一種環阿爾廷型三萜烯類化合物及其制備方法和醫藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體涉及從干燥的滿山紅中分離得到的一種具有心肌 保護作用的環阿爾廷型三萜烯類化合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 滿山紅為杜鵑花科杜鵑花屬植物興安杜鵑的干燥葉，俗稱映山紅、達子香等。秋、 冬采，曬干，分布于黑龍江、吉林、內蒙古等地，生于山脊、山坡及林下酸性土壤上。始載于 《東北常用中草藥手冊》，其味辛、苦、性寒，具有止咳、祛痰的功效，主要用于治療急(慢)性 支氣管炎和哮喘，且鎮咳、祛痰效果較好。以滿山紅為原料制成的制劑主要有:消咳喘、映山 紅片、復方滿山紅糖漿、止咳喘沖劑、復方滿山紅膠囊、復方滿山紅片等。
[0003] 近些年，相關學者對滿山紅所含化學成分進行了大量的研究，從中分離鑒定了數 十種化合物。其中主要類型有黃酮類、揮發油類、香豆素類、酚酸類、三萜類等。
[0004] 現代藥理研究表明滿山紅具有鎮咳、平喘祛痰作用，降壓、利尿作用，鎮痛作用，對 中樞抑制作用等。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種從干燥的滿山紅中分離得到的一種具有心肌保護作用 的環阿爾廷型三萜烯類化合物及其制備方法。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007] 具有下述結構式的化合物(I)，
[0008]
[0009] 所迚的1七甘被?力汰，迅百以卜深仆少驟：將干燥的滿山紅粉碎，用75 ~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用75%乙醇洗脫10個柱體 積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸 膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80 :1、45:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為15:1、10:1和 5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進一步地，所述大孔樹脂為D101大孔吸附樹脂。
[0011] 進一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80%。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備心肌保護藥物中的應用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備心肌保護藥物中的應用。
[0015] 本發明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0020] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0021] 制備方法：（a)將干燥的滿山紅（10kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提取(25L X 3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽和的 正丁醇（3LX 3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(431g)和正丁醇萃取物； (b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用 75 %乙醇洗脫10個柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏（172g); (c) 步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個柱體積）、45:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、10:1 (10個柱體積)和1:1 (5個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4(65g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為 15:1(8個柱體積）、10:1(10個柱體積)和5:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3 個組分；（e)步驟(d)中組分2(37g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度 為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物（I)(45mg)。
[0022] 結構確證:黃色固體;HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 569.3874，結合核磁特征可得 分子式為C34H48〇7，不飽和度為11。核磁共振氫譜數據δΗ(ρρπι，DMS〇-d 6，500MHz):H-1 (6 · 02， d，J=12.6Hz)，H-2(5.85，d，J=12.6Hz)，H-4(4.43，qd，J = 6.7,4.3Hz)，H-5(2.22，m)，H-6 (0.79，qd，J=12.8,2.4Hz)，H-6(1.82，m)，H-7(l.ll，m)，H-7(1.41，m)，H-8(1.79，dd，J = 10.6,6.6Hz)，H-ll(1.52，m)，H-ll(2.08，m)，H-12(1.69，m)，H-12(1.72，m)，H-15(1.24， ddd，J=13.7，12.5,3.6Hz)，H-15(2.33，dd，J=13.7,8.2Hz)，H-16(5.03，ddd，J = 8.2,7.5， 3.6Hz)，H-16b(2.06，s)，H-17(2.25，dd，J=10.5,7.5Hz)，H-18(l.ll，s)，H-19(0.89，d，J = 4.4Hz)，H-19(0.98，d，J = 4.4Hz)，H-20(2.51，m)，H-21(0.81，d，J = 6.8Hz)，H-22(5.53，br， s)，H-22b(2.14，s)，H-24a(2.32，s)，H-26(1.98，s)，H-27(2.21，s)，H-28(1.29，d，J= 6 · 8Hz)，H-30 (0 · 91，s);核磁共振碳譜數據δ。(ppm，DMS〇-d6，125MHz): 150 · 5 (CH，1 -C)，119 · 4 (CH，2-C)，168.2(C，3-C)，79.3(CH，4-C)，44.8(CH，5-C)，23.2(CH2,6-C)，24.5(CH2,7-C)， 45.6(CH，8-C)，30.2(C，9-C)，37.0(C，10-C)，28.5(CH2，n-C)，32.6(CH2，12-C)，45.6(C，13-C)，47.3(C，14-C)，46.9(CH2，15-C)，76.3(CH，16-C)，170.2(C，16a-C)，22.7(CH 3，16b-C)， 50.5(CH，17-C)，18.5(CH3，18-C)，32.0(CH2，19-C)，32.5(CH，20-C)，12.6(CH 3,2hC)，77.7 (CH，22-C)，170.8(C，22a-C)，21.2(CH3,22b-C)，197.2(C，23-C)，132.8(C，24-C)，20.3(CH 3， 24a-C)，139.1(C，25-C)，22.0(CH3,26-C)，21.8(CH3,27-C)，18.3(CH3,28-C)，20.1(CH 3,30-C)。IR譜圖中的1715cm-1與1694cm-1吸收帶表明該化合物結構中存在羰基與共輒羰基;UV譜 圖中的最大吸收207nm與245nm說明結構中存在共輒雙鍵。氫譜核磁數據表明該結構中不飽 和度是由兩個C-C雙鍵結構，四個羰基結構以及五個環狀骨架組成。碳譜核磁數據與DEPT譜 數據表明該化合物結構中含有34個碳，其中有九個甲基（S C22.7、18.5、12.6、21.2、20.3、 22.〇、21.8、18.3與2〇.1)，六個亞甲基0。23.2、24.5、28.5、32.6、46.9與32.〇)，九個次甲 基（3。150.5、119.4、79.3、44.8、45.6、76.3、50.5、32.5與77.7)，十個叔碳（3。168.2、30.2、 37 ·0、45·6、47· 3、170.2、170.8、197.2、132.8與139.1)，一個酮基（δ。197.2)，三個酯羰基 (δ。168.2U70.2與 170.8)，三個連氧碳（δ。79·3、76·3與77.7)，四個烯碳（δ。150.5與 119.4; 132.8與139.1 )dH 0.89與δΗ 0.98的偶合常為數4.4,表明該化合物含有環丙烷結 構。通過HMBC解析可知δ。170.2的羰基碳與δΗ2.06的H-16b甲基組成乙酰基，同時δ Η 5.03的 Η-16與δ。170.2羰基碳也存在相關性，表明了乙酰基連接的位置;另δ。170.8的羰基碳與δΗ 2.14的!1-2213甲基組成乙酰基，且6115.52的!1-22與6。170.8羰基碳也存在相關性，表明了另 一個乙酰基與C-22相連。通過NOESY譜數據解析δ Η 4.43的Η-4、δΗ 1.29的Η-28與δΗ2.22的Η-5及δΗ 1.82的Η-6關系可以說明28-甲基相對立體構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜， 以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如下式所示，立體構型進一步通過 ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致；
[0023]
[0024] 實施例2:化合物（I)藥理作用試驗
[0025] -、材料和儀器
[0026]新生1~3天SD大鼠乳鼠 （SPF級），雌雄不拘，由廣西醫科大學實驗動物中心提供 (試驗動物生產許可證:SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(純度2 98% )為自制。胎牛血清購于 Hy Clone公司，DMEM培養基購于GIB⑶公司，二甲基亞砜(DMS0)、0.25%胰酶（含EDTA)購于 Solarbio公司，5-溴脫氧尿苷(5-Brdu)、四甲基偶氮唑鹽(MTT)購于美國Sigma公司，LDH測 試盒購于南京建成生物工程研究所，N0S試劑盒(分型）南京建成生物工程研究所，ATP酶試 劑盒(南京建成生物工程研究所），cTnI酶聯免疫吸附測試試劑盒、CK-MB酶聯