一種黃酮類化合物TA31b及其制備方法與用圖
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種黃酮類化合物TA31b及其制備方法與用途。
【背景技術】
[0002] 薪蓂子是藏藥中常用的一種藥物，隸屬于十字花科（Brassicaceae)、薪蓂屬 (Thlaspi arvense L.)植物菥蓂的干燥種子。據傳統醫藥典籍《神農本草經》以及《中華本 草》記載，菥蓂子性辛、微溫。主明目，目痛淚出，益精光，補五臟，除痹，祛風濕，主治目赤腫 痛，迎風流淚，風濕痹痛等。藏藥典籍《晶珠本草》記載菥蓂子具有清腎熱、肺熱，治療各種腎 病之功效，在藏藥中被廣泛應用，具有非常重要的作用。目前菥蓂子的研究不是很多，僅少 量文獻報道其具有抗腫瘤、抗抑郁以及保肝的作用，國內外尚無其他生物學活性的研究報 道。
[0003] 同時國內外對菥蓂子的化學成分的研究報道較少，主要為菥蓂子油方面的研究。 國內外有少量關于菥蓂子種子油提取工藝、種子油組分分析的報道。
[0004] 如：
[0005] 涂杰等人(涂杰，張新申，李翔等.GC-MS分析菥蓂籽炒香前后揮發油的化學成分及 其變化[J].華西藥學雜志，2007，（01): 1-4.;涂杰，張新申，羅霞等.菥蓂籽揮發油的GC/MS 分析[J].化學研究與應用，2006，（ 11): 1340-1342.)利用GC/MS對菥蓂子的揮發油成分進行 了分析，顯示菥蓂子揮發油中含有大量的不飽和脂肪酸，且主要的化學成分為4-異硫氰酸 基-1-丁烯和烯丙基異硫氰酸酯。
[0006] Roque L.EvangeIista(R.L.Evangelista,T.A.Isbell,S.C.Cermak.Extraction of pennycress(Thlaspi arvense L.)seed oil by full pressing[J].Industrial Crops and Products,2012,37(1):76-81.)探討了種子水分和炒制對薪蓂子壓榨性質的影 響，通過固形物含量、游離脂肪酸、顏色、〇 &、？、1%、5等含量對其種子油品質進行評價，表明 水分含量低以及炒制過的菥蓂子比水分含量高的具有更高的種子油回收率，且固形物含量 更高，游離氨基酸含量略高，顏色略好，磷脂的含量升高。而硫的含量差別較大，主要取決于 種子的水分和炒制的程度。
[0007] Bryan R.Moser(B.R.Moser,S.N.Shah,J.K.ffinkler-Moser,et al.Composition and physical properties of cress(Lepidium sativum L.)and field pennycress (Thlaspi arvense L. )oiIs[J].Industrial Crops and Products,2009,30(2): 199-205.)研究了菥蓂子油中脂肪酸譜，維生素 E和植物留醇含量，還測定油的物理性質，其中包 括氧化穩定性，運動粘度，粘度指數，低溫流動性，比重，酸值，潤滑性和碘值。結果顯示，菥 蓂子油含量為29.0%。菥蓂子中的脂肪酸主要由芥酸（32.8%)和亞油酸（22.4%)組成；生 育酚含量為851ppm，并且主要為α-生育酚(714ppm)。菥蓂子中的植物留醇含量為8.55mg/g， 主要為谷留醇和菜油甾醇。
[0008] 黑芥子苷是菥蓂子的標志性成分之一，陳玉等（陳玉，周旻，伍麗萍等.HPLC測定菥 蓂子中的黑芥子苷[J].華西藥學雜志，2012,（01) :94-95.)建立了一種簡便、重復性好的測 定菥蓂子黑芥子苷的HPLC方法。色譜條件為，以C18為色譜柱，乙腈-20mmol四丁基硫酸氫銨 水溶液=20:80為流動相，檢測波長227nm，流速lmL/min。
[0009] 王磊磊等（王磊磊，陳聰，周旻等.近紅外漫反射光譜法測定川藏道地藥材菥蓂子 中黑芥子苷含量[J].光譜學與光譜分析，2009，（10): 2673-2676.)建立了近紅外光譜檢測 菥蓂子黑芥子苷的方法。作者首先采用傅里葉變換近紅外光譜儀確定菥蓂子的吸收波段， 然后通過軟件篩選出最優的檢測條件，此方法能在樣本量足夠大的情況下準備測定出黑芥 子苷的含量。
[0010] 有文獻報道稱，菥蓂主要是以異牧荊苷為主的黃酮類化合物。成日青等(成日青， 錢宇，郭慧卿等.菥蓂子總黃酮含量的測定[J].中國中醫藥科技，2012,（05) :430-431.)利 用比色法對菥蓂子中的總黃酮進行測定。70%乙醇進行提取，通過測定方法的選擇，考察方 法的線性關系、精密度、穩定性和重復性，建立了以蘆丁為對照品，503nm為測定波長， NaN02-A1(N03)3-NaOH的顯色法，用于菥蓂子總黃酮含量的測定。
[0011]有作者通過HPLC檢測十三味菥蓂膠囊和十三味菥蓂丸中大葉茜草素的含量。張寧 等(張寧，楊曉宏，馬曉帆.HPLC法測定十三味菥蓂膠囊中大葉茜草素的含量[J].藥物分析 雜志，2007，（09): 1475-1477.)建立了一種以C18為色譜柱，甲醇:0.2%磷酸溶液=85:15為 流動相，250nm為檢測波長的檢測方法。作者[12]通過全波長掃描，找到最佳的檢測波長 270nm，并比較不同方法，最終找到最適的流動相為甲醇:水= 84:16,此方法重復性好、專屬 性強。
[0012] 涂杰等（涂杰，張新申，羅霞等.菥蓂籽微量元素化學形態研究[J].分析儀器， 2006,（04) :28-33.)采用了原子吸收分光光度法分析了菥蓂子中13種微量元素的含量。菥 蓂子中微量元素的含量特征為:K>Ca>P>Mg>Fe>Na>Zn>Mn>Cu>As>Cd>Pb>C。且菥蓂子中Ca、 1%、1(、？、？6、211等微量元素含量都比較豐富，其中？6與何首烏鐵含量相當。
[0013] Hoj ilia-EVangelista(M.P.Hoj ilia-Evangelista,R.L.Evangelista, T.A.Isbell,et al.Effects of cold-pressing and seed cooking on functional properties of protein in pennycress(Thlaspi arvense L.)seed and press cakes [J].Industrial Crops and Products,2013,45(0):223_229·)和Selling(G.W.Selling, M.P.Hojilla-Evangelista,R.L.Evangelista,et al.Extraction of proteins from pennycress seeds and press cake[J].Industrial Crops and Products,2013,41(0): 113-119.)等研究報道了菥蓂子蛋白的提取，冷壓和蒸煮對菥蓂子中蛋白功能的影響。通過 不同提取條件的對比，發現提取溫度77°C時，菥蓂子蛋白提取率最高35%，而菥蓂子一般蛋 白含量為25 %左右，其他大部分成分都為碳水化合物和油。分析發現，菥蓂子蛋白的氨基酸 組成是典型的植物蛋白，包括甘氨酸、谷氨酸和丙氨酸。另外，比較了不同壓榨工藝對菥蓂 子蛋白的影響，以確定其膳食的潛在用途。采取冷壓和加熱至82°C壓榨的提取方法，比較蛋 白的組成和功能性質(溶解性、起泡、乳化以及持水能力）。菥蓂子蛋白主要由白蛋白和球蛋 白組成，少量谷蛋白，無醇溶谷蛋白。蒸煮能使白蛋白和球蛋白含量顯著降低。在PH4時，蛋 白溶解度最低為10 %，隨著PH值升高也只能達到中等溶解度35-45%。菥蓂子蛋白具有良好 的發泡性和乳化性能，持水能力一般。實驗表明，蒸煮會對菥蓂子蛋白產生不利影響，但是 其仍具有有用的功能特性。另外Hojil Ia-Evangel ista[ 16]還報道了通過鹽水萃取或酸沉 淀從菥蓂種子分離蛋白質，評價蛋白質的乳化性、穩定性和發泡性的功能，發現兩種方法提 取的蛋白功能性具有差異。
[0014] 本申請的發明人從菥蓂子中分離出一種呈黃色粉末狀的黃酮類化合物（5-甲氧 基-6，4'-二羥基黃酮7-C-吡喃葡萄糖基-4'-0-(4'''-吡喃葡萄糖基)吡喃葡萄糖苷），并發 現了其醫藥用途。
【發明內容】
[0015] 本發明所解決的第一個技術問題是提供一種黃酮類化合物。所述化合物是從菥蓂 子中分離得到，其結構式如式1，命名為5-甲氧基-6，41二羥基黃酮7-C-吡喃葡萄糖基-4'- O-H''吡喃葡萄糖基)吡喃葡萄糖苷。本發明化合物呈黃色粉末狀，ESI-MSm/z顯示其分 子量770，綜合1H-NMR和13C-NMR數據，其化學式為C34H42〇2〇。
[0017] 式1
[0018] 本發明所解決的第二個技術問題是提供該黃酮類化合物(5-甲氧基-6, 二羥基 黃酮7-C-吡喃葡萄糖基-V-O-H'' c吡喃葡萄糖基)吡喃葡萄糖苷)的制備方法。該黃酮類 化合物的制備方法是以菥蓂子為原料，經浸膏提取、有機溶劑萃取、反相硅膠柱層析、高效 液相色譜分離步驟制備所得，具體為：
[0019] A、浸膏提取：取薪蓂子，粉碎至20~40目，用90%~100%乙醇回流提取2~5次，每 次40~SOmin，合并提取液、過濾，減壓濃縮至浸膏；
[0020] B、有機溶劑萃取:A步驟浸膏用蒸餾水混懸，加入等體積石油醚(60°C_90°C)萃取5 ~8次，收集水相溶液，加入等體積乙酸乙酯萃取5~8次，收集水相溶液，加入等體積正丁醇 萃取5~8次，收集正丁醇相溶液，減壓濃縮至浸膏；
[0021] C、反相硅膠柱層析:B步驟浸膏用乙醇溶解，進行反相硅膠柱層析；以體積配比為 1:9~6:4的乙醇-水溶液進行梯度洗脫，合并相同的部分，收集各部分洗脫液并濃縮；
[0022] D、高效液相色譜分離:C步驟洗脫液的1:9部分進一步用高效液相色譜分離純化， 即得所述的黃酮類化合物。
[0023] 上述技術方案中，優選步驟A中的乙醇濃度為90%~100%。
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