一種miR-182轉錄抑制因子及其在骨肉瘤中的應用

一種miR-182轉錄抑制因子及其在骨肉瘤中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫療技術領域，尤其涉及一種miR-182轉錄抑制因子及其在骨肉瘤中 的應用。
【背景技術】
[0002] 腫瘤的英文名為Tumor，癌癥的英文名為Cancer。這兩個詞語常常被人混用。然而 從嚴格意義上講，腫瘤與癌癥的意義并不相同。實際上，腫瘤不一定是癌癥。從詞意上講，月中 瘤指的是細胞團。在英文中腫瘤(Tumor)與贅生物(Neoplasm)意義更為接近，意即異常增生 的一團細胞。這類細胞的增殖顯著快于普通的正常細胞。如果不加以治療，常會持續增生， 引發機體的異常。根據增殖細胞的有害程度，腫瘤/贅生物可以分為兩大類：良性腫瘤和惡 性腫瘤。顧名思義，良性腫瘤即無害/輕微有害的腫瘤，它們通常局部發作，不會擴散和轉 移，而且容易治療。當然，如果放任不管，部分良性腫瘤也會持續增殖而引發嚴重疾病。惡性 腫瘤，自然大有害于機體。實際上，癌癥與惡性腫瘤的意義是相近甚至相通的，癌癥/惡性腫 瘤難以治療，會擴散，侵襲機體的其它組織;哪怕治療之后癌癥都有可能復發。
[0003] 腫瘤既然是異常增生的一團細胞，而細胞又是機體的基本組成單位，這意味著腫 瘤可以發生于機體的任何部位，而作為腫瘤中的惡性瘤，癌癥也幾乎會在機體的任何部位 發生。根據現有的分類標準，癌癥的種類超過100種。癌癥的分類依據通常是癌癥最初發生 的器官/組織:如肺癌，腦癌，血癌，胃癌等等。
[0004] 在英文中，除了根據器官/組織命名的癌癥，我們要對更為基本的癌癥類別加以了 解，第一類便是上皮細胞癌(Carcinoma)，顧名思義，便是發生在上皮細胞/組織中的癌癥， 這是最為常見的癌癥類別。當然上皮細胞癌又可細分為腺癌，基底細胞癌等類別;第二類則 是結締組織癌/肉瘤(Sarcoma)，發生于骨骼及其他結締組織如肌肉，脂肪，血管，淋巴管等 等；而骨肉瘤（Osteosarcoma)便是最常見的骨癌。此外還有白血病（Leukemia)，淋巴瘤 (Lymphoma)，多發性骨髓瘤(multiple myeloma)，黑素瘤(Melanoma)，腦瘤和脊髓瘤等等多 種類別;本文將不加詳談。
[0005] 骨骼腫瘤包括一系列源自骨骼細胞及骨骼前體細胞的細胞團，這是原發性骨骼腫 瘤，而源自其它非骨組織的腫瘤，則稱作骨轉移腫瘤，發生骨轉移的腫瘤有乳腺癌，前列腺 癌和腎癌等等(Yarber and Agulnik，2011)。雖然骨轉移腫瘤主要由上皮來源的細胞組成， 原發性骨骼腫瘤則是非上皮腫瘤，根據惡性程度又可分為良性和惡性骨骼腫瘤;轉移性和 非轉移性骨骼腫瘤。這些骨骼腫瘤中，某些類別是純粹的溶骨性瘤，如骨巨細胞瘤;而另外 的則會形成基質鈣化區，如骨肉瘤(osteosarcoma)，或軟骨外基質區（軟骨肉瘤)或溶骨/成 骨性缺陷。骨骼腫瘤的一大主要特征是其異質性，這也使得骨骼腫瘤的分類非常復雜 (Ferrari et al·，2013;Heymann and Redini,2011;von Mehren,2011)〇
[0006] 從分類上講，骨骼腫瘤可分為三大類：骨肉瘤，尤因氏肉瘤和軟骨肉瘤。其中約 50%的骨骼腫瘤是骨肉瘤。尤因氏肉瘤是第二大類原發性骨骼腫瘤，它主要影響15歲左右 的青少年，在15歲以下的兒童中，其發病率高達2.9例/年/100萬人群(Desandes et al.， 2004;Ries et al.，1999)。這兩類骨骼腫瘤中，當發生骨轉移或肺轉移時，其預后很差。與 這兩類腫瘤不同的是，軟骨肉瘤主要影響30-60歲的人群，其發病率約為1.8例/年/百萬人 群。軟骨肉瘤對化療，放療和手術療法都有相當強的耐受性，因而復發率也相當高(David et al.，2011;Lee et al.，1999)。
[0007] 從細胞類別上講，骨肉瘤的細胞是有著間葉細胞形態的非上皮細胞（圖1)。實際 上，骨肉瘤與軟骨肉瘤類似，都是起源于結締組織，因而也是起源于中胚層。還有研究稱，這 兩類腫瘤源自被稱作間葉干細胞的多能細胞，這類多能細胞有能力分化為成纖維母細胞， 成骨細胞，軟骨細胞和脂肪細胞（Deschaseaux et al.，2009;Mohseny and Hogendoorn, 2011)。在發育的過程中，特定的轉錄因子會形成層次分明的調控網，驅動細胞分化。比如 轉錄因子Sox9對軟骨形成非常重要（Akiyama，2008)，而Runx2則驅動成骨細胞的產生 (Kar Senty，2008;Tang et al.，2010)。與成骨細胞和軟骨細胞類似的是，骨肉瘤和軟骨肉 瘤分別表達Runx2和Sox9,這證實它們很可能起源于間葉細胞（Tang et al.，2010;Wagner et al.，2011)。此外，成骨細胞/骨肉瘤細胞會表達特定的細胞標記物如堿性磷酸酶，骨鈣 素和骨唾液蛋白；而軟骨細胞/軟骨肉瘤則表達聚集蛋白聚糖(aggrecan)，II型和X型膠原 蛋白。
[0008] 骨肉瘤，從定義上講，是骨骼上的腫瘤;從起源上講，形成骨肉瘤的異常增殖細胞 源自間葉細胞。在正常的骨骼形成中，成骨細胞負責骨基質的合成，分泌和礦化;一旦異常 增生，它們便形成了骨肉瘤。從研究歷史上講，骨肉瘤是最早被發現和研究的骨骼腫瘤。 1804年結締組織癌/肉瘤(Sarcoma)被英國醫生John Abernathy最先使用;在1805年法國醫 生Alexis Boyer便創造了骨肉瘤（osteosarcoma)這一名稱。而且Boyer還意識到骨肉瘤與 其它的骨豁異常如骨軟骨瘤(osteochondromas)并不相同。
[0009] 從流行病學的角度而言，骨肉瘤是高發于兒童和年青人的一種高致死性惡性骨 瘤，在20歲之前的所有惡性骨瘤中60%左右的都是骨肉瘤。從發病率來看，骨肉瘤堪稱最為 常見的惡性骨骼腫瘤，發病率高達4.8例/百萬人/年（Desandes et al.，2004;RieS et al.，1999)。除兒童和青少年之外，骨肉瘤在>50歲的人群中也有較高的發病率(2013)。研究 者經過多年的研究發現了多項與骨肉瘤發生相關的風險因子，這其中包括骨骼的更新速率 和快速生長、年齡、身高和性別（(：〇?6^11，2004 ;?4丨(^^-加1168,2006);此外環境因素 也是骨肉瘤發生的重要風險因子，其中絕大多數的后天性骨肉瘤都與骨骼的輻射損傷有 關，目前認為3%的骨肉瘤都與輻射損傷密切相關(Le Vu，1998;Logue and Cairnduff， 1991)。研究者還發現骨骼疾病及其它多種遺傳性疾病的患者也是骨肉瘤的高危人群，比如 佩吉特氏病患者中有1%可能會患上骨肉瘤(Smith，1984)，而12%的李佛美尼綜合癥患者 也會患上骨肉瘤(Gokgoz ,2001; Srivastava, 1993)，此外生殖細胞中措書出現的RB1突變 會讓骨肉瘤的發病風險增加數百倍(Hansen，1985)，RECQL4突變導致的色素沉著綜合癥 (Rothmund-Thomson syndrome)患者中有32%的個體會患上骨肉瘤（Larsen and Hickson, 2013;Wang，2001)。除此之外，10%的沃納綜合征患者、3%的布盧姆綜合癥患者和約13%的 RAPADILIN0綜合癥患者也會患上骨肉瘤(German，1997; Lauper，2013; Siitonen，2003)。從 發病部位而言，骨肉瘤主要發生于四肢的長骨，靠近骨骺生長板處，此外其它常見的發病部 位還包括股骨、脛骨和肱骨，而顱骨、骨盆和下頌骨則偶有發生。骨肉瘤主要由惡性成骨細 胞形成的未成熟骨和骨樣組織
[0010] 骨肉瘤治療的常規方法是手術，患者經單純的手術治療后存活率為15%-17% (Bernthal，2012;Link，1986)，此后研究者又開發出化療輔助手術治療的方法，這讓骨肉瘤 的存活率大大提高。而今化療輔助手術治療的策略可以治愈70%左右的患者（Collins， 2013)。然而依然有大量的患者接受化療后的效果極差；哪怕接受手術切除，輔助化療和放 療后，骨肉瘤的遠距離轉移和局部復發的風險依然很高。而且在最近的三十年里，轉移性骨 肉瘤患者和復發性骨肉瘤患者的五年存活率未有明顯改變，僅僅為20%左右(Meyers， 2011)。為更好的治療骨肉瘤患者，探索新的治療靶點和策略都顯得勢在必行。
[0011]目前而言，對尤因氏肉瘤的發病機制有比較清楚的認識，而對于其他大多數的骨 骼腫瘤的發病機制依然所知甚少。大多數骨肉瘤患者的發病原因依然不清楚。當前對于骨 肉瘤的解釋依然是19世紀Stephen Paget提出的"種子與土壤"假說，該假說引出了一個新 的概念"生境"，它指代的是特化的腫瘤微環境，這種微環境能夠促進腫瘤干細胞的出現，并 為它們的生存和發育提供所有必要的因子。在骨轉移腫瘤和原發性骨骼腫瘤的發生和發展 過程中，骨豁的微環境和癌細胞之間有密切的聯系(David et al.，2011;Gomez-Brouchet et al.，2010;Lamoureux et al.，2010;Wittrant et al.，2004;Zhang et al.,2003)。對 微環境與生境的研究最先開始于造血過程的研究中。實際上，研究者發現，BMP信號通路會 通過BMP 1A受體調節生境的大小進而調控造血干細胞的數目。與此相似的是，骨骼中生長 的癌細胞會改變骨細胞的活性，調節血管生成并改變局部的免疫，從而為自身的存活、生長 和脫落提供保證。肉瘤細胞則會分泌成骨細胞活化因子如細胞因子（IL-l，IL-6和TNF-alpha)，荷爾蒙(PTHrP)，葡糖氨基葡聚糖和/或促成骨細胞因子如BMPs、IGF或Wnts信號，這 會導致骨骼重塑平衡的破壞，此后成骨細胞和破骨細胞會分泌可溶性促腫瘤因子，這些因 子會進入細胞外基質。盡管骨骼的微生境在腫瘤的生長中發揮著關鍵性的功能，骨骼微環 境還會增強腫瘤對治療的抵抗病讓癌細胞處于靜默狀態(Heymann and 1^(1;[11；[，2011)。骨 骼腫瘤和"種子與土壤"理論。骨骼生境是一種特化的微環境，為骨肉瘤細胞的生長提供所 有必須的因子。骨骼微環境和骨骼腫瘤細胞存在著一種特殊的循環。實際上，骨骼腫瘤細胞 會破壞骨骼細胞(成骨細胞和破骨細胞）的活性，改變血管新生并改變局部的免疫功能，從 而為自身的存活，生長和脫落提供必要的保護。
[0012]骨肉瘤是兒童和青少年中最為常見的惡性骨骼腫瘤，而且骨肉瘤幾乎均會惡化并 引發嚴重后果。隨著技術的進步，對骨肉瘤有了越來越深入的認識。然而骨肉瘤發生和惡化 的分子機制依然有待進一步的探索。越來越多的證據表明，miRNAs表達異常與多種腫瘤如 胃癌、乳腺癌、干細胞癌和骨肉瘤的發生、發展和惡化有著密切的聯系。本發明所嘗試探索 和研究的正是骨肉瘤中miRNAs表達異常與骨肉瘤發生發展的分子關聯。發現骨肉瘤患者的 組織中以及骨肉瘤細胞系中miR-182的表達均顯著減少。而在骨肉瘤細胞系MG-63中過表達 miR-182能夠明顯抑制骨肉瘤細胞的增殖、迀移和侵襲能力，這提示miR-182可能是骨肉瘤 發生發展的抑制因子。通過Targetscan軟件分析、熒光素酶實驗及過表達/抑制實驗發現 TIAM1是miR-182在骨肉瘤細胞中的靶基因。TIAM1的全稱為細胞骨架受T淋巴瘤侵襲轉移誘 導因子 1(T lymphoma invasion and metastas is inducing factor 1)，它是Rac特異性 的鳥核苷酸交換因子，已知與多種癌癥的發生發展有密切關系。在TIAM1基因敲除的小鼠 中，致癌物誘導的HRAS活化和皮膚鱗狀細胞癌的發生均明顯受阻;此外，在結腸腺瘤性息肉 病基因(APC)誘導的結腸癌和ERBB2誘導的乳腺癌小鼠模型中，TIAM1缺失會顯著抑制兩種 腫瘤的形成；研究者還在多種癌癥中發現TIAM1的突變或過表達；這一系列研究均提示 TIAM1是促癌基因。本發明中，當TIAM1過表達時，骨肉瘤細胞MG-63的增殖能力明顯增強，而 且MG-63的細胞周期也發生了明顯的改變，細胞的侵襲和迀移能力也顯著增強。與此相對的 是，過表達miR-182能夠抑制TIAM1誘導的骨肉瘤細胞增殖加速和侵襲能力增強。此外，對骨 肉瘤患者的組織樣本進行表達分析后發現，TIAM1的表達與miR-182呈顯著負相關，這提示 miR-182或許是骨肉瘤發生過程中的抑癌基因，它能通過靶向并抑制TIAM1的表達限制骨肉 瘤的發生和發展。
[0013]之前的研究指出，多種癌癥中均有miR-182的表達異常，這包括胃癌、惡性胸膜間 皮瘤、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、肺癌、子宮內膜癌、結腸癌、乳腺癌、紅細胞增多癥、小兒急 性白血病和黑素瘤。在不同的腫瘤發生過程中，miR-182扮演著不同甚至完全相反的角色， 比如在肺腺癌細胞中，miR-182是一種腫瘤抑制因子，它可以通過調控CTTN的表達而抑制肺 腺癌細胞的增殖和侵襲。還有研究指出，miR-182能通過靶向抑制RGS17而抑制肺癌的發生； 在膠質母細胞瘤(GBM)中，miR-182同樣扮演著腫瘤抑制因子的角色，它能夠靶向癌基因如 Bcl2L12、c-Met和HIF2A從而調控膠質母細胞瘤的生長、分化、化療敏感性和腫瘤的惡化。然 而在其它類型的癌癥中，miR-182的表達會顯著增加并扮演促癌因子的角色。比如研究者發 現，在部分膠質瘤患者中，TGF-beta會促進miR-182的過表達，從而導致NF-kappaB的持續活 化，最終促進膠質瘤的惡化;在前列腺癌細胞中過表達miR-182能夠通過抑制下游基因如 F0XF2、RECK、MTSS1和NDRG1促進細胞的增殖；而在黑素瘤中，miR-182能夠促進錨定非依賴 的生長、侵襲和轉移。而在乳腺癌中，miR-182能與miR-27a和miR-96共同作用于F0X01基因 促進腫瘤的發生和發展;在卵巢癌中，miR-182能通過靶向抑制程序性細胞死亡因子4促進 腫瘤細胞的增殖、侵襲和化療耐受性。在結腸直腸癌中miR-182的表達同樣明顯增加，而且 miR-182表達的升高與臨床癥狀的惡化及不良預后密切相關;在肝細胞癌中，研究者則發 現miR-182的高表達與腫瘤的轉移能力密切相關。本研究中，發現miR-182在四種不同的骨 肉瘤細胞系中均顯著下調，并且在骨肉瘤患者的組織中同樣顯著下調，這提示miR-182在骨 肉瘤發生中可能扮演著腫瘤抑制因子的角色，與此相吻合的是，發現，恢復miR-182在骨肉 瘤細胞中的表達可以明顯抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲。這些研究均表明，在骨肉瘤的發生 發展中，miR-182可能扮演著腫瘤抑制因子的角色，它的表達下降或許是骨肉瘤惡化和轉移 的重要誘因之一。
[0014] miR-182與癌癥的關系已被眾多研究所證實，而且在不同的癌癥研究中，研究者們 發現了多種miR-182的下游靶基因。而本研究中借助于不同的實驗手段發現了miR-182新的 靶基因：通過Targetscan軟件預測我們在TIAM1基因的3末端非編碼區域(UTR)找到了潛在 的miR-182識別位點，而熒光素酶實驗證實，miR-182能夠有效的結合該識別位點，從而抑制 TIAM1的表達。我們在骨肉瘤細胞系MG-63中過表達miR-182同樣抑制了 TIAM1在mRNA水平和 蛋白水平的表達。因此我們的研究提示，miR-182表達水平的降低可能會導致TIAM1表達的 異常和骨肉瘤細胞增殖的異常。在此之前，并無研究將miR-182與TIAM1聯系在一起，因此研 究揭示出一條新的由miR-182介導的癌細胞增殖調控通路。然而，miR-182對TIAM1的調控是 否同樣存在于其他類型的癌癥中仍有待進一步的研究。
[0015] TIAM1基因位于人類的21號染色體上，隸屬于鳥核苷酸交換因子(GNEF)家族。之前 的研究指出TIAM1在多種細胞功能中均扮演重要橘色，如細胞增殖、細胞黏附、細胞迀移、細 胞侵襲和細胞轉移等等。研究還指出，TIAM1的表達在多種癌癥中都顯著增加如T細胞淋巴 癌、Β細胞淋巴癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌和肺癌等等。ΤΙΑΜ1的表達量增加是一種潛在的新的 預后因子，對癌癥患者的預后有重要的指導意義。此外，有研究者指出ΤΙΑΜ1過表達與鼻咽 癌之間存在著相關性;有研究還發現ΤΙΑΜ1在前列腺癌患者的腫瘤組織中表達顯著增加并 可作為不良預后的指示因子。此外，研究者曾在骨肉瘤研究中發現miR-218能夠通過下調 TIAM1、MMP2和MMP9的表達抑制腫瘤的發生。然而與此相關的詳細的分子機制依然有待深 入的研究。本發明中TIAM1是miR-182的直接靶基因。我們還通過體外實驗證實TIAM1過表達 能夠促進骨肉瘤細胞的增殖及侵襲。而miR-182對TIAM1表達調控依賴于TIAM1的3末端UTR 區域。而且TIAM1誘導的細胞增殖和侵襲能夠被miR-182抑制。綜上所述，研究證實miR-182 能夠通過靶向TIAM1而阻礙骨肉瘤瘤的轉移。miR-182對TIAM1的調控或許是TIAM1轉錄后調 控的一種重要機制。
[0016] 本發明研究在骨肉瘤中，miR-182能通過抑制TIAM1的表達，是一種轉錄抑制因子。 而本發明的miR-182-TIAM1信號軸值得在將來的研究中加以深入的探索和分析，或許能夠 為骨肉瘤的治療提供重要線索。

【發明內容】

[0017] 本發明的目的在于提供一種miR-182轉錄抑制因子及其在骨肉瘤中的應用，旨在 研究通過miRNA表達芯片和高通量測序等技術研究在骨肉瘤樣本中多種miRNAs的表達發生 異常，多種miRNAs的功能對骨肉瘤的細胞周期有重要的調控作用，探索和研究的骨肉瘤中 miRNAs表達異常與骨肉瘤發生發展的分子關聯的問題。
[0018] 本發明是這樣實現的，一種miR-182轉錄抑制因子，該miR-182轉錄抑制因子序列 SEQ ID NO：
[0019] 本發明另一目的在于提供一種miR-182轉錄抑制因子在骨肉瘤中的應用，該miR-182轉錄抑制因 子在骨 肉瘤中 的應用 包括: 在骨肉 瘤細胞系中的 應用、 在骨肉 瘤患者組織中 的應用、在細胞增殖標記基因 Ki-67和PCNA的應用和在骨肉瘤細胞中TIAM1基因的應用。
[0020] 所述在骨肉瘤細胞中TIAM1基因的應用，在TIAM1基因的3末端UTR非編碼區域miR-18 2與該識別位點結合。
[0021 ]進一步，所述TIAM1基因的3末端UTR非編碼區域識別位點的構建方法包括：
[0022] 根據人源TIAM1的mRNA編碼序列設計引物，采用Promega的高保真酶Pfu DNA聚合 酶PCR擴增，PCR反應結束后，加入lul普通Taq酶和lul 10mM的dNTPs，72°C反應10分鐘，擴增 產物進行瓊脂糖凝膠電泳，出現單一的5Kb長度的條帶，割膠回收后采用QIAEX II膠回收純 化試劑盒進行純化；
[0023] 將回收的TIAM1片段連接入T-eay載體中，體系為10x T4buffer lul，T4連接酶 lul，T-easy載體0.5ul，TIAM1產物7.5ul (10ul總體系），連接程序16°C過夜;采用大腸桿菌 感受態細胞ToplO轉化連接產物，取10ul小槍頭挑選單克隆菌落加入裝有2-3ml氨芐抗性的 LB培養基的小玻璃搖菌管中，37°C220rpm培養10-12小時，之后進行質粒小量抽提，質粒提 取成功后經酶切鑒定，陽性質粒送測序分別采用正向、反向測序引物SP6與T7測序，最終得 到陽性克隆；
[0024] 設計帶有Sail和Notl酶切位點的PCR引物，以pT-easy-TIAMl為模板克隆TIAM1基 因的3 ' UTR區域并連接進入熒光素酶表達載體得到表達熒光素酶并帶有TIAM13 ' UTR區域的 載體；
[0025] 進一步，所述根據人源TIAM1的mRNA編碼序列設計引物，所述引物序列為：
[0026] TIAM1 for:atggagaa aagcatgcca gcctggg；
[0027] TIAM1 rev:CTCTACGGGGCAGGTGACGC〇
[0028] 進一步，所述PCR擴增采用兩步法:95°C預變性2分鐘，95°C變性30秒，
[0029] 55°C退火30秒，72°C延伸5分鐘，然后重復變性、退火和延伸步驟35個 [0030] 循環。72°C繼續延伸5分鐘，10°C保持。
[0031 ]進一步，所述TIAM1基因的3末端UTR非編碼區域識別位點的構建前需進行：
[0032]感受態細菌制備，載體DNA經細菌轉化引入感受態的大腸桿菌中，攜帶有載體DNA 的大腸桿菌經增殖后大量復制載體DNA;DNA凝膠電泳，在滅菌的1.5ml離心管中進行限制性 內切酶酶切；
[0033]選取人源細胞系H293細胞提取RNA，H293細胞接種于6孔培養板中，在37度二氧化 碳培養箱中培養2天，加入lml Trizol后采用苯酚/氯仿法提取人源RNA，制備好人源RNA后， 采用Bio-Rad公司的iScript cDNA Synthes is試劑盒進行逆轉錄實驗制備cDNA模板。 [0034]進一步，所述TIAM1基因的3末端UTR非編碼區域miR-182與該識別位點結合的構建 方法包括：
[0035]根據人源TIAM1的mRNA編碼序列設計引物，以熒光素酶-3'UTR質粒為模板，進行 PCR擴增，PCR擴增為:94°C預變性2分鐘，98°C變性10秒，68°C退火及lkb/分鐘速度延伸7分 30秒，之后變性到退火延伸步驟設定為10個循環重復，4°C保存樣品；
[0036] Dpnl消化，在T0P10大腸桿菌感受態細胞中表達的質粒上發生甲基化修飾，向PCR 產物中加入lul Dpnl，輕彈混勻后短暫離心放入37°C水浴鍋孵育1小時；
[0037] Dpn頂每切消化結束后，取5-10ul樣品進行瓊脂糖凝膠電泳；
[0038] 連接反應于16°C過夜，然后用于轉化大腸桿菌感受態細胞ToplO,并挑取克隆進行 測序鑒定。
[0039] 本發明提供的miR-182轉錄抑制因子及其在骨肉瘤中的應用，骨肉瘤細胞系miR-182 表達顯著下調 ，骨肉瘤患者組織中 miR-182 表達顯著下調， miR-182 表達量與骨肉瘤患者 的存活時間呈顯著正相關，miR-182過表達顯著抑制腫瘤生長，miR-182調控細胞增殖標記 物Ki-67和PCNA的表達水平顯著升高，miR-182是MG-63骨肉瘤細胞增殖的負向調控因子； miR-182調控骨肉瘤細胞的細胞周期，miR-182對細胞增殖的調控與其對細胞周期的影響有 密切的關系;miR-182過表達促進MG-63骨肉瘤細胞凋亡，miR-182過表達抑制MG-63骨肉瘤 細胞的迀移與侵襲有影響，miR-182能抑制MG-63骨肉瘤細胞的迀移和侵襲能力，它的低表 達與骨肉瘤細胞的惡