一株防治梨輪紋病和軟腐病的暹羅芽孢桿菌及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于微生物領域，具體設及一株防治梨輪紋病和軟腐病的遣羅芽抱桿菌及 其應用。
【背景技術】
[0002] 梨是我國栽培歷史久、面積大、產量高的果樹之一。據統計梨是我國第3大水果，目 前全國總面積達100多萬公頃，年產量800多萬噸，分別占全世界梨栽培面積和產量的62% 和52 %。梨果實在生長發育及膽藏期間，時刻會受到病害的威脅，其中輪紋病 (Bo化yosphaeria dothidea)是最嚴重的果實真菌病害之一，是造成梨果實爛果的主要原 因。由于輪紋病菌是在幼果期潛伏侵染，在果實成熟及膽運期間發病，控制和防范都有很大 困難。梨軟腐病主要由甸枝根霉(I^hizopus stolonifer)和梨形毛霉(Mucor piriformis) 引起，主要危害梨果實，一般零星發生，但是果實傷口多、膽藏期溫度高時發生較重。高溫 時，5-6天內可使病果全部軟腐。
[0003] 新鮮水果采后腐爛是一個全球性的問題。我國每年因為梨輪紋病危害造成梨果減 產約25%，嚴重時爛果率高達80% W上，造成巨大經濟損失。目前生產上常采用化學藥劑防 治梨采后病害，運樣不僅嚴重污染生態環境，而且增加農產品中有毒化學物質的殘留量，對 人類健康帶來潛在危害，同時也易誘致病原菌抗藥性的產生。生物防治利用物種間的括抗 作用來減少病害的發生，對人畜安全、環境兼容性好、病蟲害不易產生抗藥性，因而具有化 學殺菌劑不具有的優勢，正逐步成為代替化學殺菌劑的最佳方式。
[0004] 獲得高效括抗菌是生物防治的基礎。枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)是最早 被報道用來防治相橘病害的細菌(Gutter and Littauer，1953)。隨著研究的深入，人們已 篩選并報道多種對果蔬采后病害具有防治效果的括抗菌，主要是酵母菌、芽胞桿菌、假單胞 菌和木霉菌。幾株微生物括抗菌已經被授權專利并商業應用，如Biosave(Pseudomonas syringae，USA)、"Shemer"(Metschnikowia Fructicola，Israel)、Serenade(Baci1lus subtilis，USA)和化ndifruit(Candida sake，Spain)。由于可W產生具有高括抗活性的廣 譜抗菌物質，極強的抗逆能力，同時具有無毒、無殘留、無致病性、對人畜安全、環境相容性 好，滿足了消費者對農產品質量和安全性的要求，芽抱桿菌(Bacillus)在生物防治中起著 極為重要的作用。
【發明內容】
[000引本發明的一個目的是提供一株遣羅芽胞桿菌(Bacillus siamensis)LYLB4。
[0006] 本發明提供的遣羅芽胞桿菌（Bacillus siamensis化化B4的保藏編號為CGMCC No.11859。
[0007] 上述菌株LYLB4的分類命名為遣羅芽胞桿菌（Bacillus siamensis)，該菌株于 2015年12月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、（簡稱CGMCC，地 址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號為 CGMCC No.11859。
[0008] 本發明的另一個目的是提供遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養液或其發酵產物 或含有其的菌劑的新用途。
[0009] 本發明提供了遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或含有其的菌 劑在防治輪紋病和/或軟腐病中的應用。
[0010] 本發明還提供了遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或含有其的 菌劑在制備防治輪紋病和/或軟腐病的產品中的應用。
[0011] 上述應用中，所述輪紋病和/或軟腐病為梨輪紋病和/或梨軟腐病。
[0012] 本發明還提供了遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或含有其的 菌劑在抗菌和/或抑菌中的應用。
[0013] 本發明還提供了遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或含有其的 菌劑在制備抗菌和/或抑菌的產品中的應用。
[0014] 上述應用中，所述抗菌和/或抑菌是通過抑制菌絲生長體現的。
[001引上述應用中，所述菌為輪紋病菌（Botryosphaeria dothidea)和/或軟腐病菌 (I?lizopusstolonife;r)和/或石解黑斑病菌(Alte;rna;riatenuissima)和/或棉花黃萎病 菌（￥61'1：；[。；[11；[11111(1日1111日6)和/或白菜黑斑病菌(4116111日1'13 13招33；[。日6)和/或灰霉病菌 (Bot;rytis cinerea)和/或辣椒立枯病菌（Rizoctonia solani)和/或香蕉枯萎病菌 (F'usarium 0巧sporum)和/或稻攝病菌（Piri州laria Oiyzae)和/或禾谷鑲抱菌化usarium graminearum)。
[0016] 本發明還有一個目的是提供一種產品。
[0017] 本發明提供的產品的活性成分為上述遣羅芽胞桿菌（Bacillus siamensis) LYLB4CGMCC No. 11859或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或含有其的菌劑；
[0018] 所述產品具有如下1)或2)所述的功能：
[0019] 1)防治輪紋病和/或軟腐病；
[0020] 2)抗菌和/或抑菌。
[0021 ]上述產品中，所述抗菌和/或抑菌是通過抑制菌絲生長體現的；
[0022] 所述菌為輪紋病菌（BotiTosphaeria dothidea)和/或軟腐病菌（Rhizopus stolonifer)和/或石解黑斑病菌（Alternaria tenuissima)和/或棉花黃萎病菌 (Verticillium dahliae)和/或白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae)和/或灰霉病菌 (Bot;rytis cinerea)和/或辣椒立枯病菌（Rizoctonia solani)和/或香蕉枯萎病菌 (F'usarium 0巧sporum)和/或稻攝病菌（Piri州laria Oiyzae)和/或禾谷鑲抱菌化usarium graminearum)。
[0023] 本發明的最后一個目的是提供一種防治或輔助防治梨果實輪紋病和/或軟腐病的 方法。
[0024] 本發明提供的防治或輔助防治梨果實輪紋病和/或軟腐病的方法包括如下步驟： 用上述遣羅芽胞桿菌或上述產品中的菌懸液處理梨果實。
[0025] 上述方法中，所述菌懸液中遣羅芽胞桿菌濃度為5 X 107CFU/ml。
[0026] 本發明從表面滅菌的萊陽梨果皮中分離獲得一株遣羅芽胞桿菌（Bacillus siamensis),該菌株對多種植物病原菌具有廣譜抗性，對由輪紋病和軟腐病引起的梨果實 腐爛具有良好的防治效果。該菌株來源于梨果實，對梨果實安全;大規模生產原料成本低， 操作方便，防治效果穩定，能有效解決梨果實病害農藥防治所帶來的農業殘留和環境污染 問題。在梨采后病害的生物防治方面具有巨大的應用潛力，為研制和開發微生物農藥提供 了優良的基礎菌株。
【附圖說明】
[0027]圖1為菌株LYLB4的形態照片。
[002引圖2為基于菌株LYLB4的16S rDNA構建的系統發育樹。
[0029] 圖3為菌株LYLB4與輪紋病菌和軟腐病菌對時培養的照片。其中圖3A為菌株LYLB4 與輪紋病菌對時培養7天的照片；圖3B為菌株LYLB4與軟腐病菌對時培養10天的照片。
[0030] 圖4為菌株LYLB4作用下輪紋病菌菌絲形態和軟腐病菌菌絲形態。圖4A為LYLB4處 理組的輪紋病菌菌絲形態；圖4B為對照組的輪紋病菌菌絲形態；圖4C為LYLB4處理組的軟腐 病菌菌絲形態；圖4D為對照組的軟腐病菌菌絲形態。
[0031] 圖5為菌株LYLB4對梨果實輪紋病的防治作用。
[0032] 圖6為菌株LYLB4對梨果實軟腐病的防治作用。
【具體實施方式】
[0033] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0034] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0035] 下述實施例中的梨品種為"水晶梨"
[0036] 下述實施例中的馬鈴馨葡萄糖瓊脂培養基(PDA):馬鈴馨200克、葡萄糖20克、瓊脂 15克，用蒸饋水定容至1升，自然抑。
[0037] 下述實