環金合歡烷型倍半萜化合物、制備方法和醫藥用圖
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物技術領域，具體涉及從蜘蛛香的干燥根莖中分離得到的一種具有 心肌保護作用的環金合歡烷型倍半萜類化合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 蜘蛛香（Valeriana wallichii DC.或Valerianajatamansi Jone)又名馬蹄香、土 細辛、印度纈草等，系敗醬草科纈草屬植物，植株高20~70cm，根莖粗厚，塊柱狀，節密，有濃 烈香味。蜘蛛香為多年生草本植物，喜長于海拔2500m以下的山頂草地、灌木林中或溪邊，在 我國主要分布于陜西、河南、湖北、四川、貴州、云南等地。蜘蛛香根莖具有豐富的藥用價值， 傳統中醫藥認為其具有理氣止痛、消炎止瀉、祛風除濕、鎮靜安神等功效，可用于治療脘腹 脹痛、消化不良、腹瀉、痢疾、風濕痹痛、蛇毒、失眠、肥胖等癥。
[0003] 現代研究表明，蜘蛛香的主要化學成分有揮發油，環烯醚萜類和黃酮類等。蜘蛛香 的藥用價值很大一部分歸因于其根和莖所含的豐富揮發油，其化學成分比較復雜，主要包 括單萜烯類、倍半萜烯類及其含氧衍生物等。
[0004] 現代研究表明蜘蛛香具有抗腫瘤作用、鎮靜、鎮痛、抗焦慮作用、以及抗輪狀病毒 等作用。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種從蜘蛛香的干燥根莖中分離得到的一種具有心肌保護 作用的環金合歡烷型倍半萜類化合物及其制備方法。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007] 具有下述結構式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將蜘蛛香的干燥根莖粉碎， 用75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽 和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用75%乙醇洗脫10個柱 體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75%乙醇洗脫 浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、25:1、12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1、12:1 和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進一步地，步驟(a)中，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物(I)和藥學上可接受的載體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備心肌保護的藥物中的應用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備心肌保護的藥物中的應用。
[0015] 本發明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結構式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023] 制備方法：（a)蜘蛛香的干燥根莖（10kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提取（25L X 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(398g)和正丁醇萃取 物；（b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積， 再用75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏 (163g); (c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用200-300目正相硅膠分離，依次用體積比為85:1 (8個柱體積）、45:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、12:1 (10個柱體積)和1:1 (5個柱體積） 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4(49g)用200-300目正相硅膠 進一步分離，依次用體積比為20:1(8個柱體積）、12:1(10個柱體積)和5:1(5個柱體積)的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2(30g)用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠0DS-C18分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I) (143mg)。
[0024] 結構確證:無色油狀物;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z 271.1304,結合核磁特征可 得分子式為C15H2Q〇3，不飽和度為6。核磁共振氫譜數據δΗ( ΡΡπι，DMS〇-d6，500MHz):H-2(1 · 72， ddd，J=12.7,4.3,2.1)，H-2(1.97，t，J=12.0)，H-3(6.34，m)，H-4(5.98，m)，H-6(1.81，m)， H-7(1.49，m，2H)，H-8(4.20，m)，Η-10(6·15，br，s)，H-12(0.91，s)，H-13(0.94，s)，H-14 (5.05，111)，!1-14(5.08，111)，!1-15(4.93,8,2!〇 ;核磁共振碳譜數據5。(？?111，〇15〇-(16，1251抱）： 35.2(C，1-C)，30.1(CH2,2-C)，127.8(CH，3-C)，127.4(CH，4-C)，145.3(C，5-C)，55.7(CH，6-C)，33.9(CH2,7-C)，74.5(CH，8-C)，176.1(C，9-C)，114.2(CH，10-C)，173.4(C，n-C)，27.1 (01 3，12-〇,27.1(013，13-〇，108.2((：!12，14-〇,70.1(012，15-〇;碳原子標記參見圖1。紅 外光譜表明該化合物含有α，β-不飽和-γ -內酯和羰基基團（1762,1646CHT1) ,Η-NMR譜數據 顯示兩個甲基信號[5!10.91(8，]\^-12)，0.94(8，]\^-13)]，一個含氧亞甲基信號[5!14.93(8， !1-15,2!0]，一個烯屬亞甲基信號[6!15.05(111，!1-14)和5.08(111，!1-14)]，一個含氧次甲基質子 信號[SH4.20(m，H-8)]，以及三個烯屬次甲基質子[SH5.98(m，H-4)，6.15(br，s，H-10)，6.34 (m，H-3) ]。13CNMR譜顯示了 15個碳信號，包括兩個甲基，四個亞甲基[一個含氧亞甲基SC70.1 (C-15)，一個烯屬亞甲基δα08.2((Μ4)]，五個次甲基[三個烯屬次甲基SC114.2(C-10)， 127.4(C-4)和127.8(C-3); -個含氧次甲基SC74.5(C-8)]，四個季碳[兩個烯屬季碳δ C145.3(C-5)和 176.1(09);-個羰基碳3(：173.4((：-11)]。腿8(：譜中，Η-2(δΗ1.97)，H-4，Me-12，Me-13 和 H2-14 與次甲基碳(06);出-2，!1-6，]^-12和]^-13與(：-1;以及!1-4，!1-6和!12-14與 C-5的相關性表明該化合物含有一個環己烯，且其連有偕二甲基基團，以及一個環外亞甲 基。此外，次甲基C-6通過側鏈-CH2CH0H-與α，β-不飽和-γ-內酯環相連。HMBC譜中，H 2-7與C-9出-8與09，(：-10和(：-15;!1-10與(：-11;以及!12-15與(：-8，(：-9，(：-10和(：-11的相關性驗證了 上述推論。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確 定該化合物如圖1所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致（圖 2) 〇
[0025]實施例2:化合物(I)藥理作用試驗 [0026] -、材料和儀器
[0027]新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF級），雌雄不拘，由廣西醫科大學實驗動物中心提供 (試驗動物生產許可證:SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(純度2 98% )為自制。胎牛血清購于 Hy Clone公司，DMEM培養基購于GIB⑶公司，二甲基亞砜(DMS0)、0 · 25 %胰酶（含EDTA)購于 Solarbio公司，5-溴脫氧尿苷(5-Brdu)、四甲基偶氮唑鹽(MTT)購于美國Sigma公司，LDH測 試盒購于南京建成生物工程研究所，N0S試劑盒(分型）南京建成生物工程研究所，ATP酶試 劑盒(南京建成生物工程研究所），cTnI酶聯免疫吸附測試試劑盒、CK-MB酶聯免疫吸附測試 試劑盒購于武漢優爾生。
[0028] C02培養箱（Thermo Forma)，CKX41 相差顯微鏡（0LUMPUS)，Model 450 自動酶標儀 (美國Bio-Rad公司），96孔板(JET)，722sp可見分光光度計(上海棱光技術有限公司），可調 式微量移液器(Thermo Forma)，單人單面超凈工作臺（蘇州凈化設備總廠），XD-101型倒置 生物顯微鏡（南京江南光電），DW-40L262(低溫保存箱）、DW-86L628立式超低溫保存箱 (Haier特種電器有限公司