可用于輔助診斷系統性紅斑狼瘡的多肽組合物、檢測器件和檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明主要涉及免疫檢測技術。具體而言，本發明涉及可用于輔助診斷系統性紅 斑狼瘡的多肽組合物，檢測器件和檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 系統性紅斑狼瘡（systemiclupuserythematosus，SLE)是一種以自身抗體產生 和免疫復合物形成為特征的自身免疫性疾病，臨床表現為全身癥狀及多系統多器官受累的 癥狀，嚴重影響患者的壽命和生活質量。我國SLE的發病率為70.1/10萬，并且有逐年上升的 趨勢。SLE的早期診斷、早期治療是改善預后的關鍵。然而我國自身免疫性疾病診斷水平較 低，并且診斷試劑主要依賴進口，造成診斷費用昂貴，增加了國家和患者的醫療成本，也不 利于向基層醫院普及。因此，建立穩定、快捷、適合推廣的檢測方法，是目前需要解決的問 題。
[0003] SLE臨床診斷標準中包括自身抗體如抗核抗體（(ANA)、抗雙鏈DNA抗體(ds-DNA抗 體)和抗Sm抗體檢測，但由于特異性和靈敏度的不高，還不是理想的血清學檢測指標。如果 能夠建立SLE特異的"白身抗體譜"檢測方法，同時檢測多種特異性抗體，提高檢出率及準確 性，將為SLE的診斷、分類、療效觀察和預后判斷提供了可靠的依據，具有重要的臨床意義。 因此，尋找一種敏感性強、特異性高而義簡便易行的血清學檢測方法，對系統性紅斑狼瘡的 早期診斷及治療具有重要意義。
[0004] 大量自身抗體的出現是自身免疫性疾病的重要特征之一，但由于其發病機制尚不 明確，難以直接利用自身抗原檢測抗體。抗原表位(epitope)是抗原分子中識別、結合抗體 的基礎，因此是檢測抗體的實際有效組分。以抗原表位肽或其模擬肽(mimotope)作為診斷 工具有以下幾個優勢：1)可以提高診斷的靈敏度和特異性，避免了生物大分子易產生的非 特異性結合（DerooSetal(2001)CombChemHighThroughputScreen4:75-115) ;2)擴 大疾病診斷的范圍，對于研究較少或難以體外應用的自身抗原如核酸抗原、多糖抗原、脂類 抗原，以模擬肽作為天然抗原的替代物進行診斷，也可以獲得與天然抗原表位一致的結果 (BruceG(1997)ProcNatlAcadSciUSA94：1955-1960；JinapingQetal(1999) Hyridoma18(1): 103-109) ;3)多肽制備、應用的成本低、易于質控。因此，自身抗原表位肽 或其模擬肽(MeloenRHetal(2000)JMolRecognit13:352-359)的獲得是制備自身抗 體的多肽檢測試劑的基礎。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供一種對系統性紅斑狼瘡的診斷有用的多肽、編碼該多肽的 核酸、包含該核酸的表達載體、導入了該表達載體的宿主細胞、抗該多肽的抗體、包含該多 肽的檢測器件、包含該多肽或該檢測器件的檢測試劑盒、以及該多肽在檢測干燥綜合征中 的用途、該多肽在制備用于檢測系統性紅斑狼瘡的試劑盒或檢測器件中的用途。即，本發明 包含下述技術方案：
[0006] 1. 一種多肽，其氨基酸序列如SEQIDN0:1 所示，S卩：PRRQICVGDRRERKAAFKGD。
[0007] 2.編碼權利要求1所述的多肽的核酸。
[0008] 3.包含權利要求2所述的核酸的表達載體。
[0009] 4.導入了權利要求3所述的表達載體的宿主細胞。
[0010] 5.-種檢測器件，其包括：
[0011] 固體載體，以及
[0012] 連接于該固體載體上的權利要求1所述的多肽。
[0013] 6.根據權利要求5所述的檢測器件，其中，所述固體載體是iPDMS薄膜。
[0014] 7.-種檢測試劑盒，其包括權利要求1所述的多肽、或者權利要求5或6所述的檢測 器件。
[0015] 8.抗權利要求1所述的多肽的抗體。
[0016] 9.權利要求1所述的多肽在制備用于檢測系統性紅斑狼瘡的試劑盒或檢測器件中 的用途。
【附圖說明】
[0017] 圖1iPDMS薄膜的制作過程進行說明的示意圖。
[0018]圖2說明多肽微陣列點樣模式的示意圖。
[0019]圖3是顯示對健康正常人或非系統性紅斑狼瘡病人血清進行檢測的結果的照片。 [0020]圖4是顯示對系統性紅斑狼瘡病人血清進行檢測的結果的照片。
【具體實施方式】
[0021] 本發明的多肽
[0022] 在另一個方面中，本發明提供對系統性紅斑狼瘡的早期篩查和臨床輔助診斷有用 的多肽，由SEQIDN0:1所示的氨基酸序列構成，S卩：PRRQICV⑶RRERKAAFKGD。如實施例所 示，本發明的多肽對系統性紅斑狼瘡病人的血清呈陽性反應，而對健康正常人或非系統性 紅斑狼瘡病人血清呈陰性反應。因此，本發明的多肽作為系統性紅斑狼瘡的早期篩查和臨 床輔助診斷工具是有用的。本發明的多肽可以用于制造可用于系統性紅斑狼瘡的早期篩查 和臨床輔助診斷的檢測器件(例如下述的本發明的檢測器件)或檢測試劑盒(例如下述的本 發明的檢測試劑盒）。
[0023]本發明的多肽可以適宜采用（1)化學合成方法、或（2)酶反應合成方法等公知方法 來獲得，但不限于此，其中化學合成更為簡便。在化學合成本發明的多肽情況下，通過使用 肽合成儀合成或者半合成該多肽來進行。作為化學合成方法，可以列舉出例如肽固相合成 法等。這樣合成的肽可以采用常規手段例如離子交換色譜、反相高效液體色譜、親和色譜等 進行純化。這樣的肽固相合成方法以及其后的肽純化都是本技術領域公知的。
[0024]此外，在通過酶反應生產本發明的多肽的情況下，可以采用例如國際公開小冊子 TO2004/011653號所述的方法。即，可以這樣來生產：將一方的氨基酸或二肽的羧基末端被 酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、與氨基酸處于游離狀態的氨基酸(例如羧基保護的 氨基酸)在肽合成酶的存在下進行反應，生成的二肽或三肽。作為肽合成酶，可以列舉出：具 有生成肽的能力的微生物的培養物、由該培養物分離的微生物菌體、或該微生物的菌體處 理物、或該微生物來源的肽合成酶。
[0025] 而且，除了上述的酶方法、化學合成方法以外，還可以采用例如基因工程方法來生 產本發明的多肽。
[0026] 本發明的多肽的氨基酸序列可以采用常規的方法進行分析和確認，例如可以利用 質譜、色譜等方法來進行分析和確認。
[0027]本發明的檢測器件
[0028]在另一方面中，本發明還提供一種檢測器件(本發明的檢測器件），其包括固體載 體、以及連接于該固體載體上的本發明的蛋白質或本發明的多肽。所述檢測器件對于系統 性紅斑狼瘡的早期篩查和臨床輔助診斷是有用的。
[0029]在本發明中，對固體載體沒有特殊限制，只要是作為固體或不溶性材料(例如是可 以通過過濾、沉淀、磁性分離等從反應混合物中分離的材料)的載體即可。
[0030] 構成固體載體的材料包括但不限于:硅膠(聚二甲基硅氧烷，PDMS)、纖維素、特氟 隆TM、硝基纖維素、瓊脂糖、葡聚糖、殼聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚酰 胺、聚丙烯、尼龍、聚偏二氟乙烯、膠乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纖維、金、鉑、銀、銅、鐵、不銹 鋼、鐵氧體、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亞胺、聚乳酸、樹脂、多糖類、蛋白（白蛋白等）、碳或它們 的組合等。
[0031] 固體載體的形狀包括但不要限于:珠子、磁珠、薄膜、微細管、濾膜、板、微量板、碳 納米管、傳感器芯片等。正如本技術領域公知的那樣，薄膜或板等平坦的固體載體上可以設 置凹坑、溝槽、濾膜底部等。
[0032] 在本發明中，磁珠可以具有約25nm-約1mm范圍的球體直徑。在優選的實施方式中， 磁珠具有約50nm_約1Ομπι范圍的直徑。磁珠的尺寸可以根據特定的用途來進行選擇。
[0033] 在本發明中，由Sepharose等高交聯球形瓊脂糖制成的珠子具有約24μηι-約165μηι范圍的直徑。優選地，高交聯球形瓊脂糖珠具有約24μπι-約44μπι范圍的直徑。高交聯球形瓊 脂糖珠的尺寸可以根據特定的用途來進行選擇。
[0034] 具有疏水性表面的固體載體的例子包括可從Polysciences，W