一種杜仲綠原酸的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及杜仲葉提取技術，具體地說，涉及一種杜仲綠原酸的制備方法。
【背景技術】
[0002]杜仲(學名Eucommia ulmoides Oliver)，又名膠木，為杜仲科植物。杜仲為落葉喬木，高可達20米，胸徑約50厘米。樹皮灰褐色，粗糙，內含橡膠，折斷拉開有多數細絲。嫩枝有黃褐色毛，不久變禿凈，老枝有明顯的皮孔。芽體卵圓形，外面發亮，紅褐色，有鱗片6-8片，邊緣有微毛。葉橢圓形、卵形或矩圓形，薄革質，長6-15厘米，寬3.5-6.5厘米。基部圓形或闊楔形，先端漸尖;上面暗綠色，初時有褐色柔毛，不久變禿凈，老葉略有皺紋，下面淡綠，初時有褐毛，以后僅在脈上有毛。側脈6-9對，與網脈在上面下陷，在下面稍突起，邊緣有鋸齒，葉柄長1-2厘米，上面有槽，被散生長毛。花生于當年枝基部，雄花無花被;花梗長約3毫米，無毛;苞片倒卵狀匙形，長6-8毫米，頂端圓形，邊緣有睫毛，早落;雄蕊長約I厘米，無毛，花絲長約I毫米，藥隔突出，花粉囊細長，無退化雌蕊。雌花單生，苞片倒卵形，花梗長8毫米，子房無毛，I室，扁而長，先端2裂，子房柄極短。翅果扁平，長橢圓形，長3-3.5厘米，寬1-1.3厘米，先端2裂，基部楔形，周圍具薄翅。堅果位于中央，稍突起，子房柄長2-3毫米，與果梗相接處有關節。種子扁平，線形，長1.4-.5厘米，寬3毫米，兩端圓形。早春開花，秋后果實成熟。含杜仲膠6-10%、含糖甙0.142毫克％、生物堿0.066毫克％、果膠6.5毫克％、脂肪2.9毫克％、樹脂1.76毫克％、有機酸0.25毫克％、酮糖(水解前2.15毫克％、水解后3.5毫克％)、維生素C20.7毫克％、還含有維生素E，維生素B及β-胡蘿卜素等。種子所含脂肪油的脂肪酸組成為亞麻酸67.38%、亞油酸9.97%、油酸15.81%、硬脂酸2.15%.棕櫚酸4.68%。果實含膠量可達27%，易溶于乙醇、丙酮等有機溶劑。
[0003]杜仲游離氨基酸極少，含有的少量蛋白質，是和絕大多數食品類似的完全蛋白，SP能夠水解檢出對人體必需的8種氨基酸。測定了杜仲所含的15種礦物元素，其中有鋅、銅、鐵等微量元素，及鈣、磷、鉀、鎂等宏量元素。藥用杜仲，即為杜仲科植物杜仲的干燥樹皮，是中國名貴滋補藥材。其味甘，性溫。有補益肝腎、強筋壯骨、調理沖任、固經安胎的功效。可治療腎陽虛引起的腰腿痛或酸軟無力，肝氣虛引起的胞胎不固，陰囊濕癢等癥。在《神農本草經》中被列為上品。
[0004]現代研究杜仲具有清除體內垃圾，加強人體細胞物質代謝，防止肌肉骨骼老化，平衡人體血壓，分解體內膽固醇，降低體內脂肪，恢復血管彈性，利尿清熱，廣譜抗菌，興奮中樞神經，提高白血球藥理作用。
[0005]《中國藥典》2005版中缺乏對杜仲葉綠原酸類成分的提取辦法的記載，而文獻報道提取杜仲葉綠原酸方法則豐要為醇提法和水提法。
[0006]《時珍國醫國藥》2008杜仲葉中綠原酸的提取研究，《西北藥學雜志》2007杜仲葉中綠原酸的超聲提取工藝研究《西北藥學雜志》2007論文中，優選出60°C下，50%乙醇提取三次，每次2h的提取工藝。雖然其提取溫度比較低，但是提取時間長，一共需要提取6個小時，能耗大，提取效率低。
[0007]《時珍國醫國藥》2008杜仲葉中綠原酸的提取研究，《西北藥學雜志》2007杜仲葉中綠原酸的超聲提取工藝研究《西北藥學雜志》2007論文中，優選出了一種醇提方法，是用5-10目藥材，加10倍量80%乙醇，回流提取3次，每次lh。同樣顯示出是提取次數多，時間長的缺點，一共需要提取3個小時。
[0008]綜合上述文獻，發現所用方法提取基本完全，但同時存在消耗溶劑多，提取次數多，純度不高，活性不穩定，污染嚴重的缺點，為了更能節省溶劑和能源的消耗，減少環境污染，節約原材料，有必要改進杜仲綠原酸的提取及制備方法。
【發明內容】
[0009]本發明的目的是克服現有技術存在的不足，提供一種節約原材料、提取效率高、純度高、消耗溶劑少、無污染的杜仲綠原酸的制備方法。
[0010]為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案:
一種杜仲綠原酸的制備方法，包括如下步驟:將杜仲葉藥材取洗干凈杜仲葉藥材，加入軟水進行納米級水磨，置于植物提取罐中，加入嗜堿菌進行24h分解，加入乙醇濃度為60%，藥材與溶劑的重量體積比為I: 15，提取溫度65°C，提取時問120min，提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，加入乙醇進行制備色譜分離，得到杜仲綠原酸。
[0011]在上述杜仲綠原酸的制備方法中，所述醇溶液優選為甲醇或乙醇溶液。
[0012]在上述杜仲綠原酸的制備方法中，所述乙醇溶液體積濃度優選為65%_75%。
[0013]在上述杜仲綠原酸的制備方法中，所用杜仲葉藥材粗粉粒度優選為納米級水磨。由于杜仲干燥藥材比較堅硬，而嗜堿菌分解提取效率高，溫度低，所以有必要對藥材進行納米級水磨，增加藥材與溶劑接觸的面積，提高總皂苷的提取率。
[0014]在上述杜仲綠原酸的制備方法中，杜仲葉藥材與溶劑的重量體積比優選為1:15-
l:20o
[0015]在上述杜仲綠原酸的制備方法中，納米級水磨、嗜堿菌。
[0016]在上述杜仲綠原酸的制備方法中，溫度優選為60-70°C。
[0017]在上述杜仲綠原酸的制備方法中，提取時間優選為120-150min。
[0018]與現有技術相比，本發明具有如下有益效果:
1.該發明在提取過程中，利用納米級水磨、嗜堿菌的分解效應、機械效應及熱效應等增強溶劑對藥材的穿透力，有助于藥材中有效成分的溶出，從而提高有效成分的提取率，節約原材料，降低提取溫度，降低能耗，提高提取效率，減少對環境污染。
[0019]2.該發明的制備工藝中溶劑用量少，既節約溶劑又節約能源，降低生產成本，對環境零污染。
[0020]由于杜仲在《中國藥典》2005舨中缺乏含量測定項，所以參考文獻報道，杜仲綠原酸主要咖啡酸(caffeic acid)與奎尼酸(雞納酸,quinic acid,即1-輕基六氫沒食子酸)組成的縮酸酸，異名咖啡縣酸，化學名3-0-咖啡酰奎尼酸(3-0-caf-feoylquinic acid)，并結合實驗驗證，確定杜仲綠原酸的質量指標以綠原酸為對照品，采用的測定方法為分光光度法。具體方法為:取2g藥材的提取液，濃縮至干，1ml水溶解，用水飽和正丁醇萃取4次，洗滌萃取液，合并正丁醇液，濃縮至干用甲醇定容至1ml ο取甲醇液0.5ml，水浴揮干，加高氯酸I Oml, 65 0C水浴15min，冰水冷卻終止反應，制得樣品液。以高氯酸(分析純)為空白，在409nm下測定吸光度。
[0021]本發明所說的杜仲綠原酸得率=(總綠原酸重量/投入的藥材重量)X100%
杜仲綠原酸提取率=(杜仲綠原酸提取物中的綠原酸含量X總綠原酸重量/投入的杜仲藥材總綠原酸含量X投入的藥材重量)X 100%
下面通過具體實施例進一步闡述本發明的技術方案。
【具體實施方式】
[0022]以下實施例所用的杜仲綠原酸含量為5.06%o。
[0023]如下乙醇百分比均為體積百分比。
[0024]實施例1提取工藝條件的選擇
(I)納米水磨、嗜堿菌分解的時間對杜仲綠原酸提取效果的影響實驗方法:取杜仲葉500g納米級水磨，置于植物提取罐中，加入嗜堿菌溶液，加入量為總量的3.5%，分解24h，加入60%乙醇作為提取溶劑，藥材與溶劑的重量體積比為1:15，提取溫度65°C，選擇不同的分解時間提取一次，分解提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，干燥，即得杜仲葉提取物。考察不同提取時間下杜仲綠原酸的提取效果。結果如表I所示:
表I
時問提取率(％)
10h24.2
14h30.1
18h45.6
20h73.5
24h90.3
實驗結果顯示延長分解時間能增加總皂苷的提取率，24h時含量就已經達到最高。所以選取24h作為最佳提取時間。
[0025](2)提取溫度對杜仲綠原酸提取效果的影響
實驗方法:取500g杜仲葉藥材納米級粉末，置于植物提取罐中，嗜堿菌分解24h，加入60