一株植物乳桿菌及其在發酵飼料中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及微生物應用和飼料調制加工領域，特別是涉及一種用于提升動物免疫 力的植物乳桿菌及其在發酵飼料中的應用。
【背景技術】
[0002] 發酵飼料具有適口性好，安全、無污染、無藥物殘留、易消化等特點。通過飼喂發酵 飼料可以提升動物免疫力，減少疾病的發生，降低腹瀉率、死亡率等，可以減少或替代抗生 素的使用。
[0003] 植物乳桿菌發酵過程可以利用原料中的乳糖產生乳酸，乳酸與鈣結合可以促進鈣 的吸收，因此對于有乳糖不耐受的群體，尤其處于快速生成發育期的群體，發酵飼料有很大 優勢。飼料經過乳酸菌發酵產生了多種乳酸菌代謝產物，包括維生素類、酶類和各種生物活 性物質等，發酵飼料更易于消化吸收。但是，目前的植物乳桿菌的發酵能力有限，在發酵飼 料中的生產應用效果不佳。
【發明內容】
[0004] 有鑒于此，本發明的目的在于提出一株植物乳桿菌及其在發酵飼料中的應用，以 提升動物的免疫力，減少疾病的發生，降低腹瀉率、死亡率等。
[0005] 基于上述目的，本發明提供的植物乳桿菌Lactobacillus plantarum保藏于中國 微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地點為北京市朝陽區北辰西路1號院3號 中國科學院微生物研究所，保藏登記入冊的編號為CGMCC No. 11721，保藏日期為2015年11 月23日。
[0006] 本發明還提供一種上述物乳桿菌Lactobacillus plantarum在發酵飼料中的應 用。
[0007] 在本發明的一些實施例中，所述應用包括：
[0008] 向谷物原料中加水混勾，制得發酵培養基，將所述植物乳桿菌Lactobacillus plantarum接種于所述發酵培養基中發酵，制得發酵液；
[0009] 將非發酵原料混合物與發酵液混合，制得發酵飼料。
[0010] 在本發明的一些實施例中，將所述植物乳桿菌Lactobacillus plantarum與釀酒 酵母Saccharomyces cerevisiae都接種于所述發酵培養基中進行協同發酵。
[0011 ] 在本發明的一些實施例中，所述酵母菌為釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae Sa-10已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，CGMCC No.6120。
[0012] 在本發明的一些實施例中，所述谷物原料為膨化玉米、去皮豆柏或發酵豆柏、紅薯 粉或黃豆粉、大米面或小米面、小麥面粉，所述膨化玉米、去皮豆柏或發酵豆柏、紅薯粉或黃 豆粉、大米面或小米面、小麥面粉和水的重量百分含量依次為1~20%、1~50%、1~20%、1 ~20%、1 ~20%和 50~90%。
[0013] 在本發明的一些實施例中，所述谷物原料為大米面、黃豆粉和玉米粉，所述大米 面、黃豆粉和玉米粉的重量百分含量依次為1~30%、1~30%和40~80%。
[0014] 在本發明的一些實施例中，所述植物乳桿菌Lactobacillus plantarum的接種量 為1%~3%〇
[0015] 在本發明的一些實施例中，所述非發酵原料混合物包括氨基酸、維生素、微量元 素、食鹽、石粉、磷酸二氫鈣、白砂糖和超級蒸氣魚粉。
[0016] 本發明提供的菌種在生長、產酸、抑菌等方面表現出很好的性能，其發酵產品具有 良好的飼喂效果。其代謝乳酸可抑制腸道病原菌生長，從而能夠顯著提升畜禽的免疫力，改 善腸道微生態環境，降低發病率，并對消化率、產奶量等方面帶來一定提升。
【具體實施方式】
[0017] 為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚明白，以下結合具體實施例，對本發 明進一步詳細說明。
[0018] 實施例1植物乳桿菌Lactobacillus plantarum的分離和鑒定
[0019]所述述植物乳桿菌EM-12菌株于2015年11月23日保藏在中國微生物菌種保藏管理 委員會普通微生物中心，保藏編號為:CGMCC No. 11721，保藏單位地址:北京市朝陽區北辰 西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編：100101。
[0020]本發明提供的植物乳桿菌EM-12是自內蒙古四王子旗牧民自制發酵牛乳中分離篩 選獲得，具體分離鑒定步驟如下：
[0021 ] 1)取大米粉、黃豆粉與玉米粉按重量比1:1:1的比例混合，取上述混合物按照料水 重量比1:4的比例加水混合，制得培養基；
[0022] 2)取含活菌的發酵牛乳樣品，按照2%的接種量接種于所述培養基中，充分震蕩混 勻，36°C厭氧、靜置培養，培養時間24小時;將上述培養液在此培養基中反復傳代3次，獲得 適合發酵谷物類的乳桿菌菌種；
[0023] 3)取上述培養液lmL，接種梯度稀釋并涂布于MRS平板上36°C培養72h;挑選單菌落 接菌于MRS液體培養基中36°C培養18h，以備保藏和鑒定使用。
[0024] 4)將菌種送至中國科學院微生物研究所進行鑒定，根據菌種細胞形態、生化特征、 16S rRNA基因序列、pheS基因序列等綜合分析，鑒定為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)〇
[0025] 該菌株的細胞形態和理化實驗結果見下表：
[0026]
[0027]
[0028] 丄0? ruiwtyijWJ疋術：
[0029] GCGTGCTAATACATGCAGTCGAACGAACTCTGGTATTGATTGGTGCTTGCATCATGATTTACATTTGAGTGAGTGGC GAACTGGTGAGTAACACGTGGGAAACCTGCCCAGAAGCGGGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAA CAACTTGGACCGCATGGTCCGAGTTTGAAAGATGGCTTCGGCTATCACTTTTGGATGGTCCCGCGGCGTATTAGCTA GATGGTGGGGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGA CACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCG TGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAAAGAAGAACATATCTGAGAGTAACTGTTCAGGTATTG ACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGG ATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCA TCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGA AGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGTATGGGTAGCAAACAGGATT AGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAA CGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGG TGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATACTATGCAAATCTAAGAGATTA GACGTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTC CCGCAACGAGCGCAACCCTTATTATCAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCCGGTGACAAACCG GAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAA CGAGTTGCGAACTCGCGAGAGTAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTAC ATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCG TCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGGGGTAACCTTTTAGGAACCAGCCGCCTAAGTGACAGA
[0030] pheS基因序列測定結果：
[0031] GGCGACAATTACAAGACGTGCTACTACGCACGCAGACGTCTGCTGATCAGCCGCGGTCACTTGAAAATCACGATTTT TCTAAAGGACCGCTGAAGGTCTTGTCACCTGGCCGCGTTTATCGGCGTGATACGGATGATGCAACCCATTCCCATCA ATTTCATCAAATTGAAGGGTTAGTCGTGGACAAGCATATTACGATGGCTGATTTGAAGGGCACCTTAATTCTGGTTG CCAAGACTTTGTTTGGCGATCAATTCGATGTTCGGCTACGGCCAAGCTTCTTTCCATTCACGGAACCATCCGTAGAA GCTGATGTAACTTGCTTTAATTGCAATGGCAAGGGCTGTGCAATCTGTAAGCAAACGGGTTGGATCGAAGTACTGGG TGCCGGCATGGTTCACCCCCACGTGTTAGAAATGTCTGGCATTGATCCAGAAGAATATGGTGGTTTTGCTTTCGGTC TAGGGA
[0032] 實施例2植物乳桿菌EM-12菌體生長性能及產酸性能的測定
[0033] (1)培養基的配制：
[0034]取一定量的谷物原料粉碎至1.0mm，按料水重量比1: 3的比例加水混合，然后將混 合料液高溫滅菌，再降溫至36°C左右，獲得發酵培養基。其中，所述滅菌條件為121°C滅菌， 時間20分鐘。所述谷物原料包括大米粉、黃豆粉和玉米粉，所述大米面、黃豆粉和玉米粉的 重量比為1:1:1。
[0035] (2)發酵菌種的獲得：
[0036] 取甘油管保藏該乳桿菌菌種，將其接種至MRS培養基，36°C靜置培養20小時，獲得 乳桿菌菌種。其中，所述MRS液體培養基組成如下：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡 萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、lmL吐溫80、0