嗜酸乳桿菌制劑及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明設及嗜酸乳桿菌制劑及其應用，具體設及嗜酸乳桿菌作為主要活性成份制 成微生態制劑，及該微生態制劑在治療相關疾病中的應用，屬于生物藥領域。
【背景技術】
[0002] 嗜酸乳桿菌在預防和治療疾病方面發揮越來越重要的作用，但目前已經上市的含 有嗜酸乳桿菌的產品效果不理想，因此篩選高效嗜酸乳桿菌菌種是目前亟需解決的問題， 尤其篩選到具有顯著抗過敏作用的嗜酸乳桿菌菌種。
[0003] 近年來，過敏疾病的發生率呈上升趨勢，根據世界衛生組織的數據，目前全球有 22 %的人患過敏性疾病，并且發病率迅猛增長，截止到2015年，全球已有40-50 %的人患有 過敏癥，WK)已把過敏性疾病列為21世紀需要重點研究和防治的Ξ大疾病之一。據統計我國 過敏性疾病的發病率高達37.3%，主要影響人群為嬰幼兒。
[0004] 尋找有效的過敏防治措施迫在眉睫。目前針對治療過敏性疾病比較普遍的方法是 使用藥物治療。如組胺括抗劑，可通過堵塞組胺感受器來抑制組胺反應，W及類固醇和抑制 肥大細胞釋放發炎物質的藥物、氣管擴張劑藥物等。但是運類藥物僅提供暫時的癥狀緩解， 無法真正改變過敏免疫反應，治標不治本。
[000引然而并不是所有的益生菌株都有抗過敏的作用。Taylor等將將患有過敏性疾病孕 婦的新生兒分成兩組，在出生后6個月內，每天服用嗜酸性乳酸桿菌或安慰劑，結果6個月時 兩組嬰兒的特異性皮炎發病率沒有差別，提示該試驗使用的嗜酸性乳酸桿菌并不會降低特 異性皮炎發病率（Taylor AL，Dunstan JA，Prescott SL，et al.Probiotic supplementationfor the first 6months of life falls to reduce the risk of atopic dermatitis and increases the risk of allergen sensitization in high- risk children.a randomized controlled trial.J Allergy Clin Inlmunol，2007，119 (1): 184-191.)。一項隨機對照研究給予經吸入過敏原誘導哮喘的青少年和成年人服用含 有嗜熱鏈球菌和嗜酸乳桿菌的奶制品，結果顯示哮喘的臨床癥狀、肺功能和炎癥的實驗室 標記物相對于對照組均沒有發生改變（Wheeler JG，aiema SJ，Bogle ML，et al. Immune and clinical impact of Lactobacillus acidophilus on asthma.Ann Allergy Asthma Immunol ,1997,79(3):229-233.)。說明只有某些乳酸菌菌株有抗過敏的免疫作用。本發明 嗜酸乳桿菌微生態制劑防治過敏等疾病療效顯著，并可作為藥品、保健品、食品、獸藥和飼 料添加劑等應用，社會意義巨大，且未見相關研究報道，特申請此發明專利。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種微生態制劑，該微生態制劑的活性成分為嗜酸乳桿菌 DH213，保藏編號CGMCC No. 11228,該微生態制劑具有預防或治療機體過敏反應等作用。
[0007] 根據菌株的菌落、菌體形態特征，leSrDNA序列分析及API細菌鑒定系統分析結果 來確認菌株在分類學地位，發現編號DH213的菌株為嗜酸乳桿菌;該株菌在形態學及一般性 質上的特征如下：
[000引 1、菌體或菌落形態
[0009] 菌體形態:菌體在顯微鏡下呈短桿狀，兩端為圓形，長1.5-6微米，寬0.6-0.9微米， W單個、成雙或短鏈排列。不運動，無鞭毛，無芽抱，革蘭氏染色陽性。
[0010] 菌落形態：固體培養基上菌落形態通常較粗糖，用顯微鏡觀察顯示為纏繞或微毛 絲狀物，從菌堆中屯、放射出來，深層菌落呈放射或分枝的不規則形狀，無色素。
[0011] 2、生理生化特征：
[0012] 最適生長溫度為35-38 °C，20 °C W下不生長，兼性厭氧。菌株的最適生長pH值5.5- 6.0，耐酸性強。不具有致病性，不產毒素。
[0013] 在糖發酵中，苦杏仁巧、纖維二糖、屯葉巧、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘 露糖、水楊巧、薦糖均能被發酵;不能發酵阿拉伯糖、葡糖酸鹽、甘露醇、松Ξ糖、鼠李糖、核 糖、山梨醇、木糖;精氨酸水解不產NH3,發酵葡萄糖不產氣，接觸酶陰性。
[0014] 本微生態制劑制成固體組合物包含的總活菌數不低于IX 10化FU/g，一般在IX 109C即/gW上，最高可達到1X i〇iic即/g或1X i〇iic即/gW上；制成液體組合物包含的總活 菌數不能低于1 X 10化FU/mL，一般在1 X 10化FU/mLW上，最高可達到1 X l〇iiCFU/mL或1 X l〇iiC即/血W上。
[0015] 本微生態制劑可用于預防或治療機體過敏反應等多種人體疾病，進一步治療濕 疹、過敏性鼻炎、異位性皮炎、過敏性哮喘或食物過敏等疾病。
[0016] 本微生態制劑可制成藥品組合物、保健品、食品、獸藥或飼料添加劑等。
[0017] 本微生態制劑所述嗜酸乳桿菌指活的生物個體。
【具體實施方式】
[0018] 制備例說明：運里通過嗜酸乳桿菌DH213保藏編號CGMCC No. 11228散劑為例進行 具體說明，其他嗜酸乳桿菌菌種制劑的制備方法本領域技術人員通過本實施例很容易掌 握，其他劑型的制備方法本領域技術人員通過本實施很容易掌握，在此不再一一敘述說明。 制備方法并不局限于本發明實施例所述，公知的能夠達到制備目的的方法均可W，實施例 的制備說明只是對本發明的說明，并不是對本發明保護范圍的限制。
[0019] 制備實施例嗜酸乳桿菌散劑的制備
[0020] 1菌粉的制備和菌種的鑒定
[0021 ]用無菌容器收集自然排出的新鮮糞便5-lOg，迅速放入厭氧罐中，帶回實驗室進行 菌種分離。取糞便樣品1.5g，用15mlPBS緩沖液懸浮混勻，400g離屯、5min收集上清濁液，再加 入適量PBS緩沖液8000g離屯、lOmin，收集上清濁液，即得到供試樣品。吸取1ml上濁液加入一 支裝有9mlPBS稀釋液(含有5%山-半脫氨酸）的試管中滿旋混勻，作為10-2稀釋液，用同樣方 法稀釋至1〇-3，分別取糞便原液、1〇-2稀釋液、1〇-3稀釋液各0.1ml涂布于MRS平板上，置于37 °C恒溫培養箱中培養24小時后，選擇培養基上菌落形態較為粗糖的菌落，接種于MRS液體培 養基中，37°C培養24h后，將所得培養液離屯、（12000rpm)分離出菌體后，將菌體冷凍真空干 燥，調制出干燥菌粉，活菌數均為IX 109CFU/gW上。同時對菌株展開生理