一種穩定的酶法血清鎂離子檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及臨床體外檢測試劑技術領域，特別設及到利用酶法檢測血清中的血清 儀離子含量的試劑盒。
【背景技術】
[0002] 血清儀離子檢測方法主要有W下幾種:離子層析法、酶法、比色法、同位素法、巧光 法等。
[0003] 血清儀離子最具有權威的檢測方法是同位素法，但是同位素法檢測血清儀離子的 設備較為復雜，價格較為昂貴，不適合自動分析。
[0004] 比色法主要包括達旦黃法，巧儀試劑法，偶氮法和甲基廳香草酪藍法。相對于同位 素法，比色法價格便宜，操作簡單，便于常規實驗操作。但是對儀器損傷較大，不能排除膽紅 素干擾的問題，穩定性也極差。
[0005] 離子色譜法測定血清儀離子，操作復雜。需要前期對樣本進行有效處理，但是處理 不慎就會出現結果不準確，受人為影響因素較大，不適于自動化分析。
[0006] 酶法檢測血清儀離子在近一段時間來有了很大突破，也取得了飛躍式進展。酶法 檢測結果較為準確，可用于自動化分析儀，相比于同位素法，酶法價格便宜，能夠滿足醫院 檢驗和實驗室常規操作。但是，同樣也存在一定問題，酶法檢測血清儀離子是通過酶促反應 進行的，通過底物引起一定波長下的吸光度變化，間接計算出血清儀離子含量。但是酶法由 于其中有很多酶類參與生化反應，其穩定性也是試劑成敗的關鍵，目前市場上流通的酶法 血清儀離子檢測診斷試劑盒，均做不到在保證酶活的基礎上，延長試劑儲存時間，因此試劑 極易雙到溫度的影響和破壞。
【發明內容】
[0007] 針對W上技術問題，本發明提供了一種穩定的酶法血清儀離子檢測診斷試劑盒， 通過一定的保護劑對試劑中的不同酶類加 W保護，減少或抑制酶發生反應，在保證酶活的 基礎上，延長了試劑的儲存和使用時間，本發明試劑盒主要是解決了酶法血清儀離子試劑 不穩定W及抗膽紅素干擾問題。
[000引本發明的檢測原理如下：
該方法是通過還原型輔酶的變化來檢測儀離子的變化，通過反應原理不難發現主要是 儀離子激活己糖激酶，反應生成腺巧二憐酸，腺巧二憐酸和締醇式丙酬酸在丙酬酸激酶作 用下生成丙酬酸，丙酬酸在氨離子和還原型輔酶存在條件下，通過丙氨酸脫氨酶氧化作用 生成丙酬酸，1^-丙氨酸和還原型輔酶。還原性輔酶在WOnm波長有最大吸光值，通過監測 340nm處吸光度變化，從而計算出還原型輔酶含量間接的計算出儀離子的含量。
[0009] 應用本發明試劑盒測定血清中儀離子含量方法如下：檢測波長為340nm，樣本量： 試劑 R1:試劑 R2=10ul: 150ul: 150ul。
[0010] 本發明是一種穩定的血清儀離子檢測診斷試劑盒，本發明試劑盒是由試劑R1和試 劑R2兩種試劑組成的液體型雙試劑檢測診斷試劑，其中試劑R1組成為： 甘氨酸-鹽酸緩沖液 0.1mol/L NADH 25mmol/L 葡萄糖 0.1-0.5g/L 腺巧Ξ憐酸 2mmol/L 憐酸締醇式丙酬酸 2mmol/L CTAB 5mmol/L Ξ氯甲燒 O.lml/L 丙 Ξ醇 0.1-0.75ml/L 聚乙二醇 0.3-0.5g/L 葡聚糖 l-2.34g/L D-化喃葡萄糖 0.05-0.1 g/L; 試劑R2組成為： T00S 緩沖液 O.lmol/L 丙氨酸脫氨酶 1000-5000U/L 己糖激酶 2500-4000U/L 丙酬酸激酶 3000U/L 聚乙二醇 l-1.5g/L 葡聚糖 0.7-1.5g/L D-化喃葡萄糖 0.25-0.5g/L。
[0011] 本發明提供的穩定的血清儀離子監測診斷試劑盒中，甘氨酸-鹽酸緩沖液主要是 緩沖作用，保證反應時外環境的穩定，致使檢測結果不會受到波動和影響。NADH還原型輔酶 在酶促反應中生成不同形式的輔酶，引起吸光度變化。葡萄糖、腺巧Ξ憐酸W及憐酸締醇式 丙酬酸是用作反應底物，參與酶促反應。CTAB十六烷基Ξ甲基漠化錠作為反應助溶劑、加速 劑，保證良好的配位性，提供錠離子。Ξ氯甲燒用于清除膽紅素在檢測時引起的干擾。丙Ξ 醇、聚乙二醇、葡聚糖和D-化喃葡萄糖通過不同配比組合形成一定的保護膜，在一定條件下 將酶包裹起來，抑制反應，但是在當促溶劑存在的某一條件下，將包裹的酶釋放出來參與反 應。TOOS緩沖液主要是緩沖作用，保證反應時外環境的穩定，致使檢測結果不會受到波動和 影響。丙氨酸脫氨酶作用粗話丙酬酸脫氨反應生成丙氨酸。己糖激酶催化葡萄糖生成葡萄 糖-6-P。丙酬酸激酶催化締醇式丙酬酸生成丙酬酸。
[0012]本發明可從應用到迪瑞、邁瑞、日立、東芝等系列的全自動化分析儀中進行自動化 檢測。
[001引應用本發明進行體外樣本診斷檢測時，操作方法如下，設置波長為340nm，終點法， 樣本量:試劑R1:試劑R2=10ul: 150ul: 150ul。樣本針吸取樣本后于試劑R1中進行解育，W保 證反應環境外界條件的穩定，然后讀取吸光光度值為ΔΑ1，加入試劑R2后反應一定時間讀 取Δ A2。血清儀離子含量=(Δ A2- Δ A1)標準物質濃度。
[0014] 和市場目前流通的酶法血清儀離子檢測試劑盒相比，本發明穩定性好，抗膽紅素 能力強，重復性好，操作簡便，便于儲存和運輸。適用于全自動生化分析儀，臨床使用價值較 大。
【附圖說明】
[0015] 圖1為對照試劑盒與本發明相關性圖。
【具體實施方式】
[0016] 我們將結合圖表、實施例對本發明進行說明。
[0017]實施例1 本發明在具體實施中，所述的試劑R1為： 甘氨酸-鹽酸緩沖液 0.1mol/L NADH 25m mol/L 葡萄糖 0.5g/L 腺巧Ξ憐酸 2mmol/L 憐酸締醇式丙酬酸 2mmol/L CTAB 5mmol/L Ξ氯甲燒 O.lml/L 丙 Ξ醇 0.75ml/L 聚乙二醇 〇.5g/L 葡聚糖 2.34g/L D-化喃葡萄糖 O.lg/l; 試劑R2組成為： T00S 緩沖液 O.lmol/L 丙氨酸脫氨酶 5000U/L 己糖激酶 2500U/L 丙酬酸激酶 3000U/L 聚乙二醇 1.5 g/L 葡聚糖 0.7 g/L D-化喃葡萄糖 0.5 g/L 實施例2 本發明在具體實施中，所述的試劑R1為： 甘氨酸-鹽酸緩沖液 0.1mol/L NADH 25m mol/L 葡萄糖 0.25 g/L 腺巧Ξ憐酸 2m mol/L 憐酸締醇式丙酬酸 2m mol/L CTAB 10m mol/L Ξ氯甲燒 0.1 ml/L