一種丹酚酸b的分離純化方法及丹酚酸b鎂鹽的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種從丹參或白花丹參藥材的提取浸膏中分離純化丹酚酸B的方法以及其鎂鹽的制備方法。
【背景技術】
[0002]中藥丹參具有活血祛瘀、涼血消癰、清心除煩的功效。現代藥理研究表明，丹參能擴張冠狀動脈、增加血流量、抗心肌缺血、改善微循環、降低心肌耗氧量、改善心功能、降血壓、降血脂、抗凝血、抗血栓、抗氧化、保肝等諸多功效。
[0003]丹酚酸B是丹參主要水溶性成分之一。藥理研究表明，丹酚酸B在清除自由基、保護心腦缺血再灌注損傷和保護腎等方面具有較強的藥理作用。
[0004]已有的丹酚酸B分離純化方法主要是通過大孔吸附樹脂分離或者高速逆流色譜分離。大孔吸附樹脂分離的主要缺點是洗脫耗時長，工作量大，生產成本高。中國專利文件CN1528756A(申請號:03151476.6)公開了一種從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，將幾種從丹參中提取丹酚酸B的方法進行有機組合，開發出了一套適合分離純化丹酚酸B的新工藝。即先用水進行提取，然后用殼聚糖絮凝，接著進行醇沉，再用石油醚和乙酸乙酯分別萃取，最后采用硅膠柱層析得到較高純度的丹酚酸B。上述方法采用硅膠柱層析分離純化丹酚酸B，得到的純度為50%-96%的丹酚酸B;但是，過程復雜，死吸附較大，操作過程繁瑣，難以擴大到生產。Xiao Wang等在Journal of Separat1n Science 2007，30，3214-3217描述了米用高速逆流色譜分離純化丹酚酸B的工藝，顯示pH梯度逆流色譜可以將丹酚酸B純化到94.1%，并可能應用于大批量生;但是，高速逆流色譜儀的使用具有一定的限制。
【發明內容】
[0005]針對現有技術中的不足，本發明提供了一種從丹參或白花丹參藥材中快速分離純化丹酚酸B的方法以及丹酚酸B鎂鹽的制備方法，該方法工藝簡便，效率高，產品純度可達98%。
[0006]本發明的技術方案如下:
[0007]—種丹酚酸B的分離純化方法，包括以丹參或白花丹參藥材為原料，經溶劑提取萃取、鎂鹽絡合法分離純化、MCI柱純化、結晶與重結晶步驟，得丹酚酸B;
[0008]所述溶劑提取萃取步驟為:將丹參或白花丹參藥材粉用70_80wt%乙醇室溫下超聲提取、過濾，將濾液減壓濃縮得濃縮液，濃縮液加水懸浮，以二氯甲烷或乙酸乙酯萃取除去雜質，棄去二氯甲烷或乙酸乙酯層，水層用酸性溶液調PH=I?2，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液減壓濃縮，得丹酚酸B粗提物。
[0009]根據本發明，優選的，溶劑提取萃取步驟中:丹參或白花丹參藥材粉的質量與70-80被％乙醇的體積比為l:(8-12)g/mL;乙酸乙酯萃取液減壓濃縮至浸膏狀，無乙醇味。
[0010]根據本發明，優選的，鎂鹽絡合法分離純化步驟為:將MgCl2溶于蒸餾水，配制成濃度為0.01wt% ?lwt%的1%(:12水溶液;將MgCl2水溶液加入到溶劑提取萃取步驟所得的丹酚酸B粗提物中，室溫下攪拌，滴加濃度為0.1wt %?Iwt %的NaHCO3溶液，滴加完畢后，繼續攪拌I?2分鐘；加入等體積的二氯甲烷或乙酸乙酯萃取2次，萃取后的水溶液，以IN?2.5N的鹽酸調PH=I?2，再以乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮；
[0011 ]將該濃縮液重復上述操作，再純化I次，得純化后丹酚酸B樣品。
[0012]根據本發明，優選的，鎂鹽絡合法分離純化步驟中:所述的MgCl2溶液中所含有的MgCl2摩爾數為丹酚酸B粗提物中丹酚酸B摩爾數的二分之一；
[0013]優選的，所述的NaHCO3溶液中所含有的NaHCO3的摩爾數等于丹酚酸B粗提物中丹酚酸B摩爾數，所用的NaHCO3與MgCl2的摩爾數比為2:1。
[0014]根據本發明，優選的，MCI柱純化步驟為:將鎂鹽絡合法分離純化后的丹酚酸B樣品，過MCI柱子，10wt%-20wt%甲醇溶液除雜質，30wt%-60wt%甲醇溶液洗脫丹酸酸B樣品，濃縮丹酚酸B樣品洗脫液；
[0015]將濃縮后的丹酚酸B樣品洗脫液再重復上述MCI柱純化步驟，得進一步純化后的丹酚酸B樣品。
[0016]根據本發明，優選的，MCI柱純化步驟中:所述除雜用洗脫液優選20^%甲醇水溶液;所述洗脫丹酚酸B樣品所用溶液優選30wt %甲醇溶液。
[0017]根據本發明，優選的，結晶與重結晶步驟為:將MCI柱純化步驟所得丹酚酸B樣品溶解于二氯甲烷:甲醇體積比= 1:9?9:1，的混合溶液中進行結晶與重結晶，得到丹酚酸B。
[0018]根據本發明，優選的，結晶與重結晶步驟中，所述的二氯甲烷:甲醇的體積比優選(2 ?3):(8 ?7)0
[0019]根據本發明，一種丹酚酸B鎂鹽絡合物的制備方法，步驟如下:
[°02°] (I)氫氧化鎂及碳酸氫鎂的制備:
[0021]取MgCl2溶于蒸餾水，配制成濃度為1的％?5的％的1^(:12水溶液，然后滴加1的％?5的％的他0!1水溶液，至不再生成白色沉淀為止，過濾沉淀，以蒸餾水洗滌沉淀至中性;取Mg(OH)2加入水中，通入C0260?90min至溶液澄清，并超聲10?20min除去溶液中多余C02，溶液過濾除去不溶性顆粒，即得碳酸氫鎂溶液;碳酸氫鎂溶液須現用現配。
[0022](2)丹酚酸B鎂鹽絡合物的制備:
[0023]將上述制備的丹酚酸B樣品加入碳酸氫鎂溶液中，攪拌使其溶解；以等體積二氯甲烷或乙酸乙酯萃取2次，除脂溶性雜質，萃取后的水層在40°C條件下減壓濃縮，除去水層中殘留的二氯甲烷或乙酸乙酯，水溶液冷凍干燥，即得丹酚酸B鎂鹽絡合物。
[0024]根據本發明丹酚酸B鎂鹽絡合物的制備方法，優選的，碳酸氫鎂溶液中所含碳酸氫鎂的摩爾數與丹酚酸B的摩爾數比為2:1。所用碳酸氫鎂溶液應為新制備，現用現配。
[0025]根據本發明，一種丹酚酸B鎂鹽絡合物的制備方法，步驟如下:
[0026]取MgCl2溶于蒸餾水，配制成濃度為0.0lwt %?lwt %的MgCl2水溶液;將上述制備的丹酚酸B加入到MgCl2水溶液中，室溫攪拌，滴加NaHCO3水溶液;滴加完畢后，抽濾，冷凍干燥，即得丹酚酸B鎂鹽絡合物。
[0027]根據本發明丹酚酸B鎂鹽絡合物的制備方法，優選的，所述的MgCl2溶液中所含有的MgC12摩爾數與丹酚酸B摩爾數比為1: 2。其中，所述的NaHCO3溶液中所含有的NaHCO3的摩爾數與丹酚酸B摩爾數比為1:1。
[0028]本發明的有益效果:
[0029]本發明采用丹酚酸B鎂鹽絡合法，可以省去大孔吸附樹脂或聚酰胺柱色譜的層析過程，純化方法更簡單和省時，成本更低。丹酚酸B鎂鹽的制備方法簡單，成本低，而且收率高，純度高，純度可達98 %，更適合于大生產。
【附圖說明】
[0030]圖1為本發明實施例1步驟(I)得到的丹酚酸B粗提物的HPLC圖。
[0031]圖2為本發明實施例1步驟(2)鎂鹽絡合法純化后得到的丹酚酸B樣品的HPLC圖。
[0032]圖3為本發明實施例1步驟(3)MCI純化后丹酚酸B樣品的HPLC圖。
[0033]圖4為本發明實施例1步驟(4)重結晶后得到的丹酚酸B的HPLC圖。
[0034]圖5為本發明實施例2得到的丹酚酸B鎂鹽的HPLC圖。
[0035]圖6為本發明實施例3得到的丹酚酸B鎂鹽的1H-NMR圖譜。
[0036]圖7為本發明實施例3得到的丹酚酸B鎂鹽的13C-NMR圖譜。
【具體實施方式】
[0037]下面通過具體實施例并結合附圖對本發明作進一步說明，但不限于此。
[0038]實施例1:高純度丹酚酸A的制備
[0039](I)丹酚酸B的提取:取丹參藥材粉末約500g，加入75wt%乙醇，丹參藥材粉的質量與乙醇的體積比為1:12g/mL;超聲提取2次，每次30分鐘，過濾，合并濾液，減壓濃縮，濃縮液加適量水，等體積二氯甲烷萃取除雜，水層用2.5N鹽酸調pH = 2，再用等體積的乙酸乙酯萃取2次，在45°C條件下乙酸乙酯萃取液減壓濃縮，得丹酚酸B粗提物。
[0040](2)鎂鹽絡合法純化