一株芽孢桿菌及其應用
【技術領域】
[0001 ]本發明屬于環境微生物領域，具體設及一株芽抱桿菌及其應用。
【背景技術】
[0002] 自然界的物質循環可歸納為兩個方面:一是無機物的有機質化，即生物合成作用； 另一個是有機物的無機質化，即礦化作用或分解作用。現有研究表明，微生物在有機物的礦 化中起決定性作用，地球上90%W上有機物的礦化都是由微生物如細菌和真菌完成的。革蘭 氏陽性菌是十分重要的微生物類群，在厭氧±壤中占據優勢地位，對于±壤養分利用、污染 物修復等具有重要作用。芽抱桿菌屬(Bacillus)細菌作為細菌中革蘭氏陽性菌的代表物 種，對外界有害因子抵抗力強，在自然環境中數量多、分布廣，已廣泛應用于±壤/水體污染 修復。
[0003] 腐殖質呼吸，又稱釀呼吸，是指微生物W腐殖質為末端電子受體，通過氧化電子供 體偶聯腐殖質還原，并從運一過程中膽存生命活動的能量。腐殖質呼吸是近年來發現的新 型微生物能量代謝方式。腐殖質呼吸在關鍵元素地球化學循環過程、±壤污染治理及有機 廢物循環利用中發揮重要作用，對于研究±壤典型物質循環轉化的微界面過程及其功能， 具有重要的科學價值。傳統觀點認為，腐殖質呼吸菌一般為革蘭氏陰性菌，革蘭氏陽性菌特 別是芽抱桿菌一度被誤認為不具備真正的腐殖質呼吸功能，它們在腐殖質呼吸環境中的存 在只起到維持系統平衡和輔助性作用。近年來，研究者陸續發現腐殖質還原棒桿菌、芽抱桿 菌等革蘭氏陽性菌具有腐殖質呼吸的特性。革蘭氏陽性腐殖質呼吸菌特別是芽抱桿菌兼具 胞外呼吸能力和抗逆性強的優點，在清潔能源生產和污染±壤修復及廢棄物利用方面日益 受到重視。
[0004] 早在1995年，Boone等人便成功分離了第一株具有腐殖質呼吸能力的B. infernus。之后，又有多株Bacillus屬的腐殖質還原菌陸續被發現。然而，由于已報道的純 培養Bacillus屬腐殖質呼吸菌為嚴格厭氧菌，胞外電子傳遞效率低，培養不方便，研究進展 緩慢。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一株芽抱桿菌及其應用。
[0006] 本發明所采取的技術方案是： 芽抱桿菌，其分類命名為Bacillus luteaGSSOS，已保藏于中國典型培養物保藏中屯、， 保藏號為CCTCC Μ 2015739。
[0007] -種環境污染修復微生物制劑，該微生物制劑含中上述芽抱桿菌Bacillus luteaGSSOSo
[000引芽抱桿菌Bacillus luteaGSSOS在微生物制劑中的應用。
[0009] 優選的，所述微生物制劑為環境污染修復微生物制劑。
[0010] 本發明的有益效果是： 本發明提供了一種新的具有腐殖質還原能力的芽抱桿菌B. lutea GSS08,為腐殖質還 原提供了一種新的革蘭氏陽性菌株，在±壤修復、±質改良等方面具有廣泛的應用前景。
[0011]本發明的微生物制劑，可W很好地應用于±壤修復、±質改良。
[001^ B. lutea GSS08兼性厭氧，能夠在中性及堿性條件下(pH可達9.5)進行生長與增 殖，在厭氧條件下能W乙酸、葡萄糖進行腐殖質還原。與現有的同類菌株比較，該菌株培養 方便，適應的范圍更廣。
【附圖說明】
[OOU]圖1本發明B. lutea GSS08在20000倍下的掃描電鏡照片； 圖2本發明B. lutea GSS08的系統發育樹； 圖3本發明B. lutea GSS08利用不同電子供體還原AQDS情況。
【具體實施方式】
[0014] 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0015] 實施例1芽抱桿菌B. lutea GSS08的培養、分離、篩選、鑒定及保存 1.1菌株的培養、分離 本發明的芽抱桿菌B. lutea GSS08是通過對腐熟堆肥富集培養進行分離純化得到的。
[0016] 具體分離純化方法包括W下步驟： (1)取5.0 g腐熟堆肥(城市污泥與作物賴桿)接種于pH值為7.2的液體分離培養基中； 所述液體分離培養基的組成是:每升液體分離培養基中含0.6 g乙酸，0.6 g化此P〇4,0.25 g畑此1，0.1 g KC1，2.5 g Na肥〇3,0.2 g酵母粉，10.0 mL維生素溶液，10.0血微量元素溶 液，1.0 ml A孤S。其中，維生素溶液是每升去離子水中含2.0 mg生物素，2.0 mg葉酸，10.0 mg維生素日6,5.0 mg硫胺素，5.0 mg核黃素，5.0 mg煙酸，5.0 mg泛酸巧，0.1 mg維生素 Bi2， 5.0 mg對氨基苯甲酸，5.0 mg硫辛酸;微量元素溶液是每升去離子水中含1.5 g氨Ξ乙酸， 3.0 g MgS〇4'7此0,0.5 g MnS〇4·此0，1.0 g 化Cl，0.1 g FeS〇4'7此0,0.1 g CoCl2'6此0， 0.1 g CaCl2,0.1 g ZnS〇4'7此0,0.01 g CuS〇4'5出0,0.01 g A1K(S04)2'12出0,0.01g 也B〇3,0.01g Na2Mo〇4·細2〇d
[0017] (2)往已接種腐熟堆肥的液體分離培養基中鼓充高純混合氣體不少于30分鐘，所 述高純混合氣體可采用化和C〇2按照80:20的體積比的混合氣體，鼓氣完畢用侶蓋密封，置于 厭氧工作站(化和C〇2按照80:20的體積比的混合），30°C靜置培養，觀察培養液的顏色變化情 況。
[001引（3)當培養lOd后，培養液顏色從無色變為深黃色時，W10%的接種量將培養液轉接 至另一新鮮的液體分離培養基，鼓充高純混合氣體不少于30分鐘，鼓氣完畢用侶蓋密封，置 于厭氧工作站30°C靜置培養。如此富集培養Ξ次。
[0019] (4)將第四代反應后的培養液采用稀釋平板法稀釋到10-5-1〇Λ將稀釋后的培養 液0.1 mL均勻涂布于LB固體培養基上，置于厭氧工作站(化/C02=80/20)30°C培養48 h，挑取 單菌落進行分離與純化。所述LB固體培養基的組成是：蛋白腺10 g/L，酵母提取物5g/L， NaCl為10g/L，瓊脂粉20g/L，pH值為7.2。
[0020] 菌體形態特性 采用常規的細菌電子顯微鏡觀察，該菌株為革蘭氏陽性菌，棒狀，菌體大小為1.3-3.5 皿X0.6-1.8皿，具運動性。見圖1。
[0021] 菌落形態特性 在LB瓊脂固體培養基平板上好氧培養24 h后，菌落圓形，黃色，稍突起，不透明，菌落直 徑為1-2 mm。
[0022] 生理生化特征 對菌株B. luteaGSSOS進行生理生化特征的鑒定，并與幾種近源菌株進行對比，其結果 見表1。
[0023] 表1.菌株生理生化鑒定結果
(表中：+表示為陽性，W表示為弱陽性，-表示為陰性） 由鑒定的結果(表1)可知:菌株B. luteaGSSOS兼性厭氧，能在0-4%化Cl的培養液中生 長，而最適NaCl為1%;生長溫度為25-45°C，最適生長溫度為37°C ;pH值為6.5-9.5，最適抑為 7.5;接觸酶陽性，氧化酶陰性;具有