一種水蛭素的提取方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種水賠素的提取方法，屬于水賠素提取技術領域。
【背景技術】
[0002] 水賠素是水賠及其唾液腺中已提取出多種活性成分中活性最顯著并且研究得最 多的一種成分，它是由65~66個氨基酸組成的小分子蛋白質(單鏈多膚）。水賠素對凝血酶有 極強的抑制作用，是迄今為止所發現最強的凝血酶天然特異抑制劑，對人類屯、腦血管疾病 尤其是腦血栓等血栓性疾病有較高的療效，其防治效果是任何物質(包括目前臨床上常規 使用的阿司匹林和肝素)所難W比擬的，運是因為:一方面，天然水賠素的抗栓功能不需要 其它因子的參與，加上其分子量遠比肝素要小，滲透性強，容易到達血栓內部，并將其溶解； 另一方面，天然水賠素不會像肝素等抗凝劑那樣易引起出血等難W克服的副作用，從而使 天然水賠素成為世界公認的防治屯、腦血管疾病最好的天然藥物。現有水賠素的提取分為水 賠活體提取和干水賠粉碎提取，水賠素分布在水賠的口部和分泌的唾液中，干水賠粉碎提 取的提取量低且提取工藝成本較高。現有技術中雖然存在活體提取水賠素的設計，但其提 取方法存在較多缺陷。
[0003] 申請人發現現有的活體提取水賠素的方法存在W下缺陷：首先，現有的活體提取 方法對水賠素的提取量低。水賠的耐饑餓能力較強，一次吸飽血后能夠多天甚至數月不進 食，水賠只有在進食的過程會分泌大量分泌液，分泌液中含有高含量的水賠素，而現有的活 體提取技術水賠分泌的分泌液量較少。其次，現有的提取方法對水賠活體造成傷害，無法高 效的反復提取。現有的活體提取方法多采用對喂食后的水賠進行電機刺激促使水賠分泌唾 液，或者水賠吸飽血液后刺激水賠反當。現有的電刺激法活體水賠提取中，當多條水賠提取 時電刺激法的電量不易控制，并且多次電刺激后水賠的活力降低，水賠素的提取量減少。現 有的反當法提取水賠素時，需要先讓水賠吸飽血，再通過添加刺激劑促使水賠反當，其所得 反當液中水賠素含量低，血液消耗量大，且操作過程中水賠易死亡。現有技術中水賠一次飽 食提取后需將水賠饑餓40~60天，才能進行下一次提取。再次，現有的提取方法所得粉末狀 水賠素中細菌含量高，過高的細菌含量導致其只能用作口服制劑。最后，現有的提取方法所 得粉末狀水賠素為黑色、深褐色或紅棟色，顏色較重，雜質多且活性成分含量較低。
【發明內容】
[0004] 本發明要解決的技術問題是:克服現有技術的不足，提供一種水賠素的提取方法， 該水賠素的提取方法對水賠素的提取量大，且能夠反復提取，最終所得粉末狀水賠素色澤 淺、活性成分含量高。
[0005] 本發明解決其技術問題所采用的技術方案是:該水賠素的提取方法，其特征在于， 包括如下步驟： 1) 饑餓處理:將活的水賠進行饑餓處理； 2) 刺激分泌:保持環境溫度23~40°C，在波長200皿~275皿紫外線照射下，向水賠的體 表噴灑誘導劑，紫外線照射時間為30~180秒，關閉紫外線，采用暖白光明滅閃爍的方式照射 水賠3~15分鐘，或者采用暖白光和綠光交替明滅閃爍的方式照射水賠3~15分鐘，W刺激水 賠分泌分泌液;暖白光色溫為2000~4500K，綠光波長500nm~560皿，暖白光閃爍頻率和綠光 的閃爍頻率均為0.2~細Z; 3) 滅菌:收集分泌液，采用波長200nm~275nm紫外線照射分泌液進行殺菌； 4) 濃縮:將分泌液采用25~40°C風干，或者采用冷凍干燥，獲得固態粉末，即得。
[0006] 所述的水賠為日本醫賠、茶色賠或菲牛賠的活體。
[0007] 步驟2)所述的誘導劑為血液和水按體積比1: ^lO稀釋后獲得，誘導劑的體積與水 賠的質量按比值^51111: 1000 g使用。
[000引所述的血液為雞血、牛血、豬血、羊血中的至少一種。
[0009] 步驟1)饑餓處理的具體操作為:保持環境溫度23~40°C，將水賠放入維C水溶液中 靜置2~12小時，維C水溶液由維生素 C和水按質量比3~5:1000混合而成。
[0010] 步驟2)的具體操作為：保持環境溫度25~28°C，在波長250nm~270nm紫外線照射 下，向水賠的體表噴灑誘導劑，紫外線照射時間為60~120秒，關閉紫外線，采用暖白光明滅 閃爍的方式照射水賠5~10分鐘，或者采用暖白光和綠光交替明滅閃爍的方式照射水賠5~10 分鐘，W刺激水賠分泌分泌液。
[0011] 步驟2)所述的暖白光色溫為2700~3200K，綠光波長520nm~540皿，暖白光閃爍頻率 和綠光的閃爍頻率均為^3化。
[0012] 所述的步驟2)和步驟3)之間或者步驟3)和步驟4)之間還設有過濾步驟，過濾步驟 的具體操作為:將分泌液通過濾膜過濾器過濾，過濾孔徑為0.4~4微米。
[0013] 步驟2)所述的噴灑具體操作為采用霧化器將誘導劑霧化成微小液滴，將霧化后的 誘導劑噴灑在水賠的體表。
[0014] 因此申請人在步驟1)中對水賠進行饑餓處理，有助于誘導水賠在步驟2)號分泌更 多的唾液，提高水賠素的提取量。將水賠放入維C水溶液中靜置2~12小時，維C水溶液可W形 成較好的饑餓環境，并且維生素 C還具有抑菌的作用，減少水賠素中的細菌數量。維C水溶液 由維生素 C和水按質量比3~5:1000混合而成，該濃度為最佳濃度，既能模擬饑餓環境又能夠 避免對水賠本身造成傷害。
[0015] 水賠素主要分布在水賠通過口部分泌的分泌液(也稱作唾液）中，水賠只有在接收 到刺激時才能夠分泌大量唾液。現有技術中只單獨采用誘導劑進行進食刺激，而申請人在 研究中發現:性刺激同樣能夠促進，水賠屬于冷血環節動物、雌雄同體，在每年6~10月為水 賠的產卵期，并且水賠（日本醫賠、茶色賠或菲牛賠)在每日的黃昏時分為一天中活力最為 旺盛的時間，在水賠產卵期內，每日黃昏時分給予水賠少量進食刺激，分泌液的量能夠明顯 增多。經申請人進一步研究發現:水賠為了取食、生殖和自身的防御必須不斷地通過光、水 波、化學物質及物理刺激來接受周圍環境的信息，對每種信息又有相應的感覺結構。水賠通 過化學感受器來感受化學物質，產生進食刺激，而在水賠體表還分布有皮膚感受器，運種感 受器對微弱的水擾動和光刺激都非常敏感。因此申請人在步驟2)中通過保持環境溫度23~ 40°C，W此模擬水賠產卵期的溫度，暖白光明滅閃爍的方式照射水賠3~15分鐘，或者采用暖 白光和綠光交替明滅閃爍的方式照射水賠3~15分鐘，來給予水賠光刺激。暖白光色溫為 2000~4500K是最接近自然光的光照條件，優選的暖白光色溫為2700~3200K是最接近午后至 黃昏時間的光照條件，W模擬黃昏時的自然光光照條件。
[0016] 暖白光明滅閃爍的方式是指暖白光進行明一滅一明一滅的周期閃爍。暖白光和綠 光交替明滅閃爍的方式指的是采用暖白光明、綠光滅一暖白光滅、綠光明一暖白光明綠光 滅一暖白光滅綠光明的周期閃爍。申請人在研究中發現:當采用暖白光明滅閃爍的方式時， 能夠給予水賠足夠的光刺激，提高水賠的活力，促使水賠分泌更多的水賠素。對水賠進行光 刺激時，光的閃爍頻率不能過短也不能過長，閃爍頻率均為0.2~細Z時能達到較好的效果， 優選閃爍頻率1~3Hz，即每秒鐘閃1~3次。申請人添加綠光是為了模擬水賠在水下的光照環 境，暖白光和綠光交替明滅閃爍的方式的光刺激效果優于暖白光明滅閃爍的方式。優選的， 步驟2)中紫外光光源位于水賠上方0.8~1.5米，紫外光光源位于誘導劑的噴灑口上方，紫外 光光源的功率與水賠的質量之比為0.5~2W: 100~250克。步驟2)中暖白光和綠光的光源位于 水賠上方0.8~1.5米，暖白光和綠光的光源的功率與水賠的質量之比為2~4W: 100~250克。步 驟2)中的暖白光和綠光的光源W燈組的形式安裝在水賠上方。優選的，暖白光和綠光的光 源為LH)燈頭。
[0017] 申請人在研究中發現:水賠的耐饑餓能力較強，一次吸飽血后能夠多天甚至數月 不進食，水賠只有在進食的過程會分泌大量分泌液，分泌液中含有水賠素。現有的反當法提 取水賠素必須先讓水賠飽食再反當，作為誘導劑的血液消耗量大，且水賠素與反當物混在 一起，給后續水賠素分離帶來較大困難。申請人經過研究，在步驟2)中設計通過向水賠的體 表噴灑誘導劑，噴灑的方式消耗的血液量少，并且能夠延長水賠的進食時間