氯噻酮的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，設及氯嚷酬的新用途，具體設及氯嚷酬的藥物組合物 及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 氯嚷酬是一種臨床常用的利尿藥。
[0003] 迄今為止，尚未見氯嚷酬及其藥物組合物與骨性關節炎的相關性報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種氯嚷酬的藥物組合物，該藥物組合物中含有氯嚷酬和 一種結構新穎的天然產物，氯嚷酬和該天然產物可W協同治療骨性關節炎。
[0005] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得W實現的：
[0006] -種具有下述結構式的化合物(I)，
[0007]
[000引一種氯嚷酬的藥物組合物，包括氯嚷酬、如權利要求1所述的化合物（I)和藥學上 可W接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進一步地，藥學上可W接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011] 上述化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：（a)將紫草粉碎，用65~85%乙醇 熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取， 分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用 大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70%洗脫 液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離， 依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟 (C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:巧P2:l的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分 濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合 物(I)。
[0012] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0013] 進一步地，化合物(I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0014] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲燒代替乙酸乙醋進行萃 取，得到二氯甲燒萃取物。
[0015] 上述化合物(I)在制備治療骨性關節炎的藥物中的應用。
[0016] 上述氯嚷酬的藥物組合物在制備治療骨性關節炎的藥物中的應用。
[0017] 本發明的優點:本發明提供的氯嚷酬的藥物組合物中含有氯嚷酬和一種結構新穎 的天然產物，氯嚷酬和該天然產物單獨作用時，對骨性關節炎具有治療作用;二者聯合作用 時，對骨性關節炎的治療效果進一步提高，可W開發成治療骨性關節炎的藥物。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不W此限定本發明保護范 圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0020] 分離方法：（a)將紫草（3kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取（20LX3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（化），依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽和的正下醇 (化X3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟(a)中 正下醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個 柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70 %乙醇洗脫濃 縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1(8個柱體積）、25:1(8個柱體積）、15:1(8個柱體 積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正 相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體 積)的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(IKHPLC歸一化純度大于98% )。
[0021] 結構確證:皿-ESI-MS顯示[M+化r為m/z 397.1984,結合核磁特征可得分子式為 C22H3QO5，不飽和度為8。核磁共振氨譜數據SH(ppm，CDCl3,500MHz ):H-la( 1.36，m) ,H-Ib (1.52，m)，H-2a(1.91，m)，H-%(2.02，m)，H-5(1.92，m)，H-6a(2.05，m)，H-6b(2.47，dd，J = 14.3,4.6Hz)，H-9(2.26，m，2H)，H-12(1.83，s)，H-13(2.03，s)，H-14(0.95，s)，H-15(1.77， s)，H-3'（5.11，q J = 6.細z)，H-4'（ 1.32，dJ = 6.6Hz)，H-5a'（6.32，d J= 10.3Hz)，H-化' (6.11，(1^ = 10.3化），3'-4。0(1.98,8);核磁共振碳譜數據扣(口口111，〔0(：13，1251化）：29.4 (C 出，l-C)，23.8(CH2,2-C)，136.7(C，3-C)，126.3(C，4-C)，49.7(CH，5-C)，29.4(Ol2,6-C)， 130.2(C，7-C)，201.1(C，8-C)，59.8(Ol2,9-C)，36.7(C，10-C)，145.3(C，ll-C)，22.3(ai3， 12-C)，23.1(Ol3，13-C)，18.4(CH3，14-C)，11.7(ai3，15-C)，167.3(C，r-C)，137.6(C，2'-C)，65.4(CH，3'-C)，17.3(CH3,4'-C)，125.7(CH2,5'-C)，169.2(C，3'-Ac0)，21.7(C曲，3'-AcO)。紅外波譜中的1715cm-i與1680cm-i吸收帶表明結構中存在幾基與雙鍵片段。"C-NMR、 DEPT和HSQ幻普中顯示有22個碳信號，包括六個甲基，五個亞甲基(一個締控碳），兩個次甲基 (一個連氧碳），W及九個季碳(=個幾基碳和五個締控碳）。W上功能結構再結合不飽和數 表明該化合物為雙環結構。Ih-匪R譜結合HSQC譜顯示五個甲基質子信號Sh 0.95(3H，s)、 1.32(3H，d，J = 6.細z)、1.77(3H，s)、1.83(3H，s)、2.03(3H，s)，一個乙酷基甲基質子信號? 1.98(3H，s)，一個連氧次甲基質子信號?5.11(lH，q，J = 6.細z)，一個締屬亞甲基質子信號 Sh 6.32(lH，d，J= 10.3Hz)與6.11(lH，d，J= 10.3Hz); W上NMR數據可W確認該化合物為闊 巷菊酬衍生物。HMBC譜中出-12與C-11、曲-13/C-11、出-14/C-10、出-15/C-4的相關信號可W 歸屬為闊巷菊酬上的片段。通過HMBC譜中H-3'與3'-AcO、C-2'和C-4'，W及此-5'與C-2'和 C-r的相關信號可W確認結構中存在3'-乙酷基-2'-締-下酷氧基邊鏈結構，而質子信號Sh 6.32(J= 10.3Hz)、6.11 (J= 10.3Hz) W及 1.32(J = 6.細Z)可W歸屬為此-5'的締基信號與 出-4'的甲基信號。N犯SY譜中He-I與出-14，Ha-l與H-5的相關信號暗示H-5和出-14在異偵M宗 合氨譜、碳譜、HMB村普和NOESY譜，W及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如 下所示，立體構型進一步通過EC的式驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學式及 碳原子編號如下：
[0022]
[0023] 實施例2:藥理作用
[0024] 1、材料與方法
[0025] 1.1 動物
[00%] 10月齡普通級日本大耳白兔60只，體重2.5~3.化g，雌雄不限。由貴陽醫學院實驗 動物中屯、提供，飼料由該中屯、提供標準飼料。
[0027] 1.2試劑與樣品
[002引氯嚷酬購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例1。木瓜 蛋白酶(Papain) :Merk公司產品；硫酸軟骨素標準品：Sigma公司產品；膜蛋白酶、胃蛋白酶、 肥l、NaOH、高嶺±、活性炭、95%乙醇、乙酸。
[0029] 1.3 儀器
[0030] 骨科常用手術器械、溫度計、濾紙、分液漏斗、離屯、機、干燥器、試管、恒溫水浴箱、 冷凍庫、紫外分光光度計、間苯=酪、冰醋酸、超聲波清洗機、全自動電子分析天平。
[0031] 1.4白兔分組及模型制備
[0032] 按照組間均衡一致的原則，將60只日本大耳白兔隨機分成5組，分別為正常對照 組、模型對照組、氯嚷酬組(80mg