15-羥基雷公藤內酯酮的提取純化方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于中醫藥研究技術領域，具體涉及一種15-羥基雷公藤內酯酮的提取純 化方法。
【背景技術】
[0002] 雷公藤(Tripterygium willfordii Hook.f)系衛矛科雷公藤屬植物，以全根或去 皮根木質部入藥。雷公藤具有活血化瘀、清熱解毒、消腫散結、祛風除濕、殺蟲止血的作用， 臨床用于治療類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、腎炎、強制性脊柱炎等，但其有大毒，且其 臨床有效劑量與中毒劑量相近，這使雷公藤的全藥應用至今未能得到廣泛推廣。
[0003] 為了充分發揮雷公藤的藥用功效，國內外學者已從雷公藤屬植物中分離出幾十種 化學成分，主要有二萜、三萜、倍半萜、生物堿、苷類、糖類和醇類等。其中，雷公藤內酯酮 (Triptonide)，又叫雷公藤羰內酯、雷公藤酮，是從雷公藤中分離得到的二萜類化合物，其 具有抗炎、免疫抑制、抗新生血管等多種功效，是雷公藤藥物活性成分的一個重要的研究方 向。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種15-羥基雷公藤內酯酮的提取純化方法，所得15-羥基 雷公藤內酯酮的純度高，可為雷公藤內酯酮的化學結構、藥理作用等研究提供物質基礎。
[0005] 為實現上述目的，本發明采用如下技術方案： 一種15-羥基雷公藤內酯酮的提取純化方法，其包括以下步驟： 1) 將雷公藤粉碎，過20目篩，加其重量5倍體積的乙醇浸泡20_24h后，在雷公藤中加入 其重量30-35倍體積的乙醇作為滲濾液，每500mL收集一次，將其濃縮至干，加 lmL三氯甲烷 溶解后采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為陰性時停止滲漉，然后將滲漉液合并、濃縮， 得乙醇濃縮液； 2) 按體積比1:1.5將所得乙醇濃縮液加乙酸乙酯萃取5-6次，每次萃取過程中需振搖20 次，每次萃取后將收集的乙酸乙酯溶液濃縮，采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為陰性 時停止萃取然后將萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、濃縮，經微波干燥制得干粉； 3) 將所得干粉加等體積乙酸乙酯溶解后，按干粉與硅膠的重量比為1:80進行濕法上 柱，采用硅膠柱層析進行分離，將乙酸乙酯與石油醚按體積比2.2:2.8混合作為洗脫劑進行 洗脫，每500mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含有相同成 分的濃縮液，回收溶劑后微波干燥，得粗提干粉； 4) 將所得粗提干粉加等體積三氯甲烷溶解后，按粗提干粉與硅膠的重量比為1:120進 行濕法上柱，采用硅膠柱層析進行分離，將三氯甲烷與甲醇混合作為洗脫劑，按混合比例 99:1、98:2、97:3、96:4進行梯度洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液 進行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重結晶3-5次，得無 色針狀結晶，即為所述15-羥基雷公藤內酯酮。
[0006] 步驟1)所述雷公藤包含雷公藤植株的根心、根皮、莖和葉中的任意一種或幾種。
[0007] 步驟2)所述微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為40 °C，干燥時間為30-40min〇
[0008] 步驟3)所述微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為40 °C，干燥時間為 10min〇
[0009] 所得15-羥基雷公藤內酯酮的結構式為：
mp 217~219°C，HR-MSLM+H」+ :375.1459,分子式C2〇H23〇7(計算值：375.1442)[a]:+123(c 0 · 05，CHCI2)。與Kedde試劑顯紫紅色反應 ：218nm。IR 矽· f(cm-3 :3550，3010，2980， 1780，1760，1720，1430，1295，1250，908 JS m/z:374，358，343，330，315，301，259，255，206， 149，105，55 </H-NMR(CDCl3)S : 1·13(s，20-CH3)，1 · 32，1·59(m，卜Ha，β)，1·39(s，I6-CH3)， 1.43(s，17-CH3)，2.15(m，2-H0)，2·19，1.98(m，6-Ha，0)，2.33(br，2-Ha)，2.78(br，5-H)， 3.38(d，J=5Hz，7-H)，3.85(d，J=3Hz，12-H)，4.03(d，J=3Hz，n-H)，4.89(m，19-H2)，5.39(s， 1H，15-OH)^C-NMlKCDChM:30·9(卜0,17.3(2-0,125.39(3-0,159.3(4-C)，40.3(5-0,23.5(6-0,60.29(7-0,60.99(8-0,65.39(9-0,36.0(10-0,56.38(11-0,59.99 (12-C)，66.8(13-C)，198.0(14-C)，63.39(15-C)，18.3(16-C)，19.80(17-C)，173.30(18-0,70.3(19-0,13.69(20-C)〇
[0010] 本發明的顯著優點在于:按本發明提取純化方法制得的15-羥基雷公藤內酯酮純 度可達99%，且其得率約為9ΧΠΓ5,比現有文獻報道的提取工藝提高近80倍，可為闡明雷公 藤中的化學成分、藥理作用等研究提供科學的依據和物質基礎，也可為臨床應用雷公藤提 供科學的依據。
【具體實施方式】
[0011] 為了使本發明所述的內容更加便于理解，下面結合【具體實施方式】對本發明所述的 技術方案做進一步的說明，但是本發明不僅限于此。
[0012] 實施例1 一種15-羥基雷公藤內酯酮的提取純化方法，其包括以下步驟： 1) 將10kg包含莖和葉的雷公藤植株粉碎，過20目篩，加其重量5倍體積的乙醇浸泡20h 后，在雷公藤中加入其重量30倍體積的乙醇作為滲濾液，每500mL收集一次，將其濃縮至干， 加 lmL三氯甲烷溶解后采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為陰性時停止滲漉，然后將滲 漉液合并、濃縮，得乙醇濃縮液； 2) 按體積比1:1.5將所得乙醇濃縮液加乙酸乙酯進行萃取，每次萃取過程中需振搖20 次，每次萃取后將收集的乙酸乙酯溶液濃縮，采用TLC對其進行定性檢測，萃取5次后檢測萃 取液為陰性，停止萃取，然后將萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、濃縮，經微波干燥制得干粉， 微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為40 °C，干燥時間為30min; 3) 將所得干粉加等體積乙酸乙酯溶解后，按干粉與硅膠的重量比為1:80進行濕法上 柱，采用硅膠柱層析進行分離，將乙酸乙酯與石油醚按體積比2.2:2.8混合作為洗脫劑進行 洗脫，每500mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含有相同成 分的濃縮液，回收溶劑后微波干燥得粗提干粉，微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫 度為40°C，干燥時間為lOmin; 4) 將所得粗提干粉加等體積三氯甲烷溶解后，按粗提干粉與硅膠的重量比為1:120進 行濕法上柱，采用硅膠柱層析進行分離，將三氯甲烷與甲醇混合作為洗脫劑，按混合比例 99:1、98:2、97:3、96:4進行梯度洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液 進行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將從三氯甲烷與甲醇混合比例為97:3的部分得到的精提物加二氯甲烷溶解后，在二 氯甲烷和乙醚的混合液中重結晶3次，得15-羥基雷公藤內酯酮的無色針狀結晶0.93g，其純 度為99.1%。
[0013] 本實施例柱層析分離過程中所用硅膠經預先活化為I級，即于105°C烘箱中干燥 5h〇
[0014] 實施例2 一種15-羥基雷公藤內酯酮的提取純化方法，其包括以下步驟： 1) 將10kg包含根心、根皮、莖和葉的雷公藤粉碎，過20目篩，加其重量5倍體積的乙醇浸