一種具有解熱抗炎作用的三葉青塊根多糖及其用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥技術領域，特別涉及一種具有解熱抗炎作用的三葉青塊根多糖及 其用途。
【背景技術】
[0002] 保持恒定的體溫，是保證新陳代謝和生命活動正常進行的必要條件。一定限度內 的發熱是人體抵抗疾病的生理性防御反應，但體溫過高或時間過長可使機體各種調節功能 失調，并引起機體一系列的代謝和功能變化。例如，發熱容易導致神經系統的功能障礙，可 使病人出現煩躁、譫語、幻覺，甚至抽搐。這種情況在嬰幼兒中更容易發生，當體溫上升到39 °C以上時，極易引起驚厥，若反復發作則會使大腦受到傷害。等到體溫達到43°C，只要幾小 時病人就會因體溫過高而死亡；由于循環系統的功能障礙，發熱可引起心跳加快，消耗大量 的物質和能量，常常導致機體水鹽代謝的紊亂。尤其是腫瘤患者，即使是低熱也會增加全身 的慢性消耗，往往很容易產生負氮平衡，進一步促進惡液質的提前發生。因此，解熱對于維 持機體身體健康起著至關重要的作用。
[0003] 目前解熱抗炎類藥物主要為非留體類藥物，盡管這些藥物有明顯的解熱抗炎作 用，但該類藥物所引起的不良反應卻不容忽視，比如肝腎毒性、消化道出血、鎮靜、頭痛、皮 膚過敏、認知功能障礙等，常常因為不良反應中斷治療，影響藥物療效。因此，開發研究藥效 明確且安全的新型的解熱抗炎類藥物十分必要。以中藥為代表的天然藥物因其多靶點的綜 合作用機制且副反應少而成為解熱抗炎新藥的最佳研究熱點，具有較好的研究及開發前 景。
[0004] 三葉青學名為三葉崖爬藤（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)，是我國 特有的葡萄科崖爬藤屬珍稀藥用植物，主要分布于浙江、廣西、江西等少數省份，以地下塊 根或全草入藥。具有清熱解毒、祛風化痰、活血止痛等功效，主治毒蛇咬傷、扁桃體炎、淋巴 結結核、跌打損傷、小兒高熱驚厥等疾病。盡管已有文獻報道三葉青提取物具有解熱鎮痛抗 炎作用，但有關三葉青多糖是否具有解熱抗炎作用未見任何報道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種具有解熱抗炎作用的三葉青塊根多糖，該多糖具有如 圖1所示的紅外特征，且具有顯著的解熱抗炎作用，擴大了三葉青的藥用用途。
[0006] 本發明還提供了三葉青塊根多糖作為制備解熱抗炎藥物的用途。
[0007] 本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：
[0008] -種具有解熱抗炎作用的三葉青塊根多糖，通過以下方法制備獲得：
[0009] (1)取三葉青塊根35-65°C烘箱干燥，干燥至恒重后粉碎，將粉碎物與雙蒸水按照 lg: 10-30mL的料液比混合，加熱回流提取2-5次，過濾，合并濾液，減壓濃縮，并采用乙醇沉 淀法得到三葉青塊根粗多糖；
[0010] (2)將三葉青塊根粗多糖溶于雙蒸水，Sevag法除蛋白，接著脫鹽，然后過陰離子交 換柱，收集O. l-o. 8mol/L NaCl洗脫峰，最后除去NaCl得三葉青塊根多糖。
[0011]發明人通過長期研究發現，三葉青富含多糖，且三葉青多糖具有明確的解熱抗炎 鎮痛作用，進一步研究，發明人利用活性追蹤法發現三葉青塊根多糖是三葉青解熱抗炎的 主要活性組分。
[0012] 通過建立干酵母致小鼠發熱模型、二甲苯致小鼠耳腫脹及角叉菜膠致小鼠足跖腫 脹等動物模型，本發明人發現三葉青塊根多糖具有很強的解熱抗炎作用。
[0013] 通過上述三葉青塊根多糖的制備和解熱抗炎作用藥效的確認。根據現代制劑技 術，三葉青塊根多糖可以與藥劑或者食品上認可的輔料，制成以三葉青塊根多糖為主的膠 囊劑、片劑、散劑、□服液、軟膠囊、丸劑、緩釋制劑等各種劑型。
[0014] 作為優選，步驟（1)乙醇沉淀法具體為：向濃縮物中入3倍體積的95 %乙醇，靜置過 夜后，4200rpm高速離心15min，取沉淀用水溶解，然后再次進行乙醇沉淀，離心得三葉青塊 根粗多糖。
[0015] 作為優選，所述陰離子交換柱為DEAE Sepharse Fast Flow陰離子交換柱。一種具 有解熱抗炎作用的三葉青塊根多糖用于制備解熱抗炎藥物的用途。一種具有解熱抗炎作用 的藥物，由三葉青塊根多糖作為有效成分與藥學上可接受的輔料制成。
[0016] 本發明的有益效果是：本發明以三葉青為依托，制備三葉青塊根多糖，開發其功 效，擴大三葉青新的藥用資源。發明人的實驗表明：該三葉青多糖具有顯著的解熱抗炎作 用，可用于制備新型的解熱抗炎類中藥制劑，在腫瘤、自身免疫、2型糖尿病等疾病防治中都 有一定應用價值。
【附圖說明】
[0017] 圖1是本發明三葉青塊根多糖的紅外光譜圖。
[0018] 圖2是葡萄糖標準曲線圖。
[0019]圖3是三葉青塊根多糖的梯度洗脫曲線。
[0020]圖4是三葉青塊根多糖解熱實驗體溫變化趨勢圖。
【具體實施方式】
[0021]下面通過具體實施例，并結合附圖，對本發明的技術方案作進一步的具體說明。 [0022]本發明中，若非特指，所采用的原料和設備等均可從市場購得或是本領域常用的。 下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領域的常規方法。
[0023] 實施例：
[0024]具有解熱抗炎作用的三葉青塊根多糖制備：
[0025] (1)三葉青塊根粗多糖的制備：取三葉青塊根35_65°C烘箱干燥，干燥至恒重后粉 碎，將粉碎物與雙蒸水按照Ig: 20mL的料液比混合，加熱回流提取3次，每次Ih。過濾后合并3 次提取液，減壓蒸餾濃縮，加入3倍體積的95%乙醇，靜置過夜后，4200印111高速離心151^11， 取沉淀用水溶解，然后再次進行乙醇沉淀，離心得三葉青塊根粗多糖。
[0026] (2)采用苯酚-硫酸法測定粗多糖含量：
[0027]①標準液的配制:D-葡萄糖標準品在105°C條件下干燥至恒重，精密稱取IOOmg，置 于IOOmL容量瓶中，加適量蒸餾水溶解并稀釋至刻度，配成標準溶液為1.0mg/mL。臨用前，精 確吸取標準溶液1.0 ，2.0，3.0，4.0，5.0，6. OmL，分別置于IOmL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻， 即成系列葡萄糖標準溶液。
[0028]②繪制標準曲線：精密移取上述系列標準溶液0.5mL，置于IOmL的具塞玻璃試管 中，空白對照用蒸餾水〇.5mL。每管加入I.OmL 5%苯酸溶液中，混勾后，加3.5mL濃硫酸，迅 速混勻，室溫放置IOmin，置40°C水浴中加熱反應30min，冰水浴冷卻至室溫，于490nm處測吸 光度。
[0029]三葉青塊根粗多糖樣品測定：取三葉青塊根粗多糖樣品適量，精密稱定，定容至 IOOmL，精密吸取0.5mL，于490nm處測吸光度，由繪制的標準曲線計算樣品中多糖含量，并換 算為干燥藥材中含量（％ )，計算此方法的多糖收率。標準曲線的繪制以OD值為縱坐標，以葡 萄糖標準品濃度為橫坐標，求得線性回歸方程為:Y = 5.0095X-0.0024，R2 = 0.9992。實驗結 果表明，葡萄糖在濃度范圍為0.00625-0.2mg/mL內與吸光度呈線性關系(見圖2)。
[0030] (3)三葉青塊根多糖純化及精制：
[0031]①采用Sevag法除蛋白：將7.04g三葉青塊根粗多糖以最大濃度配成150mL水溶液， 加入l/4Sevag試劑(氯仿：甲醇=4:1)，充分振蕩10min，4000rpm，離心20min，收集上清液， 繼續重復上述操作3次，收集旋蒸得除蛋白后多糖3.8g。
[0032]②透析袋脫鹽:使用截留分子量為13000Da透析袋進行透析。先用蒸餾水沖洗透析 袋至無醇味，加入稀釋的去蛋白多糖80mL，加入雙蒸水作為滲透液，每隔3h換水1次，48h后， 濃縮凍干。
[0033]多糖的精制：取透析后的多糖凍干粉適量，用蒸餾水溶解，以5mL/min流速上DEAE Sepharse Fast Flow陰離子交換柱（2.5*10cm)，先用蒸餾水平衡3個床體積，然后分別用 0 · lmol/L、0 · 2mol/L、0 · 5mol/L、0 · 8mol/L NaCl溶液進行洗脫。每IOmL收集一管，用硫酸-苯 酚法測定吸光度，并繪制洗脫曲線（見圖3)，合并相同組分。將不同組分分別用截留分子量 為9000Da的透析袋透析48h，去除NaCl。透析過的組分真空冷凍干燥得精制后的多糖組分即 三葉青塊根多糖，該多糖具有如圖1所示的紅外特征。
[0034]三葉青塊根多糖解熱抗炎作用的藥效實驗：
[0035] 1.材料
[0036] 1.1試驗藥物
[0037]