方法
【專利說明】方法
[0001] 本發明涉及一種鑒定化合物的方法，所述化合物與編碼一種或多種參與檢測和感 知脂肪酸的受體的一種或多種多肽結合或調節所述多肽活性。
[0002] 眾所周知許多貓伴侶動物和犬伴侶動物挑剔它們的食物。動物將經常拒吃它已經 吃過一段時間的食料(foodstuff)，或拒絕吃任何超過最低量的食料。部分這種現象可能受 原料感官概況的微妙差異驅使。這些差異可能無法由人類消費者感知，但是歸因于嗅覺系 統和味覺系統的差異，貓伴侶動物和犬伴侶動物可以充分覺察這些差異。這些感官差異可 以歸因于所用原料的自然變異或當物料供應短缺并且不得不用替代品替換時。這可令主人 非常沮喪并且可導致主人感覺動物不快樂并且不享受其食物。如果不消費動物可獲得的足 量食物，動物還可能無法攝入其需要量的必需營養素。因此，可以清楚地看到，需要一種方 式以鼓勵伴侶動物吃為其提供的食料。已經提出許多解決方案以克服這個問題。大部分市 售寵物食物以一系列不同的風味和/或質地提供。但是，伴侶動物主人將知道，伴侶動物經 常會由于不明原因突然拒絕主人覺得是動物最偏好的風味。通過向伴侶動物提供不同食料 的選擇，已經對伴侶動物的風味偏好性進行了大量研究。
[0003] 哺乳動物中的味覺感知受動物舌頭的味蕾上的味覺受體(taste receptor)控制 并且通常認為涉及5種味覺感知;咸味、甜味、苦味、酸味和鮮味。食物的口味由哪種受體受 到刺激決定。雖然一些味覺受體在物種之間有同源性，每種受體類型的普遍程度、頻率和活 性取決于物種，因為如所預計那樣，食草動物將需要不同于食肉動物的口味刺激。貓和犬味 覺受體與人味覺受體有一些同源性，盡管，如已知那樣，貓科動物和犬科動物中的不同受體 具有與人類中不同的激活和/或偏好性水平。
[0004]通常認為對食物中脂肪的感知已經歸因于口感并且在一定程度歸因于嗅覺。但 是，在人類和嚙齒類領域，最近已經鑒定脂肪酸味覺受體(卡爾托尼（Cartoni)等人，2010; 加林多(Galindo)等人，2012;馬丁(Martin)等人,2011)，這表明味覺反應還參與脂肪感知 和檢測。
[0005] 預測GPR120(也稱作6?1?129、03?六1?1、？61?4、？?六1?4)是6蛋白偶聯的細胞表面受體， 含有參與檢測特定脂肪酸的7個跨膜結構域(transmembrane domain)(以及胞外部分)和參 與信號轉導的G蛋白結合的胞內部分。認為GPR120結合游離形式的中鏈至長鏈脂肪酸，如油 酸和亞油酸。已經預測在人類中結腸內分泌細胞上存在GP120受體的兩種同工型（isoform) (剪接變體)GPR120L和GPR120S。已經提出長同工型在感知口味方面沒有功能性地發出信 號。
[0006] GPR1 20在多種哺乳動物組織中表達，并且已經已知參與刺激膽囊收縮素 (cholecystokinin，CCK)從STC-1 (腸分泌細胞系)分泌，此外已經報道GPR120對分泌胰高血 糖素樣肽（glucogon-1 ike pept ide，GLP-1)具有刺激作用。GPR120還在腦下垂體 (pituitary gland)中表達并且因此已經探索其參與應激調節的可能性。GPR120是不飽和 長鏈脂肪酸的已知受體并參與GLP-1分泌、胰島素敏化以及抗炎效應和抗肥胖效應。已經提 出GPR120激動劑或拮抗劑可以用作治療多種代謝性疾病如糖尿病的潛在療法。但是，尚待 探索GPR120的潛在適口性增強作用。
[0007] EP1688138A1 (武田制藥有限公司（Takeda Pharmaceutical Company Limited)) 是涉及調節人衍生性14273受體(GPR120受體)功能的特異性作用劑的歐洲專利申請。該文 獻描述了刺激GPR120的低分子量合成激動劑或拮抗劑。這些物質據稱可用于治療暴食、糖 尿病或肥胖癥。描述了能夠抑制GPR120的替代性作用劑及其治療厭食癥的用途。該申請限 于人類和小鼠 GPR120受體并涉及在治療性背景下化合物的鑒定和用途。
[0008] 專利申請公開W02007/134613(瑞歐-科學公司（Rheo-Science A/S))涉及多種哺 乳動物組織中的GPR120受體表達。該申請提出化合物用于調節GPR120的表達以治療、緩解、 預防或診斷人類中糖尿病和/或肥胖癥的用途，即治療性應用。
[0009] 歐洲專利申請EP1932920A1 (衛材研究與開發管理有限公司（Eisai R&D Management Co Ltd))公開了一種用于確定某物質是否改變人GPR120介導的細胞刺激活性 以用于治療性應用的方法。
[0010] 專利申請公開W02011/159297A1(麥他波勒克斯公司（Metabolex Inc))描述了人 和大鼠的GPR120激動劑以及它們治療代謝性疾病(包括糖尿病和與血糖控制不良相關的疾 病）的用途。該申請描述了將GPR120激動劑施用至小鼠以確定對胰島素、胰高血糖素樣肽1 和多種其他激素分泌的影響。顯示GPR120激動劑可以在小鼠中響應于腹內葡萄糖負荷而降 低血糖。
[0011] 巴拉特?希姆普卡德（Bharat Shimpukade)等人（藥物化學雜志（Journal of Medicinal Chemistry)，專利和選擇的GPR120激動劑的發現(Discovery of a Patent and Selective GPR120Agonist)，2012年5月 10 日；59(9) :4511-4515)公開了一種用于治療性用 途的人GPR120激動劑。
[0012] 孫啟（Qi Sun)等人（分子藥理學(Molecular Pharmacology)，基于對接模擬的 GPR120激動劑的結構-活性關系（Structure-Activity Relationships of GPR120Agonists Based on a Docking Simulation)，2010年 11 月；78(5) :804-810)描述了 用于治療目的人GPR120激動劑。
[0013] 原高史（Takafumi Hara)等人（紐寧-斯密特博格藥理學文獻(Naunyn-Schmied Arch Pharmacol )，游離脂肪酸受體GPR120和GPR40的新型選擇配體(Novel Selective Ligands for Free Fatty Acid Receptors GPR120and GPR40)，2009年9月；380(3):247-255)嘗試鑒定人GPR120受體的新治療性配體。但是，這些作者僅能夠鑒定部分激動劑。
[0014] 鈴木孝義（Takayoshi Suzuki)等人（藥物化學雜志（Journal of Medicinal C h e m i s t r y )，源自P P A R y激動劑的G蛋白偶聯受體1 2 0 -選擇性激動劑的鑒定 (Identification of G Protein-Coupled Receptor 12〇-Selective Agonists Derived from PPARy Agonists)，2008年 12月 11 日；51 (23): 7640-7644)描述了發現GPR120選擇性激 動劑的需求，原因是這些選擇性激動劑可以作為治療劑使用。
[0015] CD36 (還稱作FAT、GP3B、GP4、GPIV、SCARB3、血小板反應蛋白受體）不屬于G蛋白偶 聯受體家族(它屬于B類清除受體家族），參照人類中其他已知的脂肪酸味覺受體，這不同尋 常。
[0016] 已知家養貓科動物挑剔食物，并且許多主人覺察到貓將在特定的日子僅吃某些食 料。因此，確保貓充分響應于特定食料的能力確保食料總是得到動物接受，并且還確保主人 感覺到動物快樂和健康。
[0017] 犬科動物也可能挑剔，或在某些動物的情況下，在食物選擇方面不加區分。通過改 善食料的味覺感知，可以鼓勵犬科動物更可靠和更一致地吃特定食料。
[0018] 目前，通過喂食試驗鑒定貓和犬對口味刺激的偏好性，就成本、時間和結果而言， 所述喂食試驗可能無效率。另外，鑒定新口味刺激是困難的，因為許多化合物可能需要使用 動物偏好性試驗測試并處理，以確定哪種化合物可以可靠地吸引貓科動物和犬科動物。相 對大量的每種測試化合物對這類方法是必需的。
[0019] 因此，需要可靠、更高效的篩選方法以鑒定可以結合于并刺激(或其他調節)動物、 尤其是犬科動物和貓科動物中某些味覺受體的口味化合物。
[0020] 因此，在一個方面，本發明提供一種用于鑒定與多肽結合和/或調節所述多肽活性 的化合物的方法，所述多肽包含；
[0021 ] (i)貓或犬GPR120或者貓或犬CD36受體的序列；
[0022] (ii)如SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:7中所述的氨基酸序 列；
[0023] (iii)與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:3具有至少90%同一性的氨基酸序列；
[0024] (iv)與SEQ ID N0:5或SEQ ID N0:7具有至少90%同一性的氨基酸序列；