高血壓易感基因SCN7A單核苷酸多態性位點rs7565062的檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及分子生物學和醫學領域。更具體地涉及人W型電壓口控鋼離子通道a 亞基基因 （sodium channel, voltage-gated, type VH , alpha subunit, SCN7A)的單核巧酸 多態性（single nucleotide polymo;rphism, SNP)位點rs7565062及其與原發性高血壓相 關性的檢測。本發明還涉及檢測送個SNP位點的方法和試劑盒。
【背景技術】
[0002] 現有技術公開了原發性高血壓（essential hypedension, EH)是一種多因素、多 基因疾病，由環境與遺傳因素共同致病的常見而多發的必血管病癥，對人類健康造成極大 的影響。隨著分子醫學的發展，目前已經發現的高血壓相關基因已經有150余種，但是邸 的發病機制仍然不完全清楚，高血壓的早期診斷和預防問題仍然未能完全解決。研究顯示， 邸是遺傳因子和環境共同作用的結果，血壓的變化30% -60%歸因于遺傳，由于環境因素 是可W控制和確認的，而對高血壓遺傳學因素卻是固定不變的，因此，對可變因素的控制， 如對高血壓危險因素的預防，可W在一定程度上延緩和防止高血壓的發病，但是對固定不 變的遺傳因素的認識不足卻在一定程度上嚴重影響著對高血壓發病、診斷和治療。因此對 高血壓遺傳學的研究十分必要（王佐廣，溫紹君，吳兆蘇.高血壓、易感基因與單核巧酸多 態性[J].高血壓雜志，2001,9:259-264)。
[0003] 近二十余年來，有關高血壓治療的研究更多地集中在對血壓的控制和對祀器官的 保護，并已取得突飛猛進的發展。但是，業內研究人員認為，送些手段并不能從根本上控制 血壓，目前對人類內源性抗高血壓基因的研究還很少，因此，研究內源性抗高血壓機制是今 后高血壓防治研究的主要方向之一，具有重要的研究價值和應用前景，業內研究人員認為， 通過調節內源性抗高血壓機制治療高血壓病，將會促進我國生物醫療技術的發展，并為我 國每年節省巨大的醫療費用。
[0004] 已有研究證實鋼鹽的過多攝取在高血壓的發生發展中發揮著重要作用。研究表 明有一種W前認為是電壓口控的鋼離子通道，目前被發現為鋼離子濃度依賴型鋼離子通 道，其能根據鋼離子濃度的變化改變鋼離子通道開放程度，在腦室周細胞中作為鋼離子感 受器，參與中樞對鋼鹽攝入行為的控制，因此可能參與了原發性高血壓的發生發展；而W 型電壓口控鋼離子通道基因（sodium channel, voltage-gated, type Vn, alpha subunit; SCN7A)編碼該鋼離子通道的重要功能結構一 a亞基，因此，有理由推斷SCN7A基因作為血 壓調節環節中的重要部分，其蛋白功能及結構的改變均可能參與了原發性高血壓的發生發 展，基于W上研究基礎，本申請在大樣本人群的關聯研究中證實該基因與原發性高血壓密 切相關，認為在該基因rs7565062位點上攜帶A等位基因的人群患高血壓的風險更高。
[0005] 綜上所述，本申請的發明人擬提供新的原發性高血壓易感基因，及其檢測方法、試 劑盒，W及相關的治療藥物。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是為克服現有技術的不足，提供一種新的檢測（包括早期診斷）高 血壓易感基因的方法及檢測試劑盒。具體涉及高血壓易感基因 SCN7A單核巧酸多態性位點 rs7565062的檢測試劑盒
[0007] 本發明提供了與高血壓密切相關的SCN7A基因單核巧酸多態性位點 rs7565062(位于SCN7A的5'引導序列中，片段重疊群contig ;NT_005403. 18位置 71981560A/C)；
[0008] 并經實驗證實，SCN7A基因單核巧酸多態性位點rs7565062位于SCN7A，5'引導序 列中（片段重疊群contig ;NT_005403. 18位置71981560A/C)基因型的改變將導致高血壓 的發病風險升高，其中關聯研究結果顯示，在SCN7A基因 rs7565062A - C在病例和對照組 中的分布存在顯著性差異（P<〇. 05)，該SNP多態性可改變轉錄因子結合位點。
[0009] 本發明涉及的SCN7A基因的詳細序列可參見登錄號為rs7565062的核巧酸序列 (可參見網址 ht1:p://www. ncbi. nlm. nih. gov/)。
[0010] 本發明人對SCN7A基因中的5'引導序列中（片段重疊群contig ;NT_005403. 18 位置71981560A/C)區域進行了測序。
[0011] 本發明涉及的SC7A基因 rs7565062位點的多態性可直接用于高血壓的個性化治 療；在使用本發明SCN7A基因 rs7565062位點的多態性時，還可同時使用其他治療高血壓的 藥劑。
[0012] 本發明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效的本發明SCN7A蛋白W及藥學 上可接受的載體或賦形劑。送類載體包括（但并不限于）：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、 己醇、及其組合。藥物制劑應與給藥方式相匹配。
[0013] 本發明的藥物組合物可W被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他 輔劑的水溶液通過常規方法進行制備；諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過常規方 法進行制備。
[0014] 本發明的藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊在無菌條件下制造；活性成分的給 藥量是治療有效量，例如每天0.1微克/千克體重-約10毫克/千克體重；此外，本發明的 多膚還可與其他治療劑一起使用。
[0015] 使用藥物組合物時，是將安全有效量的SCN7A蛋白或其枯抗劑、激動劑施用于普 哺乳動物，其中該安全有效劑量通常至少約0. 1微克/千克體重，而且在大多數情況下不超 過約10毫克/千克體重，較佳地該劑量是約0.1微克/千克體重-約100毫克/千克體 重。當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，送些都是熟練醫師技能范圍 之內。
[0016] 本發明中還涉及檢測SCN7A基因的rs7565062的基因型可用于診斷高血壓。檢測 可W針對基因組DNA，也可針對SCN7A基因的擴增片段。SCN7A基因的rs7565062的基因型 可用已有的技術如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測突變。
[0017] 在本發明中，提供了 SCN7A基因 rs7565062位點的基因型在檢測對高血壓易感性 制劑或方法中的用途，如提供了一種用于對個體的高血壓易感性進行診斷的方法，它包括 步驟：
[0018] 檢測該個體的SCN7A基因 rs7565062位點的基因型，W此判斷該個體患高血壓的 發病風險是否高于普通人群。
[0019] 在另一優選例中，所述的差異是選自下列的單核巧酸多態性：
[0020] RS7565062 位于 SCN7A，5,引導序列中（片段重疊群 contig ;NT_005403. 18 位置 71981560A/C)
[0021] 其中，脫氧核糖核酸值NA)序列編號；rs7565062位置基于沈Q ID NO ;1/6。
[0022] 在本發明的另一方面，提供了一種檢測樣品是否存在SCN7A基因的單核巧酸多態 性的方法，包括步驟：
[002引 （a)用SCN7A基因5'引導序列特異性引物擴增樣品的基因組DNA，得到擴增產物； 和
[0024] 化）檢測擴增產物中單核巧酸多態性位點rs7565062的基因型：
[00巧]RS7565062位于SCN7A，5,引導序列中（片段重疊群contig ;NT_005403. 18位置 71981560A/C)
[0026] 其中，脫氧核糖核酸值NA)序列編號；引物1基于SEQ ID NO ;2/6 ;引物2基于SEQ ID NO ; 3/6 ;探針1基于SEQ ID NO ;4/6 ;探針2基于SEQ ID NO ;5/6 ;擴增產物基于SEQ ID NO ; 6/6。
[0027] 在另一優選例中，所述的單核巧酸多態性是rs7565062位于SCN7A，5'引導序列中 (片段重疊群 contig ;NT_005403. 18 位置 7198156