一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及多糖提取液的脫蛋白的技術領域，特別是涉及一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法。
【背景技術】
[0002]猴頭燕(Hericiumerinaceus)是珍貴的藥膳兼用菌。現代研究表明猴頭燕含有多種活性成分，如多糖、萜類、酚類化合物等。其中，已經證實猴頭菇中具有功能活性的主要成分為猴頭菇多糖。關于猴頭菇多糖的研究相對較多，研究表明其具有免疫調節、抗腫瘤、護胃等生理活性，而猴頭菇多糖制成的藥物和保健品也深受人們喜愛，開發前景廣闊。但是猴頭菇相關保健品多是猴頭菇提取液制成，而猴頭菇多糖的功能活性與其中純度有關，受其中的蛋白質等雜質影響。猴頭菇提取液是多糖、蛋白質、纖維素等組成的混合物，活性效果受到了影響，也不利于產品質量的提高。因此，提高猴頭菇制品的多糖濃度，降低其他成分的濃度，對提尚猴頭燕相關制品的活性效果具有重要的意義。猴頭燕制品的成分中，除多糖夕卜，含量較高的是蛋白質，因此，對猴頭菇提取液進行脫蛋白是提高多糖濃度的重要環節。
[0003]目前現有技術中常用的猴頭菇提取液脫蛋白方法是Sevage法，在真菌多糖提取液的脫蛋白方法中還有三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法、鹽酸法、氫氧化鈉法等。鹽酸法、氫氧化鈉法由于使用到酸堿，容易使多糖發生水解，部分糖苷鍵斷裂，影響多糖的結構及活性。Sevage法、三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法等由于都使用到有機溶劑，容易造成有機溶劑的殘留，且Sevage法中用到的氯仿、正丁醇，三氯乙酸法用到的三氯乙酸均為有毒化學試劑，不利于人體的健康，具有安全隱患，因此不適用于食品產品的開發。為了保持猴頭菇多糖的結構與活性，且減少有機試劑的使用及殘留，開發安全無毒、綠色環保且條件溫和的脫蛋白技術方法就具有重要的應用意義和實際價值。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于針對現有技術中的不足之處而提供一種安全無毒、綠色環保的猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法。
[0005]為達到上述目的，本發明通過以下技術方案來實現。
[0006]提供一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，它包括以下步驟:
步驟一，配制殼聚糖-醋酸溶液:將殼聚糖溶解于醋酸溶液中，攪拌均勻，即制得殼聚糖-醋酸溶液；
步驟二，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合:將猴頭菇多糖提取液與步驟一制得的殼聚糖-醋酸溶液混合均勻，得到第一混合物；
步驟三，第一次離心處理:將步驟二得到的第一混合物進行第一次離心處理，得到第一上清液，然后將第一上清液處于一定溫度下靜置一定時間；
步驟四，第二次離心處理:將步驟三中靜置后的第一上清液進行第二次離心處理，得到第二上清液，然后將第二上清液處于一定溫度下放置一定時間，即制得脫蛋白后的猴頭菇多糖提取液。
[0007]上述技術方案中，所述步驟一配制殼聚糖-醋酸溶液步驟中，所述醋酸溶液中醋酸的體積百分比濃度為0.5%?3%，所述殼聚糖-醋酸溶液中的殼聚糖的質量百分比濃度為1%?
3% ο
[0008]上述技術方案中，所述步驟二猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合步驟中，所述猴頭菇多糖提取液與所述殼聚糖-醋酸溶液的體積比為40?60:1。
[0009]上述技術方案中，所述步驟三第一次離心處理步驟中，將所述第一上清液處于2°C?6 °C下放置2h?3h。
[0010]上述技術方案中，所述步驟三第一次離心處理步驟中，所述第一次離心處理的離心速度為2500r/min?3500r/min，離心時間為1min?15min。
[0011]上述技術方案中，所述步驟四第二次離心處理步驟中，將第二上清液處于2°C>6°C下放置2h~3h。
[0012]上述技術方案中，所述步驟四第二次離心處理步驟中，所述第二次離心處理的離心速度為2500r/min?3500r/min，離心時間為1min?15min。
[0013]上述技術方案中，所述步驟二猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合步驟中，所述猴頭菇多糖提取液是以猴頭菇子實體粉末為原料，然后進行熱水浸提，并離心處理后得到的猴頭菇多糖提取液。
[0014]上述技術方案中，所述步驟二猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合步驟中，猴頭菇多糖提取液與步驟一制得的殼聚糖-醋酸溶液的混合是采用旋渦混合器進行混合均勻。
[0015]本發明的有益效果:
(I)本發明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，相對于現有技術中的Sevage法、三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法，不會造成有機溶劑的殘留，具有安全無毒、綠色環保的優點，因此，該猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法適用于食品產品的開發。另外，該猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，相對于現有技術的鹽酸法、氫氧化鈉法，不會使多糖發生水解，能避免糖苷鍵斷裂，進而能夠保證多糖的結構及活性。
[0016](2)本發明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，是利用殼聚糖-醋酸溶液對猴頭菇多糖提取液進行脫蛋白，其中，殼聚糖-醋酸溶液與猴頭菇多糖提取液中的蛋白質的絡合原理是:殼聚糖-醋酸溶液中的殼聚糖用于吸附絡合蛋白質，殼聚糖與蛋白質結合過程包括靜電作用和疏水作用；殼聚糖的分子鏈上含有大量的游離氨基和羥基，這些游離氨基和羥基易于與蛋白質發生交聯反應;其中，殼聚糖的質子化主要指其分子中氨基的質子化，在醋酸存在的條件下，隨著氨基的質子化，殼聚糖能夠表現出陽離子型聚電解質的作用，因此能夠有效地吸附溶液中帶負電的蛋白質膠粒，進而達到脫蛋白的目的。
[0017](3)本發明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，所制得的脫蛋白后的猴頭菇多糖提取液，其蛋白質含量只為12.3?12.8%，具有蛋白質去除率高的優點，其中，蛋白質去除率達到59.64%?60.58%，高于現有技術的Sevage法的蛋白質去除率(52%?53.8%)。
[0018](4)本發明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，具有多糖損失率低的優點，其猴頭菇多糖的損失率為12%?16.5%，遠遠低于現有技術的Sevage法的多糖損失率(52%?55%)ο
[0019](5)本發明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，由于脫蛋白的試劑為殼聚糖-醋酸溶液，其使用量低，殘留量低，且殼聚糖具有降血脂、降血糖等生理活性，因此，該猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法具有安全無毒、綠色環保的優點。
[0020](6)本發明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，具有處理方法簡單，易操作，生產成本低，且能夠適用于大規模生產的特點，并能夠應用于相關食品保健產品的生產。
【具體實施方式】
[0021]為了使本發明所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0022]實施例1。
[0023]本實施例的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，它包括以下步驟:
步驟一，配制殼聚糖-醋酸溶液:將殼聚糖溶解于醋酸溶液中，攪拌均勻，即制得殼聚糖-醋酸溶液;本實施例中，醋酸溶液中醋酸的體積百分比濃度為1%，殼聚糖-醋酸溶液中的殼聚糖的質量百分比濃度為2.5%;
步驟二，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合:將猴頭菇多糖提取液與步驟一制得的殼聚糖-醋酸溶液采用旋渦混合器混合均勻，得到第一混合物;本實施例中，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的體積比為50:1;
其中，步驟二的猴頭菇多糖提取液是以猴頭菇子實體粉末為原料，然后進行熱水浸提，并離心處理后得到的猴頭菇多糖提取液；
步驟三，第一次離心處理:將步驟二得到的第一混合物進行第一次離心處理，得到第一上清液，然后將第一上清液處于4°C下靜置2.5h;本實施例中，第一次離心處理的離心速度為3000r/min，離心時間為13min;
步驟四，第二次離心處理:將步驟三中靜置后的第一上清液進行第二次離心處理，得到第二上清液，然后將第二上清液處于4°C下放置2.5h，即制得脫蛋白后的猴頭菇多糖提取液;本實施例中，第二次離心處理的離心速度為3000r/min，離心時間為13min。
[0024]本實施例的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，其所制得的脫蛋白后的猴頭菇多糖提取液的蛋白含量12.5%。另外，根據考馬斯亮藍法測定得到蛋白質的去除率達到60.01%，多糖損失率僅為16.40%，殼聚糖殘留率為0.21%。
[0025]實施例2。
[0026]本實施例的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，它包括以下步驟:
步驟一，配制殼聚糖-醋酸溶液:將殼聚糖溶解于醋酸溶液中，攪拌均勻，即制得殼聚糖-醋酸溶液;本實施例中，醋酸溶液中醋酸的體積百分比濃度為0.5%，殼聚糖-醋酸溶液中的殼聚糖的質量百分比濃度為1%;
步驟二，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合:將猴頭菇多糖提取液與步驟一制得的殼聚糖-醋酸溶液采用旋渦混合器混合均勻，得到第一混合物;本實施例中，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的體積比為40:1;
其中，步驟二的猴頭菇多糖提取液是以猴頭菇子實體粉末為原料，然后進行熱水浸提，并離心處理后得到的猴頭菇多糖提取液；
步驟三，第一次離心處理:將步驟二得到的第一混合物進行第一次離心處理，得到第一上清液，然后將第