甾醇脂、孕烯醇酮脂、糖脂、類胡蘿卜素、蠟和聚酮化合物。在另一實施方案中，本公開可用于保留、分離和解析多環芳烴和相關化合物。多環芳烴（PAHs）構成一類由稠芳環構成的非官能化芳族化合物。有大約2000種化合物被歸類為PAHs。PAHs和它們的衍生物由于燃燒過程，如化石燃料燃燒而廣泛存在于環境中。它們強結合到土壤有機質（腐殖酸）上且它們在土壤和其它環境區（environmentalcompartment）中的降解速率通常緩慢。此外，到達水道的PAHs迅速轉移到沉積物中。PAHs也在民用和工業燃燒工藝，如提取植物油、草藥、香料和其它食材、熏制和炙烤食材等的過程中形成。PAHs是有毒致癌的化合物。它們的存在和量的控制在食品安全和健康與安全規章的領域中越來越重要。PAHs的幾個效應是酶誘導、免疫抑制、致畸性和促進腫瘤。在特定實施方案中，脂質可以是飽和或不飽和的脂肪酸、單酰基甘油酯、二酰基甘油酯、三酰基甘油酯、磷脂或類固醇。甘油三酯（TG、三酰甘油、TAG或三酰基甘油酯）是衍生自甘油和三個脂肪酸的酯。作為血脂，它們有助于脂肪和血糖從肝中雙向轉移。存在許多甘油三酯：取決于油來源，一些高度不飽和，一些較低度。甘油三酯是植物油（通常更不飽和）和動物脂肪（通常更飽和）的主要成分。甘油三酯是人皮膚油脂的主要組分。類固醇是含有互相連接的四個環烷烴環的特征排列的一類有機化合物。類固醇的實例包括膳食脂肪膽固醇、性激素雌二醇和睪酮和抗炎藥地塞米松。類固醇的核由鍵合在一起的17個碳原子構成，它們呈四個稠環的形式：三個環己烷環和一個環戊烷環。類固醇通過連接到這種四環核上的官能團和這些環的氧化態改變。甾醇是類固醇的特殊形式，其具有在位置-3的羥基和衍生自膽甾烷的骨架。在植物、動物和真菌中發現成百上千的不同類固醇。所有類固醇都在細胞中由甾醇羊毛甾醇（動物和真菌）或由環阿屯醇（植物）制成。羊毛甾醇和環阿屯醇都衍生自三萜烯角鯊烯的環化。在另一些實施方案中，相關化合物可以是選自維生素C、維生素B或其衍生物或組合的脂溶性維生素。脂溶性維生素是相關的，因為它們難以溶解，通常需要強有機溶劑并經RPLC分離。通常，使用SFC條件借助C18硅烷（ODS）或其它烷基鍵合相分離脂溶性維生素。這些方法通常在流動相中使用極弱的助溶劑和較高百分比的CO2。本公開的優點之一是用富π電子的選擇因子（selector），例如1-氨基蒽改性固定相。將富π電子的選擇因子偶聯到固定相上使兩個關鍵對，如維生素D2和D3，或K1和K2之間的選擇性色譜分離最大化。本公開的另一優點是固定相具有pKa相對較高的選擇因子以致不需要酸或堿性添加劑實現該分離。在一個實施方案中，本公開涉及使用無酸添加劑和/或堿性添加劑的流動相的方法。在另一些實施方案中，本公開涉及使用具有少于5.0%或4.0%或3.0%或2.0%、1.0%或0.5%或0.2%或0.1%或0.05%的酸添加劑和/或堿性添加劑的流動相的方法。僅使用用甲醇作為助溶劑改性的二氧化碳，可以產生快速通用的方法。例如，使用具有例如1-氨基蒽作為選擇因子的本公開的固定相實現上述維生素關鍵對的分離。在一個實施方案中，維生素關鍵對之間的分辨率水平高于現行方法（每相同柱長度的分辨率；使用sub-2μm粒子和50mm柱長度）。本公開可用于保留、分離和解析維生素C和相關化合物。維生素C[2-氧代-L-蘇-己烯酸-1,4-內酯2,3-烯二醇（2-oxo-L-threo-hexono-1,4-lactone2,3-enediol）]或L-抗壞血酸是水溶性維生素和人體的必需營養素。其是正常生長和發育以及身體所有部分中的組織修復所需的膠原形成中所必需的。維生素C也充當阻斷自由基造成的損傷并直接減少有毒化學品和污染物的抗氧化劑。由于人類體內不制造維生素C，其主要獲自膳食來源，如水果和蔬菜。膳食維生素C的缺乏可能造成維生素C缺乏癥。重度維生素C缺乏癥，也稱作“壞血病”，導致在皮膚上形成肝斑、海綿狀齦（spongygum）和粘膜出血或甚至死亡。現在，維生素C不僅用作膳食補充劑，還用作一些病毒感染和晚期癌癥的輔助療法。預防缺乏癥的成年人維生素C推薦每日攝取量是女性75mg和男性90mg，兩者的可耐受上限都是2,000mg。對于在解毒和癌癥治療中的治療用途，以高得多的劑量靜脈給予維生素C。盡管維生素C毒性臨床少見，但相對較高的口服攝入劑量可能造成胃不適和腹瀉。已經開發出對維生素C血濃度的測定并被患者和醫師用于評估營養狀況或優化治療劑量。這些化合物的測量是維生素C營養狀況和某些維生素C類似物的效力的有用指標。在另一實施方案中，本公開可用于保留、分離和解析維生素B和相關化合物。B族維生素是在細胞代謝中起到重要作用的一類水溶性維生素。B族維生素曾經被認為是單一維生素，簡稱為維生素B。后來的研究表明它們是通常在相同食品中共存的化學上不同的維生素。一般而言，含有所有8重的補充劑被稱作復合維生素B。單獨的B維生素補充劑由該維生素的專用名表示（例如B1、B2、B3等）。B族維生素的名單包括：維生素B1（硫胺素）、維生素B2（核黃素）、維生素B3（煙酸或煙酰胺）、維生素B5（泛酸）、維生素B6（吡哆醇、吡哆醛或吡哆胺或鹽酸吡哆醇)、維生素B7（生物素）、維生素B9（葉酸）、維生素B12（各種鈷胺素；在維生素補充劑中通常被稱作氰鈷胺素）。維生素B化合物的作用不同。例如，硫胺素在由碳水化合物生成能量中起到核心作用。其參與RNA和DNA生產，以及神經功能。其活性形式是被稱作焦磷酸硫胺素（TPP）的輔酶，其參與丙酮酸鹽在代謝中轉化成乙酰輔酶A（CoA）。核黃素參與用于電子傳遞鏈、檸檬酸循環以及脂肪酸分解代謝（β-氧化）的能量生產。煙酸由兩種結構構成：煙酸和煙酰胺。煙酸有兩種輔酶形式：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）。兩者都在葡萄糖、脂肪和醇的代謝中的能量轉移反應中起到重要作用。NAD在代謝反應過程中攜帶氫和它們的電子，包括從檸檬酸循環到電子傳遞鏈的路徑。NADP是脂質和核酸合成中的輔酶。泛酸參與脂肪酸和碳水化合物的氧化。可由泛酸合成的輔酶A參與氨基酸、脂肪酸、酮、膽固醇、磷脂、甾類激素、神經遞質（如乙酰膽堿）和抗體的合成。吡哆醇通常以5'-磷酸吡哆醛（PLP）的形式儲存在體內，其是維生素B6的輔酶形式。吡哆醇參與氨基酸和脂質的代謝；神經遞質和血紅蛋白的合成，以及煙酸（維生素B3）的生產。吡哆醇也在糖異生中起到重要作用。生物素在脂質、蛋白質和碳水化合物的代謝中起到關鍵作用。其是四種羧化酶的關鍵輔酶：參與由乙酸鹽合成脂肪酸的乙酰輔酶A羧化酶；參與糖異生的丙酰輔酶A羧化酶；參與亮氨酸代謝的β-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶；和參與能量、氨基酸和膽固醇的代謝的丙酮酸輔酶A羧化酶。葉酸充當四氫葉酸（THF）形式的輔酶，其參與核酸和氨基酸的代謝中的單碳單位的轉移。THF參與嘧啶核苷酸合成，因此是正常細胞分裂所需的，尤其是在妊娠和嬰兒期，它們是迅速生長期。葉酸也有助于紅細胞生成（紅血球的生產）。維生素B12參與碳水化合物、蛋白質和脂質的細胞代謝。其是骨髓、神經鞘和蛋白質中的血細胞生產中必需的。維生素B12充當蛋氨酸合成酶與甲鈷胺的反應和甲基丙二酰輔酶A變位酶與腺苷鈷胺素的反應的中間代謝中的輔酶。這些維生素的任何缺乏的影響不同。維生素B1硫胺素缺乏造成腳氣病。神經系統的這種疾病的癥狀包括體重減輕、情緒紊亂、韋尼克腦病（感官知覺受損）、虛弱和肢體疼痛、不規則心跳周期和水腫（身體組織腫脹）。在重癥病例中可能發生心力衰竭和死亡。慢性硫胺素缺乏癥也會造成科爾薩科夫綜合征，以健忘和代償性虛構癥為特征的不可逆癡呆。維生素B2核黃素缺乏造成核黃素缺乏癥。癥狀可能包括唇損害（唇干裂）、對陽光的高敏感性、口角炎、舌炎（舌頭炎癥）、脂溢性皮炎或假梅毒（特別影響陰囊或大陰唇和口腔）、咽炎（咽喉痛）、充血，和咽喉和口腔粘膜的水腫。維生素B3煙酸缺乏與色氨酸缺乏一起造成糙皮病。癥狀包括攻擊、皮炎、失眠、虛弱、精神錯亂和腹瀉。在重癥病例中，糙皮病可能造成癡呆和死亡（3(+1)Ds:皮炎、腹瀉、癡呆和死亡）。維生素B5泛酸缺乏會造成痤瘡和感覺異常，盡管這不常見。維生素B6吡哆醇缺乏可能造成小紅細胞性貧血（因為磷酸吡多酸是血紅素合成的輔助因子）、抑郁、皮炎、高血壓（血壓過高）、保水性和升高的高半胱氨酸水平。維生素B7生物素缺乏通常不會在成年人中造成癥狀，但在嬰兒中可能造成生長障礙和神經障礙。即使膳食生物素攝入正常，多發性羧化酶缺乏癥（先天性代謝異常）也會造成生物素缺乏。維生素B9葉酸缺乏造成巨紅細胞性貧血和升高的高半胱氨酸水平。孕婦體內的缺乏會造成出生缺陷。在妊娠期間通常推薦補充。研究已表明葉酸也可能減慢年齡對大腦的潛在影響。維生素B12鈷胺素缺乏造成巨紅細胞性貧血、升高的高半胱氨酸、周圍神經病、記憶喪失和其它認知缺陷。其最可能在老年人中發生，因為經腸道的吸收隨年齡衰減；自身免疫病惡性貧血是另一常見原因。其也會造成躁狂癥和精神病的癥狀。在罕見的極端情況下，會造成麻痹。這些化合物的測量是維生素B營養狀況和某些維生素B類似物的效力的有用指標。在另一些實施方案中，相關化合物可以是選自維生素D、維生素A、維生素K、維生素E、β胡蘿卜素或其衍生物或組合的脂溶性維生素。本公開可用于保留、分離和解析維生素D和相關化合物。維生素D是在鈣穩態的正調控中具有重要生理作用的必需營養素。維生素D可以在皮膚中通過暴露在陽光下從頭合成或其可以從膳食中吸收。維生素D有兩種形式；維生素D2（麥角鈣化醇）和維生素D3（膽鈣化醇）。維生素D3是由動物從頭合成的形式。其也是添加到美國生產的乳制品和某些食品中的常見補充劑。膳食和內在合成的維生素D3都必須經過代謝活化才能生成生物活性代謝產物。在人類中，維生素D3活化的初始步驟主要在肝中發生并涉及羥基化以形成中間代謝產物25-羥基膽鈣化醇（骨化二醇），其在25位置酶促羥基化。骨化二醇是維生素D3在循環中的主要形式。循環骨化二醇隨后被腎轉化以形成1,25-二羥基維生素D3（骨化三醇），其通常被認為是生物活性最高的維生素D3代謝產物。維生素D2源自真菌和植物來源。許多非處方膳食補充劑含有麥角鈣化醇（維生素D2）而非膽鈣化醇（維生素D3）。Drisdol（在美國可用的維生素D的唯一高效力處方形式）用麥角鈣化醇配制。維生素D2在人體內經過與維生素D3類似的代謝活化途徑，以形成代謝產物骨化二醇和骨化三醇。維生素D2和維生素D3長期被認為在人體內生物等效，但最近的報道表明維生素D的這兩種形式在生物活性和生物利用度方面不同。這些化合物的測量是維生素D營養狀況和某些維生素D類似物的效力的有用指標。在另一實施方案中，本公開可用于保留、分離和解析維生素A和相關化合物。維生素A是一類不飽和營養有機化合物，其包括視黃醇、視黃醛、視黃酸和幾種前維生素A類胡蘿卜素，其中β-胡蘿卜素最重要。維生素A具有多種功能：其對生長和發育、免疫系統的維持和良好的視力是重要的。眼睛視網膜需要視黃醛形式的維生素A，其與蛋白質視蛋白合并形成視紫紅質光吸收分子，所述分子是低光視覺（暗視覺）和色視覺所必需的。維生素A也作為視黃醇的不可逆氧化形式（被稱作視黃酸）發揮非常不同的作用，其是對上皮細胞和其它細胞重要的類激素生長因子。在動物來源的食品中，維生素A的主要形式是酯，主要棕櫚酸視黃酯，其在小腸中轉化成視黃醇（化學上是醇）。視黃醇形式充當該維生素的儲存形式并可以轉化成和轉化自其視覺活性的醛形式視黃醛。相關的酸（視黃酸）（可由維生素A不可逆合成的代謝產物）只有部分維生素A活性并且沒有在視網膜中對視循環發揮作用。視黃酸用于生長和細胞分化。維生素A的所有形式具有β-紫羅蘭酮環，類異戊二烯鏈連接到其上，被稱作視黃基。這兩個結構特征對維生素活性都是必不可少的。胡蘿卜的橙色素–β-胡蘿卜素–可呈現為兩個連接的視黃基，它們在體內被利用以貢獻維生素A水平。α-胡蘿卜素和γ-胡蘿卜素也具有單視黃基，這賦予它們一些維生素活性。維生素A在食物中以兩種主要形式存在：(i)視黃醇，在食用動物性食物來源時吸收的維生素A形式，是黃色脂溶性物質。由于純醇形式不穩定，該維生素以視黃酯形式存在于組織中。其也以酯形式商業生產和給藥，如視黃醇乙酸酯或棕櫚酸酯。(ii)胡蘿卜素α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、γ-胡蘿卜素；和葉黃素β-隱黃素（所有這些都含有β-紫羅蘭酮環），但沒有其它類胡蘿卜素，在草食動物和雜食動物中充當前維生素A，它們擁有在腸粘膜中裂解β-胡蘿卜素并將其轉化成視黃醇的酶（15-15'-雙加氧酶）。一般而言，食肉動物是含紫羅蘭酮的類胡蘿卜素的不良轉化者，且純食肉動物如貓和雪貂缺乏15-15'-雙加氧酶并且無法將任何類胡蘿卜素轉化成視黃醛（以致對這些物種而言沒有一種類胡蘿卜素是維生素A的形式）。這些化合物的測量是維生素A營養狀況和某些維生素A類似物的效力的有用指標。在另一實施方案中，本公開可用于保留、分離和解析維生素K和相關化合物。維生素K是人體在血液凝結所需的某些蛋白質的翻譯后修飾和在骨骼和其它組織中的代謝途徑中需要的一類結構上類似的脂溶性維生素。它們是2-甲基-1,4-萘醌(3-)衍生物。這類維生素包括兩種天然維生素：維生素K1和維生素K2。維生素K1，也稱作葉綠醌、phytomenadione或植物甲萘醌，由植物合成并在綠葉蔬菜中以最高量存在，因為其直接參與光合作用。其可被認為是維生素K的“植物形式”。其在動物中有活性并可在動物體內發揮維生素K的經典功能，包括其在凝血蛋白生產中的活性。動物也可能將其轉化成維生素K2。維生素K2，在動物體內的主要儲存形式，具有幾種亞型，它們的類異戊二烯鏈長不同。這些維生素K2同系物被稱作甲基萘醌類，并通過它們側鏈中的類異戊二烯殘基數表征。甲基萘醌類縮寫為MK-n，其中M代表甲基萘醌，K代表維生素K，且n代表類異戊二烯側鏈殘基數。例如，甲基萘醌-4（縮寫MK-4）在其側鏈中具有四個異戊二烯殘基。甲基萘醌-4（也由其四個異戊二烯殘基被稱作四烯甲萘醌）是動物產品中最常見類型的維生素K2，因為MK-4通常由某些動物組織（動脈壁、胰腺和睪丸）中的維生素K1通過用含有四個異戊二烯單元的不飽和geranylgeranyl尾替代葉綠基尾合成，由此產生甲基萘醌-4。維生素K2的這種同系物可具有與維生素K1不同的酶功能。結腸（大腸）中的細菌也可將K1轉化成維生素K2。此外，細菌通常延長維生素K2的類異戊二烯側鏈以產生一系列維生素K2形式，最尤其是維生素K2的MK-7至MK-11同系物。除MK-4外的所有形式的K2只能由細菌生產，它們在厭氧呼吸中利用這些形式。MK-7和其它細菌來源的維生素K2形式在動物體內表現出維生素K活性，但MK-7超過MK-4的額外效用（如果有的話）不清楚并且目前仍在研究。維生素K的三種合成類型是已知的：維生素K3、K4和K5。盡管天然K1和所有K2同系物已證實無毒，但合成形式K3（甲萘醌）已表現出毒性。K4和K5也無毒。這些化合物的測量是維生素K營養狀況和某些維生素K類似物的效力的有用指標。在另一實施方案中，本公開可用于保留、分離和解析維生素E和相關化合物。維生素E是指一類八種脂溶性化合物，包括生育酚和生育三烯酚。在維生素E的許多不同形式中，γ-生育酚在北美飲食中最常見。γ-生育酚可存在于玉米油、大豆油、人造黃油和醬汁中。α-生育酚，維生素E的最生物活性形式，是飲食中第二常見的維生素E形式。這一變體最豐富存在于小麥胚芽油、葵花油和紅花油中。作為脂溶性抗氧化劑，其終止在脂肪發生氧化時形成的活性氧簇的生產。每天超過1,000毫克（1,500IU）的量被稱作維生素E過多，因為它們可能提高出血問題和維生素K缺乏的風險。這些化合物的測量是維生素E營養狀況和某些維生素E類似物的效力的有用指標。一般而言，樣品是包括至少一種目標分析物（例如上文公開的類型或種類的分析物，與基質一起）的組合物。樣品可包括固體、液體、氣體、混合物、材料（例如具有中間稠度，如提取物、細胞、組織、生物體）或其組合。在各種實施方案中，該樣品是身體樣品、環境樣品、食物樣品、合成樣品、提取物（例如通過分離技術獲得）或其組合。身體樣品可包括源自個體身體的任何樣品。在這方面，個體可以是動物，例如哺乳動物，例如人。其它示例性個體包括小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、貓、狗、山羊、綿羊、豬、牛或馬。該個體可以是患者，例如患有疾病或疑似患有疾病的個體。身體樣品可以是體液或組織，例如為科學或醫學試驗提取，例如用于研究或診斷疾病（例如通過檢測和/或鑒定病原體或生物標志物的存在）。身體樣品也可包括細胞，例如個體身體樣品的病原體或細胞（例如腫瘤細胞）。這樣的身體樣品可通過已知方法，包括組織活檢（例如鉆取活組織檢查）和通過提取血液、支氣管吸出物、痰、尿、糞便或其它體液獲得。示例性的身體樣品包括體液、全血、血漿、血清、臍帶血（特別是通過經皮臍帶血取樣（PUBS）獲得的血液、腦脊髓液（CSF）、唾液、羊水、母乳、分泌物、膿水、尿、糞便、胎糞、皮膚、指甲、毛發、臍、胃內容物、胎盤、骨髓、外周血淋巴細胞（PBL）和實體器官組織提取物。環境樣品可包括源自環境，如自然環境（例如海洋、土壤、空氣和植物區系）或人工環境（例如運河、隧道、建筑物）的任何樣品。示例性環境樣品包括水（例如飲用水、河水、地表水、地下水、飲用水、污水、流出水、廢水或滲濾液）、土壤、空氣、沉積物、生物區系（例如土壤生物）、植物區系、動物區系（例如魚）和土體（例如挖出物）。食物樣品可包括源自食物（包括飲料）的任何樣品。這樣的食物樣品可用于各種用途，包括例如(1)核查食物是否安全；(2)核查在食用食物（留樣）時食物是否含有有害污染物或食物是否不含有害污染物；(3)核查食物是否僅含允許的添加劑（例如符合法規）；(4)核查其是否含有正確水平的強制成分（例如食物標簽上的聲明是否正確）；或(5)分析食物中所含的營養素量。示例性食物樣品包括動物、植物或合成來源的食用產品（例如奶、面包、蛋或肉）、谷類、飲料及其部分，如留樣。食物樣品還可包括水果、蔬菜、豆類、堅果、油籽、油果、谷類、茶、咖啡、草藥浸汁、可可、啤酒花、香草、香料、糖料植物、肉、脂肪、腎、肝、內臟、奶、蛋、蜂蜜、魚和飲料。合成樣品可包括源自工業過程的任何樣品。該工業過程可以是生物工業過程（例如使用含有遺傳信息并能自復制或在生物系統中復制的生物材料的過程，如使用轉染細胞的發酵過程）或非生物工業過程（例如化合物，如藥物的化學合成或降解）。合成樣品可用于核查和監測工業過程的進程，測定所需產物的收率和/或測量副產物和/或原材料的量。實施例材料除非另行指明，所有試劑按來樣使用。本領域技術人員會認識到，存在下列供應物和供應商的同等物，因此下列供應商不應被視為限制性的。表征技術本領域技術人員會認識到，存在下列儀器和供應商的同等物，因此下列儀器不應被視為限制性的。通過燃燒分析（CE-440元素分析儀；ExeterAnalyticalInc.,NorthChelmsford,MA）或通過庫侖碳分析儀（模塊CM5300、CM5014,UICInc.,Joliet,IL）來測量%C值。通過燒瓶燃燒，接著離子色譜法（AtlanticMicrolab,Norcross,GA）測定溴和氯含量。使用多點N2吸附法（MicromeriticsASAP2400；MicromeriticsInstrumentsInc.,Norcross,GA）測量這些材料的比表面積（SSA）、比孔隙體積（SPV）和平均孔徑（APD）。使用BET法計算SSA，SPV是P/P0>0.98所測得的單點值，并使用BJH法由等溫線的解吸分支計算APD。作為從比表面積（SSA）中減去孔隙<34?的累積吸附孔徑數據測定微孔表面積（MSA）。通過壓汞法（MicromeriticsAutoPoreII9220或AutoPoreIV,Micromeritics,Norcross,GA）測量中值介孔直徑（MMPD）和介孔孔隙體積（MPV）。使用MicromeriticsAccuPyc1330HeliumPycnometer（V2.04N,Norcross,GA）測量骨架密度。使用BeckmanCoulterMultisizer3分析儀（30μm孔徑，70,000次計數；Miami,FL）測量粒度。作為基于體積的粒度分布的50%累積直徑測量粒徑（dp50）。作為90%累積體積直徑除以10%累積體積直徑（稱作90/10比率）測量分布寬度。使用Brookfield數字粘度計ModelDV-II（Middleboro,MA）測定這些材料的粘度。用OaktonpH100系列儀表（Cole-Palmer,VernonHills,Illinois）進行pH測量并在臨使用前在環境溫度下使用Orion（ThermoElectron,Beverly,MA）pH緩沖標樣校準。使用Metrohm716DMSTitrino自動滴定儀（Metrohm,Hersau,Switzerland）進行滴定，并作為毫克當量/克（mequiv/g）報道。通過滴定在添加硫代硫酸鈉時釋放的OH-測定環氧化物的覆蓋水平。使用BrukerInstrumentsAvance-300光譜儀（7mm雙寬帶探針）獲得多核(13C,29Si)CP-MASNMR譜。自旋速度通常為5.0-6.5kHz，循環延遲為5秒。且交叉極化接觸時間為6毫秒。使用外標金剛烷（13CCP-MASNMR,δ38.55）和六甲基環三硅氧烷（29SiCP-MASNMR,δ-9.62）相對于四甲基硅烷記錄報道的13C和29SiCP-MASNMR譜移。通過使用DMFit軟件的光譜反褶積來評估不同硅環境的群體（population）。[Massiot,D.；Fayon,F.；Capron,M.；King,I.；LeCalvé,S.；Alonso,B.；Durand,J.-O.；Bujoli,B.；Gan,Z.；Hoatson,G.Magn.Reson.Chem.2002,40,70-76]。實施例1用于固定相的環氧化物層的制備在典型反應中，將雜化多孔粒子分散在環氧丙氧丙基三甲氧基硅烷/甲醇（0.25mL/g）（GLYMO,Aldrich,Milwaukee,WI）在20mM乙酸鹽緩沖液（pH5.5，使用乙酸和乙酸鈉制備，J.T.Baker，5mL/g稀釋）中的溶液中，其已在70℃下預混60分鐘。將該混合物在70℃下保持20小時。然后冷卻該反應，過濾產物并相繼用水和甲醇（J.T.Baker）洗滌。然后將產物在減壓下在80℃下干燥16小時。所用的特定粒子顯示在表1中。表1所用的特定基礎粒子條目材料B1雜化有機二氧化硅(3.8μm,90?APD,1.3立方厘米/克TPV)1B2雜化有機二氧化硅(3.8μm,115?APD,1.3立方厘米/克TPV)1B3雜化有機二氧化硅(2.3μm,115?APD,1.3立方厘米/克TPV)1B4雜化有機二氧化硅(1.7μm,143?APD,0.73立方厘米/克TPVB5雜化有機二氧化硅(1.7μm,106?APD,1.25立方厘米/克TPV1如US7919177、US7223473、US6686035和WO2011084506中所述。反應數據列在表2中。對這種通用程序的具體改變包括：1)材料1E使用6小時反應時間制備，2)材料1F使用100mM乙酸鹽緩沖液制備，3)材料1G使用50℃保持20小時制備，4)材料1H使用50℃預混和50℃保持溫度制備。由通過元素分析測得的表面改性之前和之后的粒子%C差異來測定3.90–6.0微摩爾/平方米的總表面覆蓋率。通過13CCP-MASNMR光譜法分析這些材料表明對這些材料而言存在環氧基和二醇基團的混合物。表2固定相的初始層的覆蓋率1這是指來自鍵合的GPTMS硅烷的合計覆蓋率–來自未水解環氧化物的覆蓋率+來自水解環氧化物（作為二醇）的覆蓋率2如通過滴定測定。實施例2具有二醇官能的固定相的制備在典型反應中，將雜化多孔粒子分散在環氧丙氧丙基三甲氧基硅烷/甲醇（0.25mL/g）（GLYMO,Aldrich,Milwaukee,WI）在20mM乙酸鹽緩沖液（pH5.5，使用乙酸和乙酸鈉制備，J.T.Baker，5mL/g稀釋）中的溶液中，其已在70℃下預混60分鐘。該混合物在70℃下保持20小時。然后冷卻該反應，過濾產物并相繼用水和甲醇（J.T.Baker）洗滌。該材料隨后在0.1M乙酸溶液（5mL/g稀釋，J.T.Baker）中在70℃下回流20小時。然后冷卻該反應，過濾產物并相繼用水和甲醇（J.T.Baker）洗滌。然后將產物在減壓下在80℃下干燥16小時。反應數據列在表3中。由通過元素分析測得的表面改性之前和之后的粒子%C差異來測定0.93–6.0微摩爾/平方米的表面覆蓋率。通過13CCP-MASNMR光譜法分析這些材料表明沒有留下可測量量的環氧基團，這些材料只存在二醇基團。表3固定相的初始層的覆蓋率。實施例3-具有混合官能團的固定相的制備在標準實驗中，將10克上文制成的材料分散在溶劑，例如但不限于水、異丙醇或二氧雜環己烷中。添加超過對上文制成的材料測定的環氧化物覆蓋率的親核體的量并將該混合物加熱到70℃進行16小時。表4提供所用的特定親核體的名單。在反應后，粒子相繼用水和0.5M乙酸洗滌，該材料然后在0.1M乙酸溶液（5mL/g稀釋，J.T.Baker）中在70℃下攪拌20小時。然后冷卻該反應，過濾產物并相繼用水和甲醇（J.T.Baker）洗滌。然后將產物在減壓下在80℃下干燥16小時。反應數據列在表5中。由通過元素分析測得的表面改性之前和之后的粒子%C、%N或%S差異來測定0.2–2.3微摩爾/平方米的親核體表面濃度。通過13CCP-MASNMR光譜法分析這些材料表明沒有留下可測量量的環氧基團。表4所用的特定親核體的名單條目親核體N11-氨基蒽N24-正辛基苯胺N36-氨基喹啉N4苯胺N51-萘基胺N68-氨基喹啉N72-氨基蒽N8芐基胺N92-氨甲基吡啶N10吡啶N11N-十八烷基胺N12二乙胺表5。實施例4固定相的進一步表征應用實施例1-3中詳述的用于粒子鍵合/官能化的通用程序來改性不同多孔材料的表面硅烷醇基團。其中包括整料、球形、顆粒狀、表面多孔和不規則材料，其是在雜化無機/有機、二氧化硅、氧化鈦、氧化鋁、氧化鋯、聚合物或碳材料上的二氧化硅、雜化無機/有機材料、雜化無機/有機表面層，和在雜化無機/有機、二氧化硅、氧化鈦、氧化鋁、氧化鋯或聚合物或碳材料上的二氧化硅表面層。還包括球形材料、非球形材料（例如包括環圈、多面體）形式的固定相材料；具有高度球形的芯形態、桿形的芯形態、彎桿形的芯形態、環圈形的芯形態；或啞鈴形的芯形態的固定相材料；和具有高度球形、桿形、彎桿形、環圈形或啞鈴形的形態的混合物的固定相材料。示例性雜化材料顯示在美國專利Nos.4,017,528、6,528,167、6,686,035和7,175,913以及國際公開No.WO2008/103423中，它們的內容全文經此引用并入本文。表面多孔粒子包括美國公開Nos.2013/0112605、2007/0189944和2010/061367中描述的那些，它們的內容全文經此引用并入本文。球形、顆粒狀或不規則材料的粒度可以為5-500微米；更優選15-100微米；更優選20-80微米；更優選40-60微米不等。這些材料的APD可以為30至2,000?；更優選40至200?；更優選50至150?不等。這些材料的SSA可以為20至1000平方米/克；更優選90至800平方米/克；更優選150至600平方米/克；更優選300至550平方米/克不等。這些材料的TPV可以為0.3至1.5立方厘米/克；更優選0.5至1.4立方厘米/克；更優選0.7至1.3立方厘米/克不等。整料的大孔直徑可以為0.1至30微米，更優選0.5至25微米，更優選1至20微米不等。實施例5固定相表現出在色譜條件下隨時間經過的極小分析物保留變化通過取用由第3、10或30天色譜試驗測得的平均絕對峰保留與在第1天色譜試驗時測得的平均絕對峰保留的百分比差異來計算平均%保留變化。對于試驗的每天，在Mix1試驗條件下平衡該柱20分鐘，接著三次注入Mix1，然后在Mix2試驗條件下平衡10分鐘，接著三次注入Mix2。條件顯示在表6中。結果顯示在表7和8中。通過取用對Mix1和Mix2測得的第1天平均絕對峰保留與在實施例1A上對Mix1和Mix2測得的第1天平均絕對峰保留的百分比差異來計算%少保留。表6用于測量保留變化的色譜試驗條件助溶劑Mix15%甲醇樣品Mix13-苯甲酰基吡啶(0.1mg/mL)助溶劑Mix210%甲醇樣品Mix2咖啡因、胸腺嘧啶、罌粟堿、潑尼松龍、磺胺(各0.2mg/mL)柱尺寸2.1x150mm流量1.0mL/min柱溫度50℃背壓1800psi檢測器AcquityPDA，具有SFCFlowCell檢測器設置254nm40spec/sec弱洗針異丙醇注射1.0μL(2.0μL循環，PLUNO注射模式)儀器UPC2軟件Empower表7隨時間經過來自實施例2的材料的保留變化/表明未對這種材料進行該試驗。表8隨時間經過來自對比材料的保留變化。/表明未對這種材料進行該試驗。實施例6用環氧丙氧丙基三甲氧基硅烷（GPTMS）和1-氨基蒽將有機-無機雜化粒子表面官能化GPTMS和1-氨基蒽的結構顯示在圖1中。圖1A顯示GPTMS（硅烷表面改性劑）的結構。部分105顯示GPTMS（三烷氧基硅烷）的表面反應性基團，而部分110顯示反應性基團（環氧化物）。圖1B顯示選擇性配體（1-氨基蒽）。首先使GPTMS通過在70℃下在20mM乙酸鈉緩沖液pH5.0中預培養來預形成低聚物。在培養過程中，形成水解硅烷的小低聚物。在合適的預培養期后，以干燥粉末形式添加待改性的粒子。低聚物和任何剩余單體與該材料表面反應以產生如圖2中所示共價連接到材料表面上的硅烷改性劑的高表面覆蓋率。圖2顯示硅烷偶聯劑與有機-無機雜化材料表面的反應。為簡單起見，描繪硅烷(205)作為單體。預形成的低聚硅烷可以與表面反應性基團(210)相同的方式偶聯。在一些實施方案中，未連接到表面上的一部分硅烷也可偶聯到涂層上（例如交叉聚合）。在反應條件下，消除甲醇(215)以產生表面改性粒子(220)。在硅烷與色譜材料反應后，通過用MilliQH2O洗滌除去過量試劑和緩沖鹽并將該材料轉移到有機溶劑（例如1,4-二氧雜環己烷）中并添加1-氨基蒽。1-氨基蒽的氨基通過GPTMS的側環氧化物基團偶聯到表面上。可以通過限制1-氨基蒽添加量來控制轉化的環氧基的比例。然后將該偶聯材料洗滌到0.5M乙酸中并且未反應的環氧化物基團如圖3中所示水解成相應的二醇。所得1-氨基蒽/二醇表面含有均勻分布的1-氨基蒽基團并提供優異的選擇性，同時二醇屏蔽表面硅烷醇與分析物的相互作用。該多組分表面優于單獨的二醇表面或單獨的1-氨基蒽表面。圖3顯示表面改性粒子(305)與選擇性配體(310)的反應。給出反應條件(315)并包括在70℃下用異丙醇和0.5M乙酸處理。結果獲得用于色譜分離的具有多組分表面的固定相粒子(320)。替代地，可以在制造聚合表面的條件下使用具有側反應性基團作為鍵合相的硅烷偶聯劑在反應條件（其同時鍵合到基材表面上、部分使該側反應性基團反應以形成惰性側基并也造成相鄰硅烷偶聯劑分子上的側反應性基團之間的有限聚合）下制造該多組分表面。類似地，可以在制造聚合表面的條件下通過共價鍵合能與分析物相互作用以通過將帶電、不帶電、極性、非極性、親脂或親水特性引入色譜相而影響保留的第二化學試劑制造該多組分表面。或者，在某些條件下，GPTMS的環氧基可以與相鄰硅烷的羥基反應以形成醚橋，其交聯表面上的GPTMS。這樣的交聯可以為該鍵合相提供穩定性并也可增強硅烷醇保護。此類交聯的存在與這些材料的NMR分析相符。交聯表面的類型的一個實施方案顯示在圖4中。圖4還顯示涂層中的交聯硅烷基團，其中該硅烷沒有連接到表面上。這種結構證實通過表面環氧化物的聚合形成醚橋。實施例7圖5顯示用于制備本公開的色譜固定相的兩個可能的合成途徑。如方案(500)中所示，未改性的BEH粒子(505)可以至少兩種不同的方式化學改性。相應地，作為一個選項，首先通過使GPTMS與1-氨基蒽反應制備化學改性劑(510)。然后使試劑510與BEH粒子(505)反應以產生官能化色譜表面(515)。替代地，圖5顯示不同的合成途徑。在該實施方案中，粒子505直接與GPTMS反應以產生GPTMS-改性表面(520)。然后可以使表面520與1-氨基蒽(525)反應以產生官能化色譜表面(515)。在一個優選實施方案中，包括首先使粒子505與GPTMS反應接著用1-氨基蒽(525)官能化的第二反應途徑表現優于包括使粒子505與預形成的化學改性劑510反應的第一反應途徑。實施例8在有機-無機雜化材料上的GPTMS鍵合減輕保留漂移或變化如圖6中所示，用環氧丙氧丙基三甲氧基硅烷（GPTMS）處理橋連亞乙基雜化物（BEH）固定相，接著環氧化物開環反應以產生二醇，這可以顯著減輕保留漂移效應。圖600顯示與二醇官能化的3μmBEH粒子(610)相比，未官能化的3μmBEH粒子(605)的%原始保留的圖。作為時間的函數給出%原始保留，在x軸上給出天數。結果表明，在至少一些優選實施方案中，用GPTMS將色譜表面官能化和隨后環氧化物開環以產生二醇可以減輕保留漂移。結果還表明，單獨的GPTMS涂層解決保留漂移的問題并也提供顯著保留。實施例9使用基于1-氨基蒽的固定相分離相關化合物使用簡單色譜條件，本公開的方法和固定相提供與當前的現有技術方法相比更優相關化合物，例如脂質和脂溶性維生素的分離。它們也提供不同的選擇性，這有利于解析不同種類的化合物。使用ACQUITYUPC2系統，其配有：使用收斂色譜二元溶劑管理器(ccBSM)、樣品管理器(SM)、收斂色譜管理器(CCM)、柱管理器(CM-A)和光電二極管陣列(PDA)。如下提供該系統和分離條件：第一條件:流量:梯度:在2分鐘內3-20%甲醇/CO2；20%甲醇/CO20.5分鐘；在0.5分鐘內20-3%甲醇/CO2。ABPR設置:2175psi。柱溫度:40℃。檢測:235nm，補償400-500nm（視需要，對維生素A而言，320nm，補償400-500nm）。柱尺寸:3.0x50mm。固定相:如實施例7中提供的1-氨基蒽改性二醇，2.5μm。第二條件:流量:2.0mL/min.梯度:在3分鐘內3-8%甲醇/CO2（#8曲線）；在0.5分鐘內8-35%甲醇/CO2（#1曲線）；35%甲醇/CO21分鐘；在0.5分鐘內35-3%甲醇/CO2（#1曲線）。ABPR:1800psi。柱溫度:50℃。樣品:GLC85脂質標樣（Nu-chekPrep,Elysian,MN,USA）,1g/L在CHCl3儲液中，用1:1庚烷:IPA稀釋20x。柱尺寸:3.0x50mm。固定相:如實施例7中提供的1-氨基蒽改性二醇，2.5μm。也使用ACQUITYSQD2質譜儀:3.46kV毛細管；25V錐；350℃源；500L/hr脫溶劑氣體；10L/hr錐氣體；LMRes11.8；HMRes15.1；-0.2離子能量提供峰檢測和結構測定。圖7-16顯示使用本公開的方法和固定相實現的脂質分離。這些分離的結果表明，1-氨基蒽偶聯出色地保留和分離脂溶性維生素、脂質和代謝產物。與C18鍵合相相比，1-氨基蒽偶聯增強形狀/異構選擇性。這些結果令人驚訝，因為在相同配體上混合疏水和親水基團不僅具有挑戰性，還對固定相而言是非典型的基序（motif）。通常，富π電子配體用于非常專業化的分離并用于提供與C18鍵合相略微不同的選擇性。發現在基于1-氨基蒽的固定相和例如ACQUITYUPC2HSSC18SB（在本公開中用于比較目的）之間存在非常不同的選擇性。在脂溶性維生素的情況下，如它們的名字所示，這些分子是非極性的并通常具有很少可離子化基團。在一些實施方案中，該固定相可含有不能增強非極性化合物的分離的殘留胺。在一些實施方案中，這些基團可以控制配體的表面pH。這些基團的存在并未指示有可能分離脂溶性維生素。通常，在C18鍵合相，如ACQUITYUPC2HSSC18SB上進行維生素、脂質和代謝產物分離。在該材料上，烷基鏈是產生高亞甲基/疏水選擇性但極小的形狀/異構選擇性的保留選擇因子。本公開的材料，如含有1-氨基蒽的那些出色地保留和分離脂溶性維生素、脂質和代謝產物。這些材料還與C18鍵合相相比增強形狀/異構選擇性。用于脂質時產生類似的結論，即1-氨基蒽偶聯優于ACQUITYUPC2HSSC18SB。當使用優化方法時，在1-氨基蒽偶聯原型上解析更多脂質峰。觀察到的提高的峰數與脂肪酸的碳鏈長度和飽和度的選擇性相關。1-氨基蒽原型解決“FastandSimpleFreeFattyAcidsAnalysisUsingUPC2/MS”（LibraryNumber:APTNT134753626；PartNumber720004763en）中注明的問題，其聲稱“反相色譜法根據鏈長和不飽和度分離脂質。該問題在于該反相分離法的雙重性質（脂肪酰基鏈中的雙鍵降低保留時間且脂肪酰基鏈長提高保留時間）會阻礙實際樣品的分析的事實；組分數通常如此大以致由于共洗脫而難以識別”。本公開的固定相帶來不飽和脂肪酸鏈的更多保留（更多的雙鍵帶來更長的保留時間）和更長的鏈長。該分離基于碳原子數和雙鍵數提高保留，這是與烷基鍵合的固定相相比出色的改進。本領域技術人員會理解，本公開可用于發展和調節其它應用領域中的方法：精細化學品/材料（OLEDs、農用化學品、染料/有機染料、構象聚合物、聚合物添加劑和表面活性劑）、食品和環境（農藥、甘油酯、食用油、煙草、食物摻假）、藥品/生命科學（脂質譜、天然產品、DMPK/生物分析、雜質譜、醫藥化學）和法醫學/研究（鴉片劑、濫用藥物、類固醇、脂肪酸、抗抑郁藥、火藥組分、爆炸物）。此外，這些材料和方法可用作多維實驗（2D-SFC、SFC-LC等）的一部分。與這些結合的其它材料包括Argentation（銀浸漬材料）和現有脂質方法，如在CSH品牌的柱上的方法。實施例10使用本公開的各種固定相分離相關化合物根據之前的實施例使用不同選擇因子制備另一些色譜材料。在這些附加固定相上進行脂質分析。受試材料包括使用下列選擇因子的固定相：1-氨基蒽、2-氨甲基吡啶、吡啶、6-氨基喹啉、苯胺、二醇和4-正辛基苯胺。如下提供通用色譜條件：樣品：GLC85脂質(Nu-chekPrep),1g/L在CHCl3中；用1:1IPA:庚烷稀釋20x。系統：UPC2w/SQD2,ESI-電離。流動相:97.5/2.5MeOH/H2Ow/0.1MNH3補充流。3.0x50mm柱。該樣品含有C4-C24脂質的混合物（m/z:87；115.1；143.1；171.1；185.1；199.2；213.2；227.2；241.2；255.2；269.2；283.3；311.3；339.3；225.2；239.2；253.2；267.2；277.2；279.2；281.2；303.2；305.2；307.3；309.3；327.2；335.3；337.3；365.3）。圖17-24顯示使用這些固定相的脂質分離，分布圖和基于碳鍵數的每種脂質。一般而言，基于雙鍵數，含有1-氨基蒽和4-正辛基苯胺的固定相表現出該混合物的足夠的分辨率，以及保留的提高。使用2-氨甲基吡啶、吡啶、6-氨基喹啉和苯胺偶聯和二醇的固定相不能解析樣品中的大多數脂質峰。表9提供這些固定相的性能的概要。表9本公開的各種固定相的性能。表9提供結果的概要。作為該脂質混合物的第一個和最后一個洗脫峰之間的時間差測量保留窗。希望使這一值最大化，因為其代表分離空間。材料3A提供最高保留窗值，為HSSC18SB（對比）的200%。作為保留窗除以在該保留窗中洗脫的所有峰的平均峰寬測量峰容量。材料3E提供與HSSC18SB相比的顯著改進，峰容量大20%。C18:0、C18:1、C22:1和C22:6的保留值代表分別具有18和22的碳鏈長度和在鏈中分別0、1和6個雙鍵的脂質的保留時間。材料3E和HSSC18SB表現出隨雙鍵數增加而降低的保留，而所有其它材料表現出提高的保留，該混合物中的所有C18和C22脂質的（保留）范圍通過分別從飽和脂質C18或C22的保留時間中減去具有最高不飽和水平（最多雙鍵）的脂質C18或C22的保留時間計算。這些柱中的負值代表基于鏈中存在的雙鍵數的保留降低。這一名單中的材料的正C18和C22范圍值代表與HSSC18SB相比的獨特選擇性。總雙鍵（DB）范圍是由C18和C22范圍的總和的絕對值計算的C18和C22脂質物類的總范圍。希望使這一值最大化，這體現在材料3A中。在一些實施方案中，本公開的材料在正常或常規色譜條件下提供大于0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4或1.5的DB值。據觀察，N-辛基苯胺、HSSC18SB（對比柱）、1-氨基蒽和苯胺基固定相提供最佳峰容量。峰容量是保留窗除以在13.4%下的平均峰寬（4sigma寬度）。吡啶、6-氨基喹啉、2-氨甲基吡啶和1-氨基蒽提供最佳C18和C22范圍。C18范圍是C18:2和C18:0之間的時間差。負值表明C18:2在C18:0前洗脫。這同樣適用于C22范圍。1-氨基蒽、吡啶、6-氨基喹啉和2-氨甲基吡啶提供最佳總雙鍵范圍。C18:0具有18個碳和0個雙鍵；C18:1具有18個碳和1個雙鍵；等等。總DB（雙鍵）范圍是C18和C22系列的最大和最小保留時間之差。實施例11使用本公開的各種固定相分離維生素D和K使用本公開的固定相測試兩個關鍵對，維生素K1和K2和維生素D2和D3以測定這些材料是否改進這些對的分辨率。色譜條件提供在表10中。表11提供結果的概要。對于各受試材料，分別測量兩個關鍵對維生素K1和K2和維生素D2和D3的分辨率。與HSSC18SB（對比）相比，材料3J、3H和3P顯著改進關鍵對的分辨率，特別是對維生素K1和K2而言。如下計算百分比改進：。預計材料3J、3H和3P的較小粒度會進一步改進關鍵對的分辨率。例如，預計降低材料3P的粒度會將觀察到的分辨率提高另外44%。據信，與HSSC18SB相比，材料3J、3H和3P的共軛部分提高色譜表面和維生素之間的相互作用，以促進獨特的選擇性。在一些實施方案中，本公開的材料在正常或常規色譜條件下提供大于1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0或4.5的維生素D3/D4的Rs值。在一些實施方案中，本公開的材料在正常或常規色譜條件下提供大于1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0或4.5的維生素K1/K2的Rs值。表10色譜條件助溶劑甲醇梯度在2分鐘中3-20%助溶劑樣品維生素:A、維生素A乙酸酯、E、維生素E乙酸酯、K1、K2、D2、D3(各0.2mg/mL)柱尺寸3.0x50mm流量1.2mL/min柱溫度40℃背壓2175psi檢測器AcquityPDA，具有SFCFlowCell檢測器設置235nm40spec/sec(320nm對于維生素A)弱洗針異丙醇注射0.5μL(2.0μL循環，PLUNO注射模式)儀器UPC2軟件Empower表11本公開的各種固定相在維生素D和K分離中的性能材料維生素kRs維生素DRs維生素DRs的%改進（與HSSC18SB相比）HSSC18SB0.230.7402F2.090.26-643L3.400.46-383O2.200.22-713N0.300.32-573F2.770.43-423I3.860.67-93G3.540.54-273M2.65//3E2.010.00-1003J3.490.86163H3.970.7973P3.810.9934除非另有說明，所有技術，包括試劑盒和試劑的使用，可以根據制造商的信息、本領域中已知的方法進行。本文中的數值范圍的列舉僅意在用作單獨提到落在該范圍內的各單獨數值的簡寫法。除非另有說明，各單獨數值就像單獨列舉那樣并入本說明書。本文中引用的各文獻（包括所有專利、專利申請、科學出版物、制造商規范和說明書）全文經此引用并入本文。說明書應被理解為公開并包括所述方面、實施方案和實施例的所有可能的排列和組合，除非上下文另有說明。本領域普通技術人員會認識到，可以與出于舉例說明而非限制性目的給出的概述和描述的方面、實施方案和實施例不同地實施本發明。當前第1頁1 2 3