單個核細胞分離篩濾件的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種細胞分離耗材，特別涉及單個核細胞分離篩濾件。
【背景技術】
[0002]腫瘤細胞過繼免疫治療是繼手術、化療和放療之后的第四種腫瘤治療方法。體外培養自體免疫細胞時，需要預先采集患者外周血，并分離外周血中具有單個核的細胞，即外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，包括淋巴細胞和單核細胞。目前主要的分離方法是應用樣本密度分離液進行密度梯度離心法，因為血液中各有形成分的比重存在差異，因此得以分離。紅細胞和粒細胞密度大于分離液沉積于管底。血小板則因密度小而懸浮于血漿中，唯有與分離液密度相當的單個核細胞密集在血漿層和分離液的界面中，呈白膜狀，吸取該層細胞經過洗滌離心重懸，即可用于治療用途的免疫細胞體外擴增培養。
[0003]目前，在應用樣本密度分離液進行PBMC分離時，采用的離心管最大規格多為15ml或50ml，每次每管分離的外周血樣本量為10?15ml，加樣時操作要求高，一不小心即會導致抗凝血與樣本密度分離液相混，影響單個核細胞的分離效果。如圖1所示，市場上有一種Greiner b1-one的淋巴/單核細胞分離管，包含一個高質量聚乙稀的多孔篩板，該板穩固地嵌入聚丙烯材質的離心管中，通過嚴格控制篩板的孔徑大小來分離細胞，大大縮短了樣本的處理時間。該種分離管主要有兩種規格:12ml和50ml，其50ml分離管每次處理樣本量為15?30ml血樣，較傳統方法使用的普通離心管增加了樣本處理量，縮短了處理時間，減小了操作難度，提高了工作效率，但該產品的知識產權屬于國外公司，國內使用成本較高，因此有必要進一步開發出具有我國自主知識產權的、價廉物美的外周血單個核細胞的分離耗材，可以同現有的普通15ml或50ml離心管配合使用，打破國外公司產品壟斷，降低細胞分離成本。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種能夠與普通離心管配合使用，可高效分離外周血單個核細胞的篩濾件。
[0005]為實現上述目的，本實用新型提供了一種單個核細胞分離篩濾件，其特征在于，其包括支撐結構，硅膠密封圈，圓形篩板，所述的支撐結構頂部與所述的圓形篩板周緣固定連接，在所述的圓形篩板外周緊密設有一硅膠密封圈以與離心管內壁緊密貼合。
[0006]本實用新型的優選技術方案中，所述支撐結構為支撐管，所述的支撐管頂部邊緣與所述的圓形篩板周緣固定連接，在所述圓形篩板外周緊密設有一硅膠密封圈以與離心管內壁緊密貼合。
[0007]本實用新型的優選技術方案中，所述支撐結構為錐形支撐架，優選為三角錐形支撐架，所述的錐形支撐架頂部與所述的圓形篩板周緣固定連接，在所述圓形篩板外周緊密設有一硅膠密封圈以與離心管內壁緊密貼合。
[0008]本實用新型的優選技術方案中，所述硅膠密封圈具有向上延伸的凸起邊緣。
[0009]本實用新型的優選技術方案中，所述的凸起邊緣的內側面為與垂線具有銳角夾角的傾斜面。
[0010]本實用新型的優選技術方案中，所述支撐結構由聚乙烯(PE)或聚碳酸酯(PC)或聚丙稀(PP)制成。
[0011]本實用新型的優選技術方案中，所述圓形篩板由金屬制成或由尼龍制成或由塑料制成。
[0012]本實用新型的優選技術方案中，所述圓形篩板由不銹鋼制成。
[0013]本實用新型的優選技術方案中，所述圓形篩板由聚乙烯(PE)或聚碳酸酯(PC)或聚丙烯(PP)或聚苯乙烯(GPPS)微球經粘合或壓制而成。
[0014]本實用新型的優選技術方案中，所述圓形篩板由金屬微球經粘合或壓制而成。
[0015]本實用新型的優選技術方案中，所述圓形篩板的孔徑為8_200μπι。
[0016]使用時，將單個核細胞分離篩濾件置入離心管，以20ml無菌注射器的活塞推送至離心管底部，使單個核細胞分離篩濾件的支撐管下緣支在離心管錐形底的上緣，保持單個核細胞分離篩濾件的篩板處于合適的位置，優選的，與50ml離心管相配套的單個核細胞分離篩濾件放置入正確的位置后，篩板下方的容積為13-16ml ο優選的，與15ml離心管相配套的單個核細胞分離篩濾件放置入正確的位置后，篩板下方的容積為2-4ml。
[0017]本實用新型的篩濾件的孔徑為8_200μπι，允許細胞通過，但可避免全血加入時與樣本密度分離液相混。篩濾件的篩板可由不銹鋼等金屬制成，也可為尼龍材質，也可為具有合適孔徑的塑料材質多孔篩板，多孔篩板可由聚乙烯(PE)或聚碳酸酯(PC)或聚丙稀(PP)或聚苯乙烯(GPPS)微球經粘合或壓制而成，多孔篩板也可由金屬微球經粘合或壓制而成，形成的篩孔允許細胞通過，但可避免全血加入時與樣本密度分離液相混。篩濾件的下方的支撐管由聚乙烯(PE)或聚碳酸酯(PC)或聚丙烯(PP)或聚苯乙烯(GPPS)制成，支撐管的外徑略小于與之配套的離心管的內徑，支撐管可確保本篩濾件的篩板在離心管內定位于合適的位置。篩板的周邊包覆有硅膠密封圈，由醫用硅膠制成，具有較好的彈性，其上緣逐漸變銳薄，上緣開口直徑等于或略大于與之配套的離心管內徑，可與離心管內壁緊密貼合，防止血液樣本沿篩濾件與離心管內壁之間縫隙與篩板下方的樣本密度分離液相混。
[0018]本實用新型的單個核細胞分離篩濾件，可與現有的15ml或50ml離心管組裝配合使用，由于硅膠密封圈與離心管內壁緊密貼合，使分離篩濾件與離心管內壁緊密貼合，在篩板下方加入樣本密度分離液，用于分離血液中的單個核細胞，提高樣本處理質量和效率。
【附圖說明】
[0019]下面結合附圖及實施例對本發明作進一步描述:
[0020]圖1為本實用新型一實施例1結構示意圖。
[0021]圖2為本實用新型單個核細胞分離篩濾件實施例1使用狀態示意圖。
[0022]圖3為圖2的局部結構放大示意圖。
[0023]圖4為本實用新型一實施例2結構示意圖。
[0024]圖5為本實用新型單個核細胞分離篩濾件實施例2使用狀態示意圖。