流行性感冒病毒疫苗及其用圖
【專利說明】[0001 ] 流行性感冒病毒疫苗及其用途
[0002] 本發明涉及醫學領域。此處提供了多種流行性感冒血球凝集素主干域多肽，提供 多種血球凝集素主干域多肽的方法，包括這些多肽的組合物，包括這些多肽的疫苗及其使 用方法，特別是在流行性感冒的檢測、預防和/或治療中的使用。
[0003] 罝量
[0004] 流行性感冒病毒是主要的人病原體，引起呼吸系統疾病(通常稱為"流行性感冒" 或"流感"），其嚴重性范圍為從亞臨床感染至可導致死亡的原發性病毒性肺炎。感染的臨床 影響隨著流行性感冒株的毒力和宿主的暴露、病史、年齡、以及免疫狀態而變化。全世界每 年估計大約10億的人經受流行性感冒病毒感染，導致3-5百萬例嚴重疾病以及估計300,000 至500，000例流行性感冒相關死亡。這些感染大多數可能歸因于攜帶H1或H3血球凝集素亞 型的甲型流行性感冒病毒，較少程度由乙型流行性感冒病毒促成，并且因此所有三種的代 表包括在季節性疫苗中。當前免疫實踐依賴于流行的流行性感冒病毒的早期鑒別以允許及 時生產有效的季節性流行性感冒疫苗。除了在預測將在下一季中占主導的毒株方面的固有 困難之外，抗病毒耐受性以及免疫逃逸也在當前疫苗在防止發病率和死亡率上的失敗中發 揮作用。除此外，由起源于動物貯器的高毒力病毒株引起大流行并且重配而增加人與人傳 播的可能性構成了對全球健康的顯著且現實的威脅。
[0005] 甲型流行性感冒病毒廣泛分布于自然中并且可感染多種鳥類以及哺乳動物。流行 性感冒病毒是屬于正粘病毒科的包膜RNA病毒。其基因組由八個單鏈RNA區段組成，這些區 段編碼11種不同的蛋白、一種核蛋白（NP)、三種聚合酶蛋白（PA、PB1、以及PB2)、兩種基質蛋 白（Ml以及M2)、三種非結構性蛋白（NS1、NS2、以及PB1-F2)、以及兩種外膜糖蛋白：血球凝集 素(HA)以及神經氨酸酶(NA)。這些病毒是基于HA以及NA蛋白的抗原結構的區別而分類的， 其不同組合表示獨特的病毒亞型，這些亞型進一步被分類為特異的流行性感冒病毒株。盡 管所有已知的亞型都可以在鳥類中發現，當前流行的人甲型流行性感冒亞型是H1N1以及 H3N2。系統發育分析已證實血球凝集素細分為兩個主要的組:尤其在系統發育組1中的H1、 H2、H5以及H9亞型，以及尤其系統發育組2中的H3、H4以及H7亞型。
[0006] 乙型流行性感冒病毒株是嚴格地針對人的。乙型流行性感冒病毒株內的HA中的抗 原變化小于甲型株內觀察到的那些。乙型流行性感冒病毒的兩個遺傳上和抗原性上不同的 譜系在人中流行，如由B/山形/16/88(也稱為B/山形）以及B/維多利亞/2/87(B/維多利亞） 譜系（弗格森(Ferguson)等人，2003)代表的。盡管由乙型流行性感冒病毒引起的疾病的光 譜通常比由甲型流行性感冒病毒引起的更加溫和，仍頻繁觀察到需要住院治療的嚴重疾病 具有乙型流行性感冒感染。
[0007]已知中和該流行性感冒病毒的抗體主要針對血球凝集素(HA)。血球凝集素或HA是 一種三聚體糖蛋白，其被錨定到病毒衣并且具有雙功能：它負責結合到細胞表面受體唾液 酸并且攝取之后它介導病毒和內涵體膜的融合，導致在該細胞的胞液中釋放病毒RNAAA包 括大的頭部域以及較小的主干域。附接至該病毒膜是通過連接至該主干域的C-末端錨定序 列介導的。該蛋白在指定的環中被翻譯后切割以產生兩種多肽，即HA1和HA2(全長序列被稱 為HAO)。膜遠端頭部區主要源自于HA1，并且膜近端主干區主要來自HA2(圖1)。
[0008] 季節性流行性感冒疫苗必須每年更新的原因是該病毒的大的可變性。在血球凝集 素分子中，此變化具體地顯現在頭部域，其中抗原漂移和移位導致大量的不同變體。由于這 也是免疫顯性的區域，大部分中和抗體是針對此域并且通過干擾受體結合起作用。該頭部 域的免疫顯性和大的變化的組合也解釋了用具體株進行感染為什么不會導致對其他株的 免疫:通過第一次感染引發的抗體僅識別有限數目的與原發性感染的病毒緊密相關的毒 株。
[0009] 近來，已描述了缺少所有或基本上所有流行性感冒血球凝集素球狀頭部域的流行 性感冒血球凝集素主干域多肽，并且將其用于產生對該主干域多肽的一個或多個保守表位 的免疫應答。認為該主干域多肽的表位比球狀頭部域的高免疫原性區域具有較小免疫原 性，因此在該主干域多肽中缺少球狀頭部域可能允許發展針對該主干域多肽的一個或多個 表位的免疫應答(斯蒂爾(steel)等人，2010)。斯蒂爾（Steel)等人因此通過使A/波多黎各/ 8/1934(Η1Ν1)以及A/香港/1968(H3N2)株的來自HA-級序列的HA1的氨基酸殘基53至276缺 失并且將其用短的柔性連接序列GGGG替代而建立了新的分子。用H3HK68構建體對小鼠進行 疫苗接種不會引發與組1HA具有交叉反應性的抗血清。此外，如示于PCT/EP 2012/073706， 這些主干域多肽是高度不穩定的并且不會采取如通過缺少抗體結合(顯示結合到該主干區 中的保守表位)證明的正確構象。
[0010] 此外，博姆瑪坎蒂(Bommakan t i)等人(2010)描述了基于HA2的多肽，其包括HA2的 氨基酸殘基1-172、7_氨基酸接頭(GSAGSAG)、HA1的氨基酸殘基7-46、6_氨基酸接頭GSAGSA， 隨后為HA1的殘基290-321，在HA1中具有突變V297T、I300E、Y302T以及C305T。該設計是基于 H3HA的序列(A/香港/1968)。該多肽僅提供針對H3亞型(A/Phil/2/82)內的另一個流行性感 冒病毒株的交叉保護，而不提供針對H1亞型（A/PR/8/34)的交叉保護。在博姆瑪坎蒂 (Bommakanti)等人（2012)的一篇更近的論文中，描述了來自H1N1A/波多黎各/8/1934 (H1HA0HA6)的基于HA的主干域序列。在此多肽中，殘基55至302的等價物已經缺失，并且已 經進行 了突變 13111'、￥3141'、1316103195、？4060、？4091'、以及1^4160。基于!13的多肽和基于 HA的多肽兩者都表達于大腸桿菌，并且因此缺少作為天然存在的HA蛋白的部分的聚醣。當 表達于大腸桿菌中時，該多肽主要作為高分子量聚集體和小單體部分回收。以兩個表觀解 離常數即9和0.2μΜ，該多肽結合CR6261。作者們顯示用佐以100yg的CpG7909的20yg的蛋白 免疫(兩次，4周間隔）之后，小鼠可幸存于用同源H1N1A/波多黎各/8/1934病毒的1LD90進行 的激發。作者們也描述了循環置換的多肽可比得上以上針對A/香港/1/1968衍生的多肽所 述的那些。這些多肽是源自于來自H1N1A/波多黎各/8/1934、Η1Ν1Α/北卡羅來納州/20/99或 H1N1A/加利福尼亞/07/2009的HA，并且在H1N1A/波多黎各/8/1934(即相同亞型內）的小鼠 的溫和激發(1LD90)模型中可提供部分保護。當在中和測定中測試時，來自用這些多肽免疫 的豚鼠的血清未展現可檢測水平的中和。
[0011]因此仍存在對安全且有效的通用疫苗的需要，該疫苗刺激產生穩固的廣泛中和抗 體應答，并且提供針對當前和未來流行性感冒病毒株(季節性和大流行兩者)的廣泛集合的 保護，具體而言提供針對系統發育組1和/或組2內一個或多個甲型流行性感冒病毒亞型的 保護，以有效預防和治療流行性感冒。
[0012] 挺塗
[0013] 此處提供了多種流行性感冒血球凝集素主干域多肽，提供多種主干域多肽的方 法，包括這些多肽的組合物，包括這些多肽的疫苗及其使用方法。
[0014] 在第一方面，本發明提供了新的免疫原性多肽，這些多肽包括流行性感冒血球凝 集素主干域并且缺少球狀頭部，稱為流行性感冒血球凝集素(HA)主干域多肽。當給予至受 試者(具體而言人類受試者)時，這些多肽能夠誘導免疫應答。在不存在優勢表位(存在于膜 遠端頭部域中）的情況下，本發明的多肽將膜近端主干域HA分子的保守表位呈現給免疫系 統。為此，構成該頭部域的ΗΑ0蛋白的一級序列的部分被去除，并且剩下的氨基酸序列直接 地或在一些實施例中通過引入短的柔性連接序列（'接頭'）再連接以恢復氨基酸鏈的連續 性。所得到的序列通過引入特定突變被進一步修飾，這些特定突變穩定了該ΗΑ0分子的剩下 部分的天然3-維結構。這些免疫原性多肽不包括流行性感冒病毒的全長HA1和/或HA2。
[0015] 根據本發明，這些多肽是基于H1亞型的甲型流行性感冒病毒的HA。
[0016] 本發明提供多種流行性感冒血球凝集素主干域多肽，這些多肽包括(a)流行性感 冒血球凝集素 HA1域，該HA1域包括HA1N-末端主干區段，該HA1N-末端主干區段通過具有0-50個氨基酸殘基的連接序列共價連接至HA1C-末端主干區段，以及(b)流行性感冒血球凝集 素 HA2域，其中這些血球凝集素主干域多肽對在HA1和HA2之間的接合點處的蛋白酶切割具 有抗性，并且其中相比于野生型流行性感冒HA2域，連接HA2的A螺旋和螺旋CD的氨基酸序列 中的一個或多個氨基酸已經突變。
[0017] 在某些實施例中，本發明的多肽包括SEQ IDN0:1的位置337、340、352或353、或該 H1亞型的其他流行性感冒病毒中的等價位置上的一個或多個突變。突變意指特定位置上的 氨基酸已被不存在于野生型流行性感冒HA(即，該主干多肽所基于的流行性感冒病毒的HA) 中的對應位置上的另一個氨基酸取代。
[0018]在某些實施例中，本發明的多肽進一步包括將螺旋A的C-末端殘基連接至螺旋CD 的N-末端殘基的HA2氨基酸序列中的一個或多個突變，如圖1中指出的。
[0019] 在某些實施例中，該HA1N-末端主干區段包括HA1的氨基酸1-x，并且該HA1C-末端 主干區段包括HA1的氨基酸y-端（即HA1的C-末端氨基酸）。因此，在某些實施例中，該HA1區 段中的缺失包括從在位置χ+1處的氨基酸直至在位置y-Ι處的氨基酸并且包括在位置y-Ι處 的氨基酸的氨基酸序列。在某些實施例中，這些多肽不包括信號序列。在某些實施例中，該 HA1N-末端區段因此包括HA1的氨基酸p-x，其中p是該成熟HA分子的第一個氨基酸（例如在 SEQ ID N0:1的情況下p = 18)。技術人員將能夠制備此處所述的不具有信號肽(例如SEQ ID NO: 1的氨基酸1-17)的多肽。
[0020]在某些實施例中，本發明的多肽包含HA的細胞內序列以及跨膜域。在其他實施例 中，本發明的多肽不包括HA的細胞內序列以及跨膜域。在某些實施例中，該細胞內序列以及 跨膜序列，例如從該HA2域的位置519、520、521、522、523、524、525、526、527、526、528、529、 或530(或等價位置)至該HA2域的C-末端的氨基酸序列已被去除。
[0021 ]本發明的多肽不包括全長HA1。
[0022] 在某些實施例中，這些多肽是糖基化的。
[0023] 在某些實施例中，這些免疫原性多肽實質上比ΗΑ0小，優選地缺少所有或基本上所 有的HA球狀頭部。優選地，這些免疫原性多肽長度上不超過360,優選地不超過350、340、 330、320、310、305、300、295、290、285、280、275、或270個氨基酸。在某些實施例中，這些免疫 原性多肽長度上是從約250至約350,優選地從約260至約340,優選地從約270至約330,優選 地從約270至約330個氨基酸。
[0024]在某些實施例中，相比于HA1和HA2域所基于的HA的氨基酸序列，這些多肽進一步 在該HA1和/或HA2域中包括一個或多個另外的突變。
[0025] 本發明的多肽包括組1交叉中和抗體CR6261(如披露于W02008/028946)和/或抗體 CR9114(如描述于W0 2013/007770)的保守主干域表位，該抗體CR9114是能夠結合到并且中 和組1和組2甲型流行性感冒病毒兩者、連同乙型流行性感冒病毒的一種抗體。因此本發明 的另一個方面是提供多種HA主干域多肽，其中所述多肽穩定地呈現抗體CR6261和/或 CR9114的表位，如通過所述一個抗體或多個抗體結合至所述多肽表明的。在一個實施例中， 這些多肽不結合到CR8020以及CR8057(描述于W02010/130636)，它們是僅結合到H3流行性 感冒病毒的單克隆抗體。此處提供的流行性感冒血球凝集素主干域多肽適合用于能夠針對 多個甲型和/或乙型流行性感冒病毒株發生免疫應答的免疫原性組合物(例如疫苗）中。在 一個實施例中，這些流行性感冒血球凝集素主干域多肽能夠針對系統發育組1和/或組2的 甲型流行性感冒病毒株發生免疫應答，特別是針對系統發育組1和組2兩者的流行性感冒病 毒株。在一個實施例中，這些多肽能夠針對同源流行性感冒病毒株發生免疫應答。在一個實 施例中，這些多肽能夠針對相同和/或不同亞型的異源流行性感冒病毒株發生免疫應答。在 另一個實施例中，這些多肽能夠對系統發育組1和組2兩者的流行性感冒病毒株以及乙型流 行性感冒病毒株發生免疫應答。
[0026] 根據本發明的多肽可用于例如孤立型治療和/或預防和/或診斷由流行性感冒病 毒、特別是系統發育組1或2甲型流行性感冒病毒和/或乙型流行性感冒病毒引起的一種疾 病或病況，或與其他預防和/或治療性處理諸如(現存的或未來的）疫苗、抗病毒劑和/或單 克隆抗體組合。
[0027] 在另一個方面，本發明提供編碼這些流行性感冒HA主干域多肽的核酸分子。在又 另一個方面，本發明提供包括編碼這些免疫原性多肽的核酸的載體。
[0028] 在另一個方面，本發明提供在受試者中誘導免疫應答的方法，該方法包括向該受 試者給予根據本發明的多肽和/或核酸分子。
[0029] 在另一個方面，本發明提供包括根據本發明的多肽和/或核酸分子的免疫原性組 合物。此處提供的免疫原性組合物可以處于任何允許將這些組合物給予至受試者例如小 鼠、白鼬或人的形式。在特定實施例中，這些免疫原性組合物適合于人給藥。這些多肽、核酸 分子以及組合物可用于預防和/或治療流行性感冒病毒疾病的方法中和/或用于診斷目的。 這些組合物可進一步包括藥學上可接受的載體或賦形劑。在某些實施例中，此處描述的組 合物包括佐劑或與佐劑組合給予。
[0030] 在另一個方面，本發明提供用作疫苗的多肽、核酸和/或免疫原性組合物。本發明 具體而言涉及在預防和/或治療由系統發育組1和/或2的甲型流行性感冒病毒亞型和/或乙 型流行性感冒病毒引起的一種疾病或病況中用作疫苗的免疫原性多肽、核酸和/或免疫原 性組合物。
[0031] 根據本發明的多肽的不同實施例以及用途將從以下本發明的詳細描述中變得清 晰。
[0032] 附圖簡要說明
[0033] 里1顯示了如以天然三聚體存在的處于融合前狀態的HA單體的模型。HA1是以淺灰 色示出，HA2是以深灰色示出。指明了螺旋A(CR6261的表位的重要部分）以及螺旋CD(三聚體 接口的部分），還指明了連接這些二級結構元素的環。也指明了HA1的C-末端以及HA2的N-末 端。融合肽位于HA2的N-末端。
[0034] 圖2.使用生物膜層干涉技術將本發明的可溶多肽結合至單克隆抗體CR6261以及 CR9114。頂圖顯示暴露于變化濃度的本發明的可溶多肽的固定化單克隆抗體的個體結合曲 線，底圖顯示用以估計Kd的穩態分析。A:sl27HlSEQ ID NOJeddSeBASEQ ID N0:67<X: s74H9SEQ ID N0:65〇D：s6E12SEQ ID N0:69〇E：s55G7SEQ ID N0:68〇
[0035] 圖3.在不存在和存在CR8020、CR6261以及CR9114的Fab片段的情況下，本發明的可 溶多肽的尺寸排阻色譜。對于本發明的所有可溶多肽，對CR6261和CR9114Fab片段觀察到復 合體形成，但對CR8020Fab片段未觀察到。A:sl27HlSEQ ID NOiejdSeBASEQ ID N0:67。 C：s74H9SEQ ID N0:65〇D：s6E12SEQ ID N0:69〇E：s55G7SEQ ID N0:68〇
[0036] 圖4.本發明的多肽s74H9SEQ IDN0:65和s86B4SEQIDN0:67在致死的流行性感 冒Η1N1A/NL/60 2/09激發模型中的保護效力的評價。A :頂行：陰性（PBS)和陽性對照 (CR6261)組的存活率、平均體重改變以及臨床中值得分。底行：用s74H9或s86B4免疫的實驗 組的存活率、平均體重改變以及臨床中值得分。出于比較的原因，還顯示了陰性對照PBS組。 B:s74H9(SEQ ID N0:65)和s86B4(SEQ ID N0:67)的免疫原性。頂行：左圖和中圖：免疫誘導 能夠識別同源抗原（s74H9左圖，s86B4中圖）連同來自H1N1A/布里斯班/59/07的全長HA(右 圖）的抗體，如通過ELISA確定的。底行:在競爭ELISA中誘導的抗體能夠與CR9114競爭結合 到來自H1N1A/布里斯班/59/07的全長HA(左圖）。出于比較的原因，在獨立的圖中指明了未 標記的CR9114(即自我競爭)和非結合單克隆抗體CR8020(兩者都從5μg/ml起始濃度連續稀 釋）的克爭水平。
[0037] 圖5.本發明的多肽sl27Hl(SEQ ID NO:66)在致死的流行性感冒H1N1A/波多黎各 (Puerto Rico)/8/1934激發模型中的保護效力的評價。A:頂行：陰性(PBS)和陽性對照 (CR6261)組的存活率、平均體重改變以及臨床中值得分。底行：用s 127H1 (SEQ ID N0:35)免 疫的實驗組的存活率、平均體重改變以及臨床中值得分。出于比較的原因，還顯示了陰性對 照PBS組。
[0038] B:sl27Hl(SEQ ID N0:35)的免疫原性。頂行:免疫誘導能夠識別同源抗原S127H1 (SEQ ID N0:35)(左圖）連同來自H1N1A/布里斯班/59/07的全長HA(右圖）的抗體，如通過 ELISA確定的。底行:在競爭ELISA中誘導的抗體能夠與CR9114競爭結合到來自H1N1A/布里 斯班/59/07的全長HA(左圖）。出于比較的原因，在獨立的圖中指明了未標記的CR9114(即自 我競爭)和非結合單克隆抗體CR8020(兩者都從5μg/ml起始濃度連續稀釋）的競爭水平。
[0039] 圖6.在顯示與CR6261的改善結合的集合1序列中的指明位置處的氨基酸觀察到的 和期望的出現頻率。值被表示為占顯示改善的CR6261結合的集合1序列的總數目的百分比。 期望值被計算為100%除以包括在該集合中的每個位置處的可變氨基酸的數目。
[0040] .在來自集合1的改善的CR6261結合物中的氨基酸組合的出現頻率。根據在左 邊指明的位置處氨基酸的存在對與CR6261具有改善的結合的序列進行分組，并且每個組合 的頻度被計算為占顯示改善的CR6261結合的集合1序列的總數目的百分比。對更優勢的組 合進行加框。A.對融合肽區域中組合序列的分析B.對B-環區域的分析。
[0041 ]圖8.在顯示與CR6261的改善結合的集合2序列中的指明位置處的氨基酸觀察到的 和期望的出現頻率。值被表示為占顯示改善的CR6261結合的集合2序列的總數目的百分比。 期望值被計算為100%除以包括在該集合中的每個位置處的可變氨基酸的數目。
[0042]圖9.在來自集合2的改善的CR6261結合物中的氨基酸組合的出現頻率。根據在左 邊指明的位置處氨基酸的存在對與CR6261具有改善的結合的序列進行分組，并且每個組合 的頻度被計算為占顯示改善的CR6261結合的集合2序列的總數目的百分比。對更優勢的組 合進行加框。在位置402處的變化未包括在該分析中，因為所有改善的結合序列在此位置包 含Met，而對于位置352僅考慮了包含Phe或Tyr的序列。A.對融合肽區域中組合序列的分析 B.對B-環區域的分析。
[0043]
[0044] 以下給出如本發明中所用的術語的定義。
[0045] 根據本發明的氨基酸可以是二十種天然存在(或'標準'氨基酸）的任一種或其變 體，比如例如D-脯氨酸(脯氨酸的D-對映體)或在蛋白質中未天然發現的任何變體，比如例 如正亮氨酸。這些標準氨基酸可以基于其性質分成若干群組。重要因素是電荷、親水性或疏 水性、尺寸以及官能團。這些性質對于蛋白質結構和蛋白質-蛋白質相互作用來說是重要 的。一些氨基酸具有特殊的性質，例如可以與其他半胱氨酸殘基形成共價二硫鍵(或二硫橋 鍵)的半胱氨酸，形成到多肽主鏈的環的脯氨酸，以及比其他氨基酸更靈活的甘氨酸。表2展 示這些標準氨基酸的縮寫和性質。
[0046] 術語"氨基酸序列一致性"是指一對對齊的氨基酸序列之間的一致性或相似性程 度，通常表示為百分比。百分比同一性是以下候選序列中的氨基酸殘基百分比，該候選序列 與在比對序列并且引入缺口（如果必要的話，以實現最大序列同源性百分比）之后該肽中的 對應氨基酸殘基是相同的（即，比對中在給出位置處的氨基酸殘基是相同的殘基)或相似的 (即，比對中在給出位置處的氨基酸取代是保守性取代，如以下討論的）。序列同源性包括序 列一致性以及相似性的百分比是使用本領域中熟知的序列比對技術確定的，諸如通過目測 以及數學計算，或更優選地，該比較是通過使用計算機程序比較序列信息進行的。一種示例 性的優選計算機程序是遺傳學計算機組(GCG;麥迪遜(Madison)，威斯康星州(Wis.))威斯 康星州程序包版本10.0程序，'GAP'（德弗羅(Devereux)等人(1984))。
[0047] "保守性取代"是指一類的氨基酸被相同類的另一個氨基酸替代。在具體的實施例 中，保守性取代不改變多肽的結構或功能，或兩者。用于保守性取代目的的氨基酸類別包括 疏水的（例如Met，Ala，Val，Leu)、中性親水(例如Cys，Ser，Thr)、酸性(例如Asp，Glu)、堿性 (例如4811，6111，!^8，1^8,4作）、構象打斷者（例如617，？1'〇)以及芳香族的（例如1'印，171·， Phe) 〇
[0048] 如此處使用的，術語"疾病"以及"障礙"可互換地使用，以指代受試者中的病況。在 一些實施例中，該病況是病毒感染，特別是流行性感冒病毒感染。在特定實施例中，術語"疾 病"是指由于病毒在細胞或受試者中的存在、或通過該病毒對細胞或受試者的侵染導致的 病理狀態。在某些實施例中，該病況是受試者中的疾病，其嚴重性通過給予免疫原性組合物 來誘導該受試者中的免疫應答而被降低。
[0049]如此處使用的，在向受試者給予治療的背景下術語"有效量"是指具有一個或多個 預防和/或治療效果的治療的量。在某些實施例中，在向受試者給予治療的背景下術語"有 效量"是指足夠實現如下的治療量:流行性感冒病毒感染、與其相關的疾病或癥狀的嚴重性 的降低或改善，諸如但不限于流行性感冒病毒感染、與其相關的疾病或癥狀的持續時間減 少，對流行性感冒病毒感染、與其相關的疾病或癥狀的進展的預防，對流行性感冒病毒感 染、與其相關的疾病或癥狀的發展或發作或復發的預防，流行性感冒病毒從一個受試者傳 播至另一個受試者的情況的預防或減少，受試者住院和/或住院時間長短的減少，患有流行 性感冒病毒感染或與其相關的疾病的受試者的存活率的增加，流行性感冒病毒感染或與其 相關的疾病的消除，流行性感冒病毒復制的抑制或減少，流行性感冒病毒滴度的減少;和/ 或另一種治療的一個或多個預防或治療作用的增強和/或改善。在某些實施例中，該有效量 不導致免受流行性感冒病毒疾病的完全保護，但比較于未治療的受試者導致更低的滴度或 減少數目的流行性感冒病毒。流行性感冒病毒的滴度、數目或總負擔上的減少的益處包括 但不限于該感染的嚴重癥狀更少，該感染的癥狀更少，并且與該感染關聯的疾病的時間長 短上減少。
[0050] 如在此所用，術語"宿主"意欲指已經引入了載體(諸如克隆載體或表達載體)的生 物體或細胞。生物體或細胞可以是原核或真核的。優選地，宿主包括被分離的宿主細胞，例 如培養物中的宿主細胞。術語"宿主細胞"僅意味著這些細胞被修飾以（過度)_表達本發明 的多肽。應理解，術語宿主意欲不僅指具體主題生物體或細胞，而且還指此類生物體或細胞 的子代。因為某些修飾可以由于或者突變或者環境影響而在后代中發生，所以此類子代可 以實際上與親本生物體或細胞不相同，但仍包括在如在此所用的術語"宿主"的范圍內。
[0051] 如在此所用，術語"包括（included)"或"包括著（including)"被視為后面有措辭 "無限制"。
[0052] 如此處使用的，術語"感染"意指通過病毒在細胞或受試者中的擴增和/或存在進 行的侵染。在一個實施例中，感染是"活性"感染，即其中病毒在細胞或受試者中復制的一種 感染。這樣的感染是通過該病毒從最初被該病毒感染的細胞、組織、和/或器官傳播至其他 細胞、組織、和/或器官來表征。感染也可以是潛伏感染，即其中該病毒未復制的一種感染。 在某些實施例中，感染是指由于病毒在細胞或受試者中的存在、或通過該病毒對細胞或受 試者的侵染導致的病理狀態