[0076] NAD 煙酷胺腺嚷嶺二核巧酸
[0077] NMP N-甲基化咯燒酬
[007引 Ph 苯基
[0079] RTord 室溫（20°C _25°C)
[0080] 巧U 叔芳基下基
[0081 ] TBME 叔下基甲基酸
[0082] TCA S 氯乙酸
[0083] THF 四氨巧喃
[0084] TEA S 乙胺
[00化]合成方法
[0086] -般可W通過本文所述的方法或通過本領域技術人員公知的其它方法制備化合 物1。
[0087] 實施例 1. 2-氯-6-( 1-(2，2-二氣乙基）-lH-化挫-4-基）-4，7，7-S甲基-6，7-二 氨-5H-化咯并[3，4-b M晚-5-酬(化合物1006)的制備
[008引
[0089] 正如方案I的步驟1-i中所示，在氮氣氣氛中向2,4-二甲基化晚-3-甲酸乙醋(化合 物1001，20.2邑，112.5111111〇1)在二氯甲燒（100血）中的溶液中逐步加入1，3,5-^氯-1，3,5-^ 嗦(triazinane)-2,4,6-S酬(31.4g，135.0mmol)，歷時15分鐘。將該反應混合物在室溫攬 拌18小時。過濾得到的白色沉淀，然后依次用飽和化HC化水溶液（2x 1 OOmL)和鹽水（1 OOmL) 洗涂濾液。干燥有機相(Na2S〇4)，過濾，真空濃縮，得到2-(氯甲基)-4-甲基煙酸乙醋似.9邑， 化合物1002)，為黃色油狀物:ESMS(M+H) =213.96。然后將該物質不經進一步純化用于下一 步：
[0090] 正如方案1的步驟1-ii中所示，向2-(氯甲基）-4-甲基煙酸乙醋（化合物1002， 112. Og ,524.2mmol)在二氯甲燒（484mL)中的溶液中加入3-氯過氧化苯甲酸（141. Og, 629.Ommol)。將該反應混合物在室溫在氮氣氣氛中攬拌過夜。用二氯甲燒(200mL)稀釋該混 合物，依次用飽和化肥化水溶液（1 OOmL )、飽和化2〇)3水溶液（1 OOmL的2M溶液)和鹽水洗涂。 干燥有機相(Na2S〇4)，過濾，真空濃縮，得到2-(氯甲基)-3-(乙氧幾基)-4-甲基化晚-1-氧化 物(化合物1〇〇3):6515(1+扣=230.25。然后將該物質不經進一步純化用于下一步：
[0091] 正如方案1的步驟1-iii中所示，將2-(氯甲基)-3-(乙氧幾基)-4-甲基化晚1-氧化 物(化合物1003,69.3g，301.Smmol)在憐酷氯(450.1 mL,4.8mol)中的溶液在氮氣氣氛中攬 拌，在95°C加熱60小時。將該反應混合物冷卻至室溫，真空蒸饋出憐酷氯。將得到的深色殘 余物溶于二氯甲燒（IOOmL),傾倒在IL燒杯中的冰(500g)上。將得到的混合物攬拌10分鐘。 用飽和化肥化水溶液將該混合物的抑調整至稍高于7。分離有機相，再用二氯甲燒反萃取水 相。連續用鹽水洗涂合并的有機相，用NasS化干燥，過濾，真空濃縮。使用化OAc/己燒（1:3)使 殘余物通過硅膠墊，減壓除去揮發性物質后得到80%純的產物（正如根據Ihnmr分析所示 的）。通過中壓硅膠色譜法進一步純化該物質（10-25%EtOAc/己燒，330g Teledyne ISCO 柱），得到6-氯-2-(氯甲基)-4-甲基煙酸乙醋(化合物1004,36.5g):ESMS(M+H)=248.04.
[0092] 正如方案1的步驟1-i V中所示，向1-(2,2-二氣乙基）化挫-4-胺（48.2g, 327.5mmol)在異丙醇（1.7L)中的溶液中加入6-氯-2-(氯甲基)-4-甲基煙酸乙醋(化合物 1004，65. Og，262. Ommol )，然后加入N，N-二異丙基乙胺(45.6血，262. Ommol)。將該反應混合 物在55°C加熱72小時。將得到的白色混懸液冷卻至室溫，過濾，再用異丙醇（200mL)和乙酸 (SOOmL)洗涂。將得到的固體在50°C真空烘箱干燥過夜，得到56g 2-氯-6-(1-(2,2-二氣乙 基)-lH-化挫-4-基)-4-甲基-6,7-二氨-5H-化咯并[3,4-b]化晚-5-酬(化合物1005):1hNMR (300MHz,DMS0-d6)58.28(s,lH),7.87(d,J = 0.5Hz,lH),7.52(s,lH),6.37(tt J = 54.9, 3.7Hz，lH)，4.85(s，2H)，4.67(td，J=15.2,3.7Hz，2H)，2.65(s，3H)。該物質包含 7% 的非環 化副產物[6-氯-2-( ((1-(2,2-二氣乙基)-lH-化挫-4-基)氨基）甲基)-4-甲基煙酸乙醋]， 就運樣用于隨后的反應。
[0093] 正如方案1的步驟I-V中所示，向2-氯-6-(1-(2,2-二氣乙基）-lH-化挫-4-基）-4-甲基-6,7-二氨-5H-化咯并[3,4-b]化晚-5-酬（化合物 1005,46. Og ,147. Immol)在DMF (782. OmU中的溶液中加入艦甲燒(20.1血，323.6mmo 1)。將該混合物冷卻至5°C，逐步加入 氨化鋼（12.9g，323.6mmol的60%礦物油分散液），歷時15分鐘。將該反應混合物在3°C攬拌 45分鐘。HPLC分析顯示一甲基化（10%)、二-甲基化(74%)和S-甲基化（15%)產物與消耗 的原料的混合物。再經過1小時后，再加入氨化鋼（1.29g，32.36mmo 1的60%礦物油分散液）， HPLC分析顯示84%二-甲基化期望的產物和16%S-甲基化副產物。通過添加飽和 溶液（IL)、硫代硫酸鋼(400mL)和水（IL)終止反應。用化OAc(SOOmL)將水相萃取2次。干燥合 并的有機相(化2S化），過濾，真空濃縮。通過中壓硅膠色譜法純化殘余物(0-40%化OAc/己燒 梯度，使用SOOg Teledyne ISCO柱），得到2-氯-6-(1-(2,2-二氣乙基)-lH-化挫-4-基）-4， 7，7-S甲基-6，7-二氨-5H-化咯并[3，4-b ]化晚-5-酬（化合物1006，24g)，為白色固體： iHNMR(400MHz，DMS0-d6)S8.21(s，lH)，7.83(s，lH)，7.54(s，lH)6.58-6.25(m，lH)，4.67 (td，J = 15.1，3.7Hz，2H)，2.65(s，3H)，1.51(s，6H).
[0094] 實施例2: (R)-6-( 1-(2，2-二氣乙基)-lH-化挫-4-基)-4，7，7-S甲基-2-(5-(2，2， 2-S氣-1-徑基乙基)郵晚-3-基)-6,7-二氨-5H-化咯并[3,4-b]化晚-5-酬(化合物1)的制 備 「nn〇c；1
[0096] 正如方案2的步驟2-i中所示，將水（IOL)加入至Ij2化反應器中，然后加入KH2PO4 (136g)。將該混合物攬拌至達到均勻，得到0.1 M K也Kk緩沖液。通過添加2M化0聞尋該緩沖 液的pH調整至pH7.5。使內部溫度達到37°C。取出約SOOmL緩沖液用于隨后添加 NAD和CRED A131 細胞漿（cellpaste) (Almac Group ,Ltd.)。因此，將 NAD(20g)在緩沖液（IOOmL)中的溶 液加入到剩余的9.化緩沖液中，然后加入1-(5-漠化晚-3-基)-2，2，2-S氣乙-1-酬（1020g) 在MTBE(1 .5L)中的溶液。異丙醇（IL)用于再沖洗燒瓶進入反應。通過將CRED A131cel Ipaste (100g)在緩沖液(400mL)中的混懸液添加該反應混合物中啟動還原。在該反 應過程中，從攬拌的混合物中取出雙相反應樣品（~2mL)，用化OAc(IOmL)萃取，用MgS〇4干 燥，蒸發，通過Ihnmr在DMS0-d6中分析，W便監測原料向產物的轉化率。在1小時后，觀察到 50 %的轉化率。在3小時后，，觀察到〉99%的轉化率。用2M化0聞尋該反應體系的pH調整至 11，攬拌30分鐘，W使每變性。用2M肥1將抑調整至9。向該反應混合物中加入EtOAc (5L)或 娃藻±(650g)，持續攬拌10分鐘。通過娃藻±墊過濾得到的乳狀液，W分離有機相和水相。 用化OAcUL)洗涂墊，分離有機層。用化OAc(化)萃取水層，用鹽水(化)洗涂合并的有機相， 通過添加 MgS化(200g)和攬拌30分鐘干燥。過濾，真空除去揮發性物質，得到淡黃色油狀物， 在靜置時快速固化。將固體打碎成塊，在環己燒（2L)中攬拌成渺漿。向該混合物中加入 化OAc(~500mL)，在45°C攬拌W溶解該固體。然后再真空濃縮該混合物，直到白色固體開始 從溶液中沉淀。再加入環己燒(2L)，用冰浴將該溶液冷卻至(TC。攬拌30分鐘后，通過過濾采 集固體，用環己燒(SOOmL)洗涂，真空烘箱干燥，得到812g(R)-l)-1-(5-漠化晚-3-基)-2,2， 2-立氣乙-1 -醇（化合物1007，99.95 % ee，通過HPLC分析），為顆粒狀白色固體：Ihnmr (400MHz，DMS0-d6)S8.72(s，lH)，8.61(s，lH)，8.08(s，lH)，5.09-5.15(m，lH).
[0097] 正如方案2的步驟2-ii中所示，向（lR)-1-(5-漠-3-化晚基)-2,2,2-S氣-乙醇(化 合物1007,49.5g，193.3mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊棚 燒-2-基)-1，3，2-二氧雜環戊棚燒(58.9g，232. Ommo 1)和KOAc (37.9g，386.6mmo 1)在二嗯燒 (1.2L)中的溶液通氮氣20分鐘。向該反應混合物中加入化時PdCl2*DCM(7. Sg，9.7mmol)。再 給該混合物通氮氣20分鐘，加熱至回流2小時。冷卻至室溫后，通過娃酸儀載體墊(400血)過 濾該混合物，用50%化OAc/C出Cl2(l.化)洗涂餅狀物。減壓濃縮得到的濾液，得到黃色油狀 物，用己燒(SOOmL)稀釋，真空濃縮，得到泡沫狀黃色固體。將該黃色固體與己燒(SOOmL) - 起攬拌2小時，得到白色固體沉淀。通過過濾采集白色固體，干燥，得到（lR)-2,2,2-=氣-1-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊棚燒-2-基）-3-化晚基]乙醇（化合物1008， 48.4g):iHNMR(400MHz，CDCl3)S8.97(s，lH)，8.78(s，lH)，8.29(s，lH)，5.10-5.21(m，lH); 1.38(3,6扣，1.29(3，細）.
[009引正如方案2的步驟2-iii中所示，向2-氯-6-(1-(2,2-二氣乙基)-lH-化挫-4-基)-4，7，7-S甲基-6，7-二氨-5H-化咯并[3，4-b]化晚-5-酬（化合物 1006，42. Og，123.3mmol)、 (lR)-2,2,2-S氣-1-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊棚燒-2-基)-3-1?晚基]乙醇 (化合物 1008,46.7邑，148.0111111〇1)和船2〇)3(28.8邑，271.3111111〇1)在01尸(6301111^和水（2101111^中 的溶液中通氮氣30分鐘。向該混合物中加入化時PdCl2*DCM(2.99g，3.699mmol)，給該混合 物再通氮氣30分鐘。將該反應混合物加熱至103°C，攬拌2小時。將該混合物冷卻至室溫，用 水(2L)稀釋。用化OAc(IL)將水相萃取2次。高度真空下真空濃縮合并的有機相，W除去DMF。 用化OAc稀釋殘余物，用水洗涂，然后用鹽水洗涂。干燥有機相(化2S化），過濾，真空濃縮。通 過中壓硅膠色譜法純化粗殘余物（0-100%Et0Ac/己燒梯度，使用1500g Teledyne ISCO 柱），得到5?期望的產物，為淡紅色泡沫狀固體。將該固體溶于二氯甲燒。壓過娃酸儀載體 墊（200mL)，依次用化OAc/C此Cb混合物[首先40% (IL)，然后60% (IL)，然后80% (IL)]洗 涂。合并濾液，真空濃縮。用庚燒(400mL)將殘余物稀釋2次，真空濃縮，得到餅狀物，然后用 TBME洗涂，W除去淡黃色，在60°C真空烘箱干燥4天，得到(R)-6-(l-(2,2-二氣乙基)-lH-化 挫-4-基)-4,7,7-^甲基-2-(5-(2,2,2-^氣-1-徑基乙基川比晚-3-基)-6,7-二氨-5護化咯 并[3,4-b]化晚-5-酬(化合物 l，47g):iHNMR(400MHz，CDCl3)S9.33(s，lH)，8.75(s，lH)，8.54 (s，lH)，8.01(s，lH)，7.75(s，lH)，7.62(s，lH)，6.14(tt，J=55.4,3.6Hz，lH)，5.28-5.11 (m，lH)，4.51(td，J = 13.5,4.2Hz，2H)，4.